HPLC法测定疏风解毒胶囊中大黄素的含量

HPLC法测定疏风解毒胶囊中大黄素的含量

杨春杰丁连峰

杨春杰丁连峰（安徽济人有限公司236800）

【摘要】目的建立疏风解毒胶囊中大黄素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，采用WondaSil@-C18色谱柱，流动相为甲醇-0.1%磷酸(80：20)，流速1.0ml/min，检测波长：254nm，柱温为25℃进行检测。结果大黄素在10.256～76.92μg/ml范围内呈良好线形关系，平均回收率为97.96%，RSD=0.72%。结论该方法灵敏度高、准确、操作简便，可用于疏风解毒胶囊中大黄素的含量测定。

【关键词】疏风解毒胶囊大黄素高效液相色谱

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）28-0079-02

QuantitationofEmodininAnti-virusCapsulebyHPLC

YANGChun-jie1，DINGLing-feng1

(AnhuiJirenPharmaceuticalCO,LTD;Bozhou236800)

【Abstract】Objection:ToassayEmodincontentdeterminationmethodinAnti-virusCapsule.Method:ThecolumnwasWondaSil@-C18(5μm,4.6mm×150mm).Themobilephaseconsistedofmethanol-0.1%phosphoricacidsolution(80∶20),andtheflowratewas1.0ml/minthedetectionwavelengthwas254nm，thecolumntemperaturewas35℃.Results:Thelinearrangeofthemethodwas10.256～76.92μg/ml（r=0.9999）themeanrecoverywas97.96%.RSD=0.72%(n=9).Conclusions:Themethodissimplesensitiveandreproducible.

【KeyWords】Anti-virusCapsuleEmodinHPLC

“疏风解毒胶囊”为安徽济人药业有限公司2009年经国家食品药品监督管理局批准生产的中成药，制剂规格为每粒0.52g。该方由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡等8味中药组成，具有祛风清热、解毒利咽之功效，主要用于急性上呼吸道感染、风热感冒，症见发热、恶风，咽喉局部红肿疼痛，头痛，鼻塞，流鼻涕，咳嗽等，临床显著疗效。本文对处方中君药虎杖的主要活性成分之一——大黄素，采用高效液相色谱法进行了含量测定。实验证明，该方法可操作性强，检测灵敏度高，结果准确可靠，重现性好，为该产品建立了大黄素的含量测定方法。

1.仪器与试剂、试药

1.1仪器SHIMADZU高效液相色谱仪（日本岛津公司）：两个LC-20AT泵（日本岛津公司）、SPD-20A紫外检测器（日本岛津公司），WondaSil@-C18(4.6×150mm，5μm)色谱柱（日本岛津公司），LCsolutionLite数据处理系统，XP26型百万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多公司），AR1140型万分之一电子分析天平（奥豪斯国际贸易（上海）有限公司），DT-230A柱温箱(O-CHROM)，HH数显恒温水浴锅（江苏省金坛市金诚国盛实验仪器厂）。

1.2试剂、试药大黄素对照品（批号110756-200110，中国药品生物制品检定所提供）；甲醇（天津四友有限公司，色谱纯）；磷酸（国药集团化学试剂有限公司，分析纯）；三氯甲烷（上海苏懿化学试剂有限公司，分析纯）；盐酸（上海苏懿化学试剂有限公司，分析纯）；纯化水自制。

2.方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：WondaSil@-C18(4.6×150mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(80：20)；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；进样量：10μl；理论板数：按大黄素峰计算应不低于2000。

2.2对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取干燥后大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，摇匀，制得每1ml含大黄素25.40μg的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取本品0.4g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水30ml，浓盐酸3ml溶解，精密加入三氯甲烷50ml，置水浴上加热回流提取3次，每次1小时，分别冷却，分别于分液漏斗中分取三氯甲烷液；合并三次三氯甲烷液，减压浓缩三氯甲烷至干，残渣加甲醇使溶解，转移置50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.2.3阴性对照液的制备按处方组成，取除虎杖外的其余药味，按工艺要求制成缺虎杖阴性样品，按2.2.2项下方法制备成阴性对照液。

2.3检测坡长的选择精密称取大黄素对照品适量加甲醇溶解，制成每1ml含0.025mg的溶液,以甲醇为空白，在可见－紫外分光光度仪上进行紫外扫描，确定最大吸收波长。结果，大黄素对照品溶液在253nm处有最大吸收。参照《中国药典》2010年版一部，虎杖中大黄素的HPLC测定波长为254nm，故确定254nm作为本品中大黄素含量测定的吸收波长[1]。

2.4线性关系考察分别精密吸取大黄素对照品溶液（128.2μg/ml）2ml、3ml、4ml、5ml、10ml、15ml至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即可，分别进样10μl，以峰面积对对照品量进行线性回归，得回归方程为y=41878x+10684，r=0.9999，结果表明，大黄素在10.256～76.92μg/ml质量范围内呈良好的线性关系。（见图1）

A大黄素对照品B供试品C阴性对照液

2.7供试品稳定性试验取供试品（批号：121001）0.4g，精密称定，按2.2.2方法制备成供试品溶液，室温放置，分别在0、1、2、3、6、12、24h进样10μl，测定峰面积，计算样品中大黄素含量，结果样品液在24h内稳定，RSD=0.83%。

2.8重现性试验取同一批号供试品（批号：121002）6份，分别取0.4g，精密称定，按供试品溶液制备方法及测定方法分别制备和测定，计算大黄素的含量，结果RSD=1.21%。

2.9加样回收率试验取已知大黄素含量（6.6mg/g）的样品（批号：121003）共9份，分别称取约0.4g，精密称定，每份依次加入大黄素对照品0.5～1.5mg，按2.2.2供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件进行分析，进行回收率测定（n＝9），结果平均加样回收率为97.96%，RSD=0.72%（见表1）。

表1大黄素回收率试验（n=9）

3.讨论

本实验采用HPLC方法测定疏风解毒胶囊中大黄素的含量，实验结果准确性、稳定性、重现性强，具有可操作性，方法简单易于操作，符合企业工业化生产的实际需要。

样品处理时，大黄素为蒽醌类衍生物羟基蒽醌类，多采用三氯甲烷、甲醇等有机溶剂进行提取。提取方法多采用连续回流提取法[2]。本法采用酸水解三氯甲烷回流一步完成，操作简单，节省时间。另比较采用硫酸水解法和盐酸水解法，按水解三氯甲烷回流一步完成制备的样品，测定含量。结果表明，以盐酸水解提取大黄素含量高，且硫酸提取的样品有碳化现象，因此选定盐酸水解的提取的方式。

参考文献

[1]《中国药典》2010年版一部[S].国家药典委员会编.北京：中国医药科技出版社2010.1:326-327

[2]胡艳花编.中药有效成分提取分离技术[M].北京：化学工业出版社2005.1：153-159.

基金项目：科技型中小企业技术创新基金（立项代码：10C26213404286）