锡林郭勒盟全沟硬蜱携带伯氏疏螺旋体实验室调查

锡林郭勒盟全沟硬蜱携带伯氏疏螺旋体实验室调查

张妍青

内蒙古锡林郭勒盟疾病预防控制中心内蒙古锡林郭勒盟026000

摘要：目的：伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi），是莱姆病的病原体。莱姆病以神经系统损害为主要临床表现。以脑膜炎、脑炎、颅神经炎、运动和感觉神经炎等方式表现出来。内蒙古锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗阿拉坦合力苏木蜱虫在春夏季节大量存在，人畜被叮咬情况非常普遍，为了解阿拉坦合力苏木蜱虫是否携带伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi），以便为制定防控措施提供科学依据。方法：由于过去常用的荧光抗体染色法假阳性较高，故本次调查采用更为灵敏的聚合酶链式反应（PCR）技术结合荧光探针技术，对伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi）的三种致病基因群（B.burgdorferisensustricto，B，garinii和B.afzelii）的特异性DNA核算片段进行检测。结果：捕捉蜱800余只，按大小不同分为90组，结果阳性1组，阳性率1.11%。结论：说明内蒙古自治区锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗阿拉坦合力苏木草原革蜱携带伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi）

关键词：伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi）；携带；调查

引言

莱姆病（Lymedisease）是一种自然疫源性疾病，自1977年美国Steere首次报道以来⑴，国内外莱姆病的研究进展很快。为了解内蒙古锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗阿拉坦合力苏木蜱虫是否携带伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi），以便为制定防控措施提供科学依据开展此次调查工作。

中心部分：

方法：以内蒙古锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗阿拉坦合力苏木为调查地点，采用布旗法捕捉蜱虫，冷藏保存，在实验室按大小分组研磨然后加入裂解液提取DNA，按照检验方法要求进行核酸检测。

仪器：核酸扩增仪采用ABIsteponeplus，冷冻离心机为Centrifuge5417R，金属浴采用杭州奥盛MK-10干式恒温器。

试剂：试剂采用上海之江生物科技有限公司生产的伯氏疏螺旋体核酸测定试剂盒。

实验过程：

1、DNA提取：将捕捉的蜱虫按比例分组后放入研钵，加入液氮研磨，然后加入1ml灭菌生理盐水震荡混匀，加入100ul裂解液震荡10秒，990C干浴10分钟，13000转离心10分钟，保留上清备用。

2、试剂配置：

⑴取n×35ulBb核算荧光混合液A与n×1ul内部对照品A，以及n×0.4ul酶（Taq＋UNG）（n为反应管数），震荡混匀数秒，3000转离心数秒。⑵取n×35ulBb核算荧光混合液B与n×1ul内部对照品A，以及n×0.4ul酶（Taq＋UNG）（n为反应管数），震荡混匀数秒，3000转离心数秒。⑶取n×35ulBb核算荧光混合液C与n×1ul内部对照品B，以及n×0.4ul酶（Taq＋UNG）（n为反应管数），震荡混匀数秒，3000转离心数秒。

加样：分别取上述三种混合液36ul置于PCR管中，然后将待检样品、阳性对照、阴性对照各4ul分别加入PCR管中，盖好管盖，离心数秒后立即进行PCR扩增反应。

核酸扩增：反应管置于定量荧光PCR仪上，设置反应程序如下：370C×2min；940C×2min；再按照930C×15sec→600C×60sec，循环40次；反应体系为40ul单点荧光检测在600C。荧光通道选择FAM和HEX。

基线调整取6-15个循环的荧光信号，阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点。

质量控制和实验结果的判断见表一、二、三。

结果：共捕捉草原革蜱800余只，经过挑选，按体型大小分为90组，经实验室检验，阳性组一组，阳性率为1.11%。

讨论：蜱的季节消长情况从蜱5月上旬开始活动，7月底基本消失；其季节消长与新疆蜱相比⑵，出现时间晚一旬。在蜱大量出现的时候组织人员集中捕捉，共捕捉草原革蜱800余只，经过挑选，按体型大小分为90组，经实验室检验，阳性组一组，阳性率为1.11%。说明内蒙古自治区锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗阿拉坦合力苏木草原革蜱携带伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi），由于高峰季节蜱虫密度大，且正赶上牧民生产较繁忙的季节，对牧民的健康造成威胁，所以应注重灭蜱和自身防护，保护健康。

参考文献：

[1]SteereACctal.ArHritisRheum1977：20：7.

[2]张起恩等。.第二节全国三体病讨论会专辑[J].。中华流行病学杂志，1989；19（3）：336~339。