T-SPOT.TB在结核病诊断中的临床意义

T-SPOT.TB在结核病诊断中的临床意义

迟维维姚国忠陈林桂许萍

1.武警上海总队医院呼吸内科；2.武警上海总队医院呼吸内科；3.武警上海总队医院呼吸内科

摘要：目的：分析γ-干扰素其自身释放的T细胞斑点去进行试验（T-SPOT.TB）在结核病诊断中存在的意义。方法：本文主要选择在2015年1月到12月之间在我院进行住院治疗的肺结核病人共30例，结核性的胸膜炎为30例，结核性的脑膜炎为9例完成T-SPOT.TB相关的检测，同时分别对于他们的血清还有胸腔积液以及脑脊液给予腺苷脱氨酶（ADA）的检测，在医院工作人员的进行身体检查的时候，使用T-SPOT.TB进行检测并且对他们的血清进行ADA检测。结果：结核病患者30例，T-SPOT.TB阳性30例，ADA阳性25例，结核性胸膜炎30例，T-SPOT.TB阳性30例，ADA阳性27例，结核性9例脑膜炎，SPOT.TB阳性9例，ADA阳性5例。一家医院共有420名身体检查人员，做T-SPOT检测共291人，阳性54人，阳性率为18.6％，阴性237人，经调查后发现，54人有三人人有结核病治疗，已治愈。其他51人无症状（如：下午发热，盗汗等），无迹象（如：胸部X线损伤，包括钙化，无胸腔积液）。结论：T-SPOT.TB是检测结核病感染最准确的方法之一。灵敏度非常高。所有结核病患者均为阳性，未感染结核病的患者一般均为阳性，可见：T-SPOT.TB阳性对结核病的诊断有很强的作用，可是其自身有着一定的假阳性，并通过ADA阳性诊断结核病有一定的假阴性，两者结合，可以显着提高阳性率和特异性但T-SPOT.TB检测阴性，基本可排除结核病（HIV病人除外），其对于结核病的排除有着非常主要的意义。

关键词：T-SPOT.TB；结核病；阴性排除

1.资料和方法

1.1研究的对象为在2015年1月至12月在我院住院结核病患者随机抽取30例，结核性胸膜炎30例，结核性脑膜炎9例，首例T-SPOT.TB检测和血清，胸腔积液和脑脊液ADA检测；第二组为医院，对于医生和医护人员以及行政与后勤人员进行健康考察，男100人，女191人，共291人。

1.2方法

1.2.1样本收集69例患者在医院，医生首先与患者沟通，患者同意护士在病人身上做其他血液检查，抽取肝素锂抗凝剂5ml，倒置混合。结核性胸膜炎30例，在患者诊断为胸腔积液时多留一根管用于ADA检测，结核性脑膜炎9例，提取脑脊液为患者留多进行ADA检查；在医院工作人员检查中，收集生化血液，收集静脉血5ml，在试管中含有肝素锂抗凝剂，立即颠倒混合5-8次，备用。

1.2.2酶联免疫斑点测定根据T-SPOT.TB（由OxfordImmunotecLtd，UK制造）试剂盒的说明书进行操作。采用密度梯度法提取单核细胞（PBMC），用细胞培养液将单核细胞浓度调整至2.5×109/L。在用抗-IFN.7抗体微板包被的四个孔中，添加细胞培养基作为阴性对照，植物血凝素PHA）作为阳性对照，结核分枝杆菌特异性混合多肽A和B含有EsAT.6和CFP10（OxfordImmunotecLtd，OxfordUK）。然后向每个孔中加入上述细胞悬液100μl，并轻轻混合。将板在37℃下培养16-20小时后，将板用PBS洗涤四次，加入碱性磷酸酶标记的小鼠抗人IFN7单克隆抗体，并在2-8℃温和混合孵育1小时。用PBS清洗4次。最后，向每个孔中加入底物BCIP/NBTPLUS，并在室温下静置7分钟后观察结果，并在放大镜（或显微镜）下进行斑点计数。

1.2.3结果判断根据试剂盒说明：如果负控制孔SFC为0-5，则试验孔SFC-负控制孔SFC≥6为正，如果负控制孔SFC≥6，试验孔SFC≥2次负控制孔SFC为阳性。

1.2.4ADA的检测主要是使用美国贝克曼公司其生产的仪器DXC800以及原装进口的试剂去对其进行测定的，血清ADA>25，胸腔积液ADA>40，脑脊液ADA>10为阳性。

1.3统计学方式主要是使用X2检验去对组间的差异进行计算，P<0.05为差异其有着一定的统计学意义。

2结果

T-SPOT.TB法与ADA方法相比，结核组X2=5.45，P<0.05，结核性胸膜炎组X2=3.15，P>0.05，结核性脑膜炎组X2=5.1，P<0.05。因此，对于结核病和脑膜炎的诊断，阳性符合率的T-SPOT.TB方法明显高于ADA方法，差异有统计学意义；并用于诊断结核性胸膜炎，T-SPOT.TB法和胸腔积液ADA法，差异无统计学意义。T-SPOT.TB法与ADA法组合X2=10.78，P<0.05，差异有统计学意义。

呼吸病房和其他病房无显着性差异，X2=1.66，P>0.05，差异无统计学意义；呼吸科和医疗部门X2=0.76，P>0.05，差异无统计学意义；IL=0.21，P>0.05，差异无统计学意义；其他病房部门和物流部门X2=5.22，P<0.05，差异有统计学意义；其他病房部门和医疗部门X2=0.21，P>0.05，2.10，P>0.05，差异无统计学意义；医疗部门和物流部门，X2=2.15，P>0.05，差异无统计学意义。在291例患者中，阳性率为18.6％，阳性率分别为19.1％和22.22％，与王森，卢立平相比。经调查后，我发现三人中有54人患有结核病和治疗，已经治疗完成并且停药，3人分别是呼吸科和其他病房科室，还有后勤科室，可以看出其病症的分布并未有集中的现象。其他的51人都没有起到的症状经调查体检结果，其都并未患有结核病。X2=108，P<0.05，差异有统计学意义。

3讨论

通过循证医学检测每组人群中的T-SPOT.TB和ADA。结核性胸膜炎组T-SPOT.TB和胸腔积液ADA检查均不同统计学意义，其他病例T-SPOT.TB检测阳性符合率均高于ADA检测，差异有统计学意义。T-SPOT.TB作为检测结核病感染的最准确方法，敏感性极高，所有患者均为阳性检测结果：72/72包括治愈和现在的患者，阳性率100％感染结核病和目前无法解释的检测结果为阳性，虽然他不是这种疾病，但研究51例。因此，简单的T-SPOT.TB测试阳性作为“结核病”诊断有一定的假阳性，简单的ADA检测作为“结核病”诊断有一定的假阴性，临床医生应结合两项或其他检测结核诊断；但T-SPOT.TB检测对结核病的排除具有重要意义。

T-SPOT.TB试验已广泛应用于我院医院生殖疾病（特别是不孕症）和骨关节炎，自身免疫性疾病等部门，以取代结核菌素试验。作为结核病排除试验，目前结核菌素试验结束由于BCG疫苗接种的效果和临界值的结果难以判断情况，效果良好。基于SFC的T-SPOT.TB检测结果明确易于判断，大大提高了结核病诊断阳性率。阴性检测结果对结核病快速稳定，具有良好的敏感性和特异性。肺外结核病等疾病的鉴别诊断意义重大。

T-SPOT.TB检测也有一些缺点和难题要解决，如检测步骤复杂，操作人员的技术和实验室条件相当高，仪器和试剂的价格等，这使得T-SPOT。结核病检测只有在一些发达国家，国家和地区的医疗，生活水平相对较高，许多低收入的结核病疫情不能普及。本研究缺乏对患者数量的限制，样本量小，在一定程度上影响了结果的准确性。

参考文献：

[1]人类免疫缺陷病毒感染者CD4+T淋巴细胞计数与结核分枝杆菌共感染的相关性，中华传染病杂志2012年第6期，张馨，蒋为民等

[2]《全国第五次结核病流行病学现场调查》，卫生部疾病预防控制局，2011年3月23日，郝阳。

[3]血清学诊断方法及T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用，中华临床感染病杂志2015年2月第6卷第1期，13-17页，王森，陈嘉臻等。

[4]以T-SPOT.TB检测为依据的结核病人密接者感染状况及影响因素研究。现代预防医学2015年第40卷第3期，568-570页，路丽苹，洪建军，金晓萍，沈红英。