MiRNAlet-7a在乳腺癌中的表达及其意义

MiRNAlet-7a在乳腺癌中的表达及其意义

刘寒1牛昀2

1.天津市南开医院；2.天津医科大学附属肿瘤医院

摘要：目的：研究miRNAlet-7a在乳腺癌浸润性导管癌中的表达情况，分析其与各临床病理特征的关系。方法：随机选取2003年1月至2004年6月间的乳腺浸润性导管癌病例168例，用原位杂交的方法检测miRNAlet-7a的表达，结合临床病理资料分析let-7a与乳腺浸润性导管癌的临床病理特征的关系。结果：let-7a在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率为70.2%（118/168），其在癌周正常组织中阳性表达率为84%（141/168），差异有统计学意义（P=0.019），miRNAlet-7a表达与年龄、肿瘤大小、ER、p53、ki67、Her-2差异无统计学意义（P>0.05），let-7a在不同组织学分级表达差异有统计学意义（P=0.002）。结论：let-7a的表达与组织学分级密切相关，证明作为抑癌基因在乳腺癌患者中检测miRNAlet-7a的表达有望作为评估其预后的指标，并为乳腺癌的靶向治疗提供新的靶点和理论依据。

关键词：MiRNAlet-7a；原位杂交；乳腺癌

近年来，乳腺癌的发病率呈明显上升趋势，已成为我国女性发病率最高的恶性肿瘤[1]。乳腺癌的发生发展、转移和抗药与一些内源性miRNA有关[2]，miRNAlet-7是一类抑癌基因在人类大部分恶性肿瘤中低表达。let-7a是let-7家族的重要一员，本研究用原位杂交的方法检测let-7a在乳腺浸润性导管癌中的表达，结合临床病理资料分析let-7a与乳腺浸润性导管癌的临床病理特征的关系。

1.材料与方法

1.1病例资料

随机选取天津医科大学附属肿瘤医院2003年1月至2004年6月间经手术切除病理证实的乳腺浸润性导管癌石蜡包埋组织168例，所有病例均为女性，中位年龄53.5岁。所有标本均经4%甲醛溶液固定，规范取材，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片。所有病例均由两名副高级及以上职称的病理医师阅片，经光镜明确诊断，临床病理资料完整。

1.2原位杂交及免疫组化

采用S-P法检测ER、Her-2、P53及Ki67的表达，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，染色结果用DAB显色，试剂均购自北京中杉金桥生物技术公司。采用原位杂交法检测let-7a的表达，用PBS缓冲液代替探针作为阴性对照，染色结果用BCIP/NBT显色，试剂购自Exqon公司。

1.4统计学分析

采用SPSS18.0统计软件包进行统计分析，以P<0.05作为差异有统计学意义的检验标准。采用χ2检验进行let-7a表达情况与各临床病理特征间的比较。

2.结果

2.1临床病理特征

依据2012年《WHO乳腺及女性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》[4]中乳腺癌的诊断标准，168例乳腺癌均为非特殊型浸润性导管癌，所有病例均为女性，中位年龄53.3岁，其中小于50岁68例，大于或等于50岁100例。肿瘤直径小于或等于5cm140例，大于5cm28例。组织学分级Ⅰ级14例，Ⅱ级116例，Ⅲ级38例。ER阳性52例，Her-2阳性53例，Ki-67阳性122例，P53阳性43例（图1）。

表1.乳腺癌let-7a表达与病理及生物学特征的关系

3.讨论

miRNA在生物体中的表达具有时序性、保守性和组织特异性，提示microRNA的分布可能决定组织和细胞的功能特异性[5]。研究发现miRNA能抑制它们的靶标—mRNA，通过干扰RNA来关闭基因的表达，从而阻断翻译过程，在调节发育和细胞分化阶段的基因表达过程中起到重要的作用，而且推测这种小分子调节着人类三分之一的基因，这对于正常和癌变组织中细胞的基因调节方面提供了重要线索，在癌症逐渐形成中具有重要意义。

miRNA与多种肿瘤的发生密切相关，它的作用靶点可以为癌基因或抑癌基因。而let-7是目前研究较为广泛的miRNA之一，存在于多种物种中，具有许多同源序列，统称为let-7家族，大都定位于9、11、22号染色体上。

Let-7是一类抑癌基因，在人类大部分恶性肿瘤中低表达。研究发现[6]，let-7家族与肺癌、乳腺癌、子宫癌、结肠癌、肝癌等有关的脆性位点有联系，并通过与癌基因RAS、HMGA2、MYC及IL6等的3’UTR结合，负调控靶标基因的表达，同时作用细胞周期蛋白调控细胞分化，从而抑制肿瘤的发生发展。

2007年Sempere等[7]用原位杂交方法对大于100例的乳腺癌患者标本在细胞经历恶性转化过程中miRNA的表达情况进行了分析，发现let-7a在肿瘤中表达减少。Zhao[8]等利用miRNA芯片对乳腺石蜡组织中提取的RNA进行分析，结果发现，与乳腺良性病变相比，乳腺导管内癌和浸润性癌中let-7家族表达下调。

本研究中let-7a在乳腺浸润性导管癌中的表达低于在在正常组织中的表达差异有统计学意义。进一步表明let-7的表达与多种肿瘤相关，在肿瘤中起到抑癌基因的作用。let-7a的表达与组织学分级密切相关，证明作为抑癌基因在乳腺癌患者中检测miRNAlet-7a的表达有望作为评估其预后的指标，并为乳腺癌的靶向治疗提供新的靶点和理论依据。

参考文献：

[1]EldehnaWM，El-NaggarDH，HamedAR，etal.One-potthree-componentsynthesisofnovelspirooxindoleswithpotentialcytotoxicactivityagainsttriple-negativebreastcancerMDA-MB-231cells.Journalofenzymeinhibitionandmedicinalchemistry2018，33（1）：309-318.