茉莉花茎乙酸乙酯提取物的抗氧化作用研究

茉莉花茎乙酸乙酯提取物的抗氧化作用研究

黄建红1黄凯玲2黄锁义3黎为能3肖刚3

1.右江民族医学院医学检验学院广西百色533000；2.右江民族医学院临床学院广西百色533000；3.右江民族医学院药学院广西百色533000

基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81160347）；广西壮族自治区百色市科学研究与技术开发计划第一批项目（百科计1001013）；广西自然科学基金项目（2013GXNSFBA019197）。广西高校教学质量与教学改革工程项目自治区级创新创业民族医药教学团队（桂教高教［2015］93号、桂教高教［2016］6号）

作者简介：黄建红（1990-）女，壮族，广西桂平市人，右江民族医学院医学临床医学专业本科，研究方向：天然产物化学、药物化学、食品卫生。

通迅作者：肖刚（1979-）男，汉族，广西桂林市人，副教授，主要从事中药药理研究工作。

【摘要】用乙酸乙酯作溶剂，在75℃水浴中超声提取茉莉花茎多酚30min，通过紫外-可见分光光度法测定了茉莉花茎中多酚的含量以及其提取液的清除自由基能力，分别用Fenton法、DPPH法、邻苯三酚法对比研究了其抗氧化能力。结果表明，当提取液体积为1mL时，提取液的抗氧化能力表现为DPPH法（96.4%）>邻苯三酚法（33.3%）>Fenton法（31.9%）。提取液的抗氧化能力随提取液体积增大而增加，二者呈现一定的量效关系。

【关键词】茉莉花茎；多酚；自由基；抗氧化性

【中图分类号】RTQ351.0【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0373-02

Studyonantioxidativeeffectofethylacetateextractofjasmine

HuangJian-hong1HuangKai-ling2Xiaogang3huangSuo-yi3*

（1YoujiangMedicalUniversityForNationalitiesMedicalInspectionInstitute，GuangxiBaise533000;2ClinicalInstituteofYoujiangMedicalUniversityForNationalities，GuangxiBaise533000;3FacultyofPharmacyofYoujiangMedicalUniversityForNationalities，GuangxiBaise533000）

【Abstract】usingethylacetateassolvent，ultrasonicextractionJasminescapepolyphenol30minat75℃waterbath，byUVVisspectrophotometricmethodforcontentofpolyphenolsandjasmineflowerstemsextractfreeradicalscavengingabilityweremeasured，respectivelybyFentonmethod，DPPHmethod，theadjacentbenzenethreephenolmethodcomparingtheantioxidantcapacity.Theresultsshowthat，whentheextractionvolumeis1mL，extractantioxidantabilitywereDPPH（96.4%）>adjacentbenzenethreephenolmethod（33.3%）>Fenton（31.9%）.Extractantioxidantcapacityincreaseswiththeextractionvolumeincreaseoftwo，showingadose-responserelationship．

【Keywords】jasmineflower;polyphenols;freeradical;antioxidantactivity茉莉花，又称为茉莉，为木樨科素馨属（Jasminum）常绿灌木或藤本植物的统称，原产于印度、巴基斯坦，中国早已引种，并广泛地种植，在我国广东、广西、云南、四川、福建、台湾各省（区）均有栽培。根据我国中医学及现代药理学对茶叶的保健功效研究认为茶叶苦、甘，性凉，人心、肝、脾、肺、肾、五经。茶苦能泻下、祛燥湿、降火；甘能补益缓和；凉能清热泻火解表。茶叶含有大量有益于人体健康的化合物。如儿茶素、维生素C、维生素A、咖啡碱、黄烷醇、茶多酚等，而茉莉花茶也含有大量芳香油、香叶醇、橙花椒醇、丁香酯等20多种化合物。大多数资料都是单独研究茉莉花茶对自由基清除能力，而本文分别用Fenton法、DPPH法和邻苯三酚对茉莉花茎总自由基能力进行了对比研究，研究结果为保健医学和食品营养学等方面提供了重要的实验参考，同时为开发和利用茉莉花的药理价值提供理论依据。

1材料、试剂与设备

1.1材料茉莉花茎干品（产于广西南宁市横县），粉碎，于乙酸乙酯75℃水浴超声30min，抽滤，将滤液转移至容量瓶中备用。

1.2试剂乙酸乙酯（分析纯）：天津市百世化工有限公司；水杨酸（分析纯）：成都市科龙化工试剂厂；盐酸（分析纯）：廉江市爱廉化试剂有限公司；30％过氧化氢（分析纯）：天津市富宇精细化工有限公司；硫酸亚铁（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；酒石酸（分析纯）：天津市大茂化学试剂厂；Ｔris（三羟甲基氨基甲烷）：上海浦化有限公司；邻苯三酚（分析纯）：贵港遵义佳宏化工有限公司；ＤＰＰH（化学纯）：东京化成工业株式会社；实验室用水均为二次蒸馏水。

1.3实验仪器FA1004天子天平：上海舜宇恒平科学仪器有限公司；KQ5200DB型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；马头牌JYT-5架盘药物天平：上海医用激光仪器厂；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵：巩仪市子华仪器有限责任公司；722可见分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司；紫外分光光度计：岛津企业管理有限公司

2试验方法

2.1茉莉花茎乙酸乙酯提取液的制备精确称取6g茉莉花茎粉末，加入乙酸乙酯，在75℃下水浴超声30min，抽滤，然后将滤液转移至100mL的容量瓶中，用乙酸乙酯定容到100mL备用。再取上述溶液1mL于10mL的比色管中，加入一定体积的乙酸乙酯定容至刻度，然后测其吸光度。

2.2酒石酸亚铁法测定多酚以及工作曲线绘制取11支25ml的试管，标记序号，分别加入1mg/ml的没食子酸溶液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.50、1.75、2.0、2.25、2.5mL，再往每根试管中加入水4ml和刚配置好的酒石酸亚铁溶液5.0ml，用缓冲液定容至25ml刻度，摇匀，静置1h后，在最大吸收波长为549nm处以空白对照作参比，测其吸光度。以吸光度A为纵坐标，没食子酸浓度Ｃ（μg/m）为横坐标绘出标准曲线并求出其回归方程。

2.3样品中活性物质多酚含量的测定分别移取一定体积稀释一定倍数的提取液，用上述方法测其吸光值，代入回归方程，求出浓度，按下列公式计算：含量（μg/g）＝浓度（μg/mL）×稀释倍数×提取液体积（mL）/（原料干重×106）×100％，尽量取多次提取液稀释后测其吸光值，求其平均含量。

2.4抗氧化能力测定

２.４.１Ｆｅnｔｏｎ法

本实验通过Ｆｅnｔｏｎ法测定茉莉花茎乙酸乙酯提取液的抗氧化能力,利用Ｈ２Ｏ２与Ｆｅ反应产生羟自由基（·ＯＨ），基本反应如下：

Ｈ２Ｏ２＋Ｆｅ２＋→·ＯＨ＋ＯＨ－＋Ｆｅ３＋清除率的测定：取４支试管，往每支试管加入９ｍｍｏL／ＬＦｅＳＯ４１ｍL、９ｍｍｏL／L水杨酸－乙酸乙酯溶液２.０ｍL，在其中３支试管中分别加入０.５、１.０、２.０ｍL的提取液，另一试管中２.０ｍL蒸馏水作空白对照。最后往４支试管中加入８.８９ｍｍｏL／LＨ２Ｏ２２ｍL开始反应，用乙酸乙酯定容至１０ｍL，静置１ｈ。以蒸馏水作参比，于５１０ｎｍ波长处测其吸光度，并计算其清除率：

清除率=×100％

式中：Ａ０为空白对照液的吸光度；ＡＳ为加入提取液后的吸光度。

４.２DPPH·法

清除率的测定：分别取提取液2.0mL及2mL2×10-4moL/L的DPPH·溶液加入同一10mL的比色管中，摇匀，30min后用试剂空白做参比，测定吸光度A样品，同时用乙酸乙酯作参比，测定2mL2×10-4mL/LDPPH·液与2mL乙酸乙酯混合溶液的吸光度值A对照，根据下面公式计算自由基清除率：

清除率（％）＝×１００％

＝×１００％

式中：Ａ参比为加入乙酸乙酯时的吸光度值；Ａ对照为加入DPPH的自由基体系的吸光值；Ａ样参为加入不同提取液后吸光值；Ａ样品为加入不同提取液和DPPH·后自由基体系的吸光值。

2.4.3邻苯三酚法

抑制率的测定：在４支试管中，分别加入２ｍL新配置的ＰＨ＝８.４３的缓冲溶液，在其中３支中分别加入０.５、１.０、２.０ｍL的提取液，再往４支试管中分别加入１ｍL０.２×１０－３ｍｏL／Ｌ邻苯三酚溶液，用水定容至１０ｍL，在吸收波长为３２２处每隔３０ｓ记录一次吸光值，测量时间为４ｍｉｎ，每支试管测得８个吸光值。其抑制率计算公式为:

３.实验结果与讨论

３.１酒石酸亚铁法测定多酚及其曲线绘制结果

由表３可知：茉莉花茎乙酸乙酯提取液对DPPH·和·ＯＨ的清除率以及对Ｏ２－·的抑制率随着提取液体积的增大，即活性成分多酚的含量的增高，自由基的清除率以及抑制率不断增强，两者之间呈一定的量效关系。而且，在相同体积的提取液中，用不同的方法测得的茉莉花茎提取液的抗氧化能力表现为：DPPH·清除率＞Ｏ２－·清除率＞·ＯＨ清除率。

结论与展望：

自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应，与人的病理生理关系密切。研究表明，含氧自由基关系到很多疾病，如O2-·自由基可使细胞质和细胞核中的核酸链断裂，会导致肿瘤、炎症、血液病及心肝、肺、脾、皮肤等方面病变的产生；HO·是化学性质最活泼的活性氧化物，能与糖、蛋白质、DNA、碱基磷脂和有机酸等反应，导致身体组织损害和机体退化，引发疲劳、延迟性肌肉酸痛、运动性贫血和血红旦白尿等。随着对自由基研究的逐步深入，科学家们越来越清楚地认识到，清除多余自由基的措施有益于某些疾病的预防和治疗，而自由基清除剂的研究对人体健康的意义便显得更为重大。本实验以茉莉花作原料，研究了其乙酸乙酯提取液抗氧化自由基作用，实验结果显示茉莉花茎乙酸乙酯提取液具有较强的抗氧化能力，对自由基有良好的清除作用。

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