HPL和HCG免疫组化检测鉴别早期妊娠流产与异位妊娠的研究

HPL和HCG免疫组化检测鉴别早期妊娠流产与异位妊娠的研究

张航清

张航清

（浙江省杭州市江干区人民医院，杭州310016）

【摘要】目的探讨人胎盘催乳素（HPL）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）用免疫组化染色标记子宫内膜的方法，鉴别早期妊娠流产与异位妊娠的临床应用价值。方法选择2009年1月至2009年12月我院收治的135例早孕期（孕5～12周）患者为研究对象，其中60例为不全流产经B超检查明确宫内无孕囊患者（A组），30例为早期先兆流产或胎胚发育异常，又非葡萄胎患者（B组），45例为异位妊娠患者（C组），对每例刮宫标本（子宫内膜）用免疫组化染色标记的方法测定HPL和HCG。结果C组HPL100%阴性，HPL阳性100%为宫内孕，C组与A、B组之间有显著的统计学差异（P<0.01）；3组患者HCG均有可能阳性，但HCG阴性的不可能是B组，A、B组之间有显著差异（P<0.01），A、C组之间无统计学差异（P>0.05）。结论用免疫组化染色标记子宫内膜的方法测定HPL和HCG，异位妊娠者HPL全阴，HPL阳性者均为宫内妊娠流产，藉以提高宫内外妊娠的诊断率，同时用免疫组化的方法在鉴别早期妊娠流产与异位妊娠时HPL比HCG更敏感、更具有临床应用价值。

【关键词】早期妊娠流产；异位妊娠；免疫组化；HPL；HCG

流产是人类生殖繁衍的优胜劣汰过程。据统计，自然流产的发生率在15%-40%，约75%发生在妊娠16周以前，发生于妊娠12周前者占62%。由于大部分流产发生在着床期和临床前期胚胎就停止发育，有时仅表现为月经延期或月经过多，临床难以鉴别。而在临床可以确认的妊娠中，至少有10%发生自然流产。目前妊娠早期诊断开展最普遍的项目是用放射免疫法测定血清及尿液人绒毛膜促性腺激素（HCG），血清人胎盘催乳素（HPL）等，从而要以较早期的诊断早期妊娠。但对于那些临床较早的确诊有怀孕患者，而B超又未能证实是否宫内、外孕者，且临床出现异常症状如阴道出血、腹痛、腹胀等，需要尽早的予以明确诊断以便尽早治疗。至于这类患者，目前临床确诊尚存在一定难度，为了更好更早的鉴别早期妊娠流产与异位妊娠，笔者采用免疫组化染色标记的方法对刮宫标本（子宫内膜）进行HPL、HCG检测，在临床取得较好的效果，藉以辅助诊断宫内、外孕，提高了异位妊娠的诊断率。

现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料病例来源于2009年1月至2009年12月我院收治的135例早孕期患者：孕5-12周，年龄18～40岁、平均年龄27.3岁，有阴道少量出血1～20天、平均7～8天。A组为不全流产经B超检查明确宫内无孕囊患者60例；B组为早期先兆流产或胚胎发育异常又非葡萄胎的患者30例；C组为异位妊娠患者45例。3组病例均在征得患者的知情同意下常规进行诊断性刮宫或清宫，其中B组病例为患者自愿选择刮宫流产者。3组对象在年龄、孕周、阴道出血天数等方面均有可比性，无统计学差异（P>0.05）。

1.2方法

1.2.1主要试剂使用福建迈新生物技术开发有限公司生产的免疫组化试剂盒。

1.2.2标本处理将3组患者的刮宫标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜观察，按链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法（SP法）进行HPL和HCG的免疫组化染色标记来识别胎盘合体滋养细胞。

1.2.3结果评判按滋养层细胞免疫组化以染色阳性强度和阳性检出率相结合而定，分为四类：一般阳性细胞数在0～25为阴性（－），25～50为弱阳性（+），50～75为中度阳性（++），75以上为强阳性（+++）。

1.2.4统计学处理应用SPSS12、0统计软件分析，采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1刮宫标本中HPL、HCG免疫组化染色标记阳性率B组刮宫标本中均能检测到HPL、HCG，其阳性率均为100%；A组HPL、HCG阳性率分别为93.33%、21.67%；C组HCG阳性率为15.38%，而HPL无一例阳性。HPL免疫组化染色标记：A、B组之间无统计学差异（P>0.05），A、B、C三组之间有显著的统计学差异（P<0.01）。HCG免疫组化染色标记：A、B组之间有显著差异（P<0.01）；A、C组之间无统计学差异（P>0.05）。见表1

表1三组HPL、HCG免疫组化染色标记结果比较

组别

n

HPL

HCG

HPL

阳性率（%）

HCG阳性率（%）

－

+

++

+++

－

+

++

+++

60

4

37

19

0

47

11

2

0

93.33

21.67

30

0

20

10

0

0

27

3

0

100

100

45

45

0

0

0

39

5

1

0

0

15.38

2.2三组刮宫标本中HPL免疫组化染色标记阳性的只有A、B组，C组HPL绝对是阴性的。也就是说HPL阳性的100%是宫内孕，但HPL阴性的绝大多数是C组，占91.82%，还有少数为A组，占8.18%。HCG免疫组化染色标记A、B、C组3组都有可能阳性，但HCG阴性的只有A、C组，不可能是B组。

3讨论

3.1人胎盘催乳素（HPL）是由胎盘合体滋养细胞合成的一种单链多肽激素。在初孕第5周左右可在血液中检测出HPL，产后即消失。HPL水平与胎盘发育密切相关。人绒毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盘合体滋养细胞合成的一种糖蛋白激素。在受精后第7天左右便出现在母体血液中，产后4天消失。故在早期妊娠阶段，能用生物法或免疫法测定血HCG、HPL以诊断早孕。当临床上不能鉴别宫内外妊娠时，则采取内膜刮宫、病理切片、HE染色、显微镜检查等。在显微镜下如观察到绒毛膜绒毛，为子宫内妊娠，若未见绒毛则有可能是异位妊娠也有可能是子宫内妊娠，因刮宫时胎盘组织已经流出。故在不能排除异位妊娠时，用诊断性刮宫获取子宫内膜进行病理检查分析尚存在一定的局限性。

为了探索用诊断性刮宫获取子宫内膜进行分析的更多临床应用价值，提高宫内、外妊娠的诊断率，本研究采用对刮宫标本（子宫内膜）绒毛滋养层进行HPL和HCG的免疫组化SP法染色标记，来进一步的鉴别异位妊娠和早期妊娠流产。临床研究证明异位妊娠者刮宫获取的子宫内膜HPL免疫组化染色标记绝对是阴性，HPL阳性的100%是宫内孕，但HPL阴性的除绝大多数是异位妊娠外尚有少数为宫内妊娠流产。而HCG免疫组化染色标记阳性的宫内外妊娠均有可能，但HCG阴性的不可能是正常宫内妊娠，除非宫内妊娠胚胎已流产者。本研究结果表明异位妊娠组显示为弱HCG阳性标记和HPL全阴性免疫反应；早期妊娠不全流产组显示为强HPL阳性标记和弱HCG免疫反应；早期妊娠先兆流产或胚胎发育异常组显示为HPL、HCG均强阳性标记免疫反应。故采取对刮宫标本的子宫内膜进行绒毛滋养层的HPL、HCG免疫组化染色标记研究提示在鉴别宫内外妊娠中HPL比HCG更敏感，而HCG在鉴别宫内妊娠胚胎是否已流产者确比HPL更具有临床指导意义。

3.2在目前已知大多数自然流产均发生在妊娠的极早期，即被临床证实为妊娠以前，有人称为亚临床自然流产，又名未被诊断的自然流产，也就是指十分早期的未被诊断以前已经发生的流产，这种流产估计至少占8%。据统计约有15%以上的受精卵不分裂，15%在种植以前即已丢失（第1周妊娠内），约25%在种植时丢失（第2周妊娠内）1，故临床上难以与异位妊娠相区别。

正常妊娠时妊娠滋养细胞可分为细胞滋养细胞（CT），合体滋养细胞（ST）和中间型滋养细胞（IT）3种。位于绒毛表面的滋养细胞称绒毛滋养细胞，而位于子宫内其他部位的滋养细胞称绒毛外滋养细胞。绒毛滋养细胞主要是CT和ST，而IT是绒毛外滋养细胞的主要组成，尤以胚胞植入部分的蜕膜中多见2。三种滋养细胞具有不同的免疫组化特征，其HPL和HCG免疫组化染色标记分别为CT均阴性，ST均强阳性，IT为HPL强阳性HCG弱阳性免疫反应。而流产过程为一个妊娠物逐渐与子宫剥离直至排出子宫的过程。根据不同的阶段，宫内妊娠物及子宫内膜的变化可表现不同的类型。异位妊娠的子宫内膜变化无特征性，可表现为蜕膜组织、高度分泌相伴有或不伴A—S反应、分泌相及增生相多种。借助诊断性刮宫，观察子宫内膜变化，根据刮出物有无绒毛，能协助确定有否子宫内妊娠。近年来，在刮宫标本的常规病理检查中，仅有半数病例能找到绒毛或合体滋养细胞（ST），从而明确为宫内妊娠。随着免疫组化的进展，已不单纯依赖传统的病理检查，当临床上不能鉴别异位妊娠、宫内妊娠流产时则采取内膜刮宫进行免疫组化染色标记，根据妊娠时绒毛外滋养细胞多为中间型滋养细胞（IT），如未在查见胎盘绒毛的刮宫标本中，测定HPL证实若有阳性标记的中间型滋养叶细胞（IT）则属宫内妊娠流产。

3.3HPL与HCG免疫组化染色标记子宫内膜在鉴别早期妊娠流产与异位妊娠中的应用

HPL与HCG免疫组化染色标记是通过对刮宫标本（子宫内膜）进行特异性的化学染色固定封片镜检识别胎盘合体滋养细胞，是能准确标记胎盘合体滋养细胞的新技术。由于它具有快速、可靠、方便、成本相对较低等优势，而被广泛应用。本研究选择HPL、HCG作为研究对象，每个样本得到的检测结果均表明免疫组化染色标记子宫内膜具有高灵敏性和特异性，在鉴别早期妊娠流产和异位妊娠时HPL比HCG更敏感、更具有临床应用价值，藉以提高宫内外妊娠的诊断率，是一项可靠的辅助诊断手段，值得临床推广应用。

参考文献

1曹泽毅.中华妇产科学.第二版.北京：人民卫生出版社，2008.352.

2丰有吉，沈铿，等.妇产科学.第二版.北京：人民卫生出版社，2010.356～357.