复方甘草甜素与乌司他丁联合应用对急性胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-6及AMY水平的影响

复方甘草甜素与乌司他丁联合应用对急性胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-6及AMY水平的影响

周磊林海舵郑志强

（温州医科大学附属第二医院普外科浙江温州325000）

【摘要】目的：探讨复方甘草甜素与乌司他丁联合应用对大鼠急性胰腺炎血清TNF-α和IL-6水平的影响。方法：将健康大鼠随机分成假手术组、急性胰腺炎组、复方甘草甜素组、乌司他丁组以及复方甘草甜素联合乌司他丁组，在制模完成后4h和8h两个时间点杀死大鼠，收集大鼠血清，测定各组血清TNF-α、IL-6和AMY的水平，并进行比较。结果：急性胰腺炎组血清TNF-α、IL-6和AMY的水平均升高。对比急性胰腺炎组，复方甘草甜素组、乌司他丁组及联合应用组血清炎性因子TNF-α、IL-6及AMY的水平均下降，尤以联合应用组最为明显，均具有统计学意义。结论：复方甘草甜素与乌司他丁联合应用可以有效地降低急性胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-6及AMY的水平，对治疗急性胰腺炎具有重要临床意义。

【关键词】复方甘草甜素；乌司他丁；急性胰腺炎；肿瘤坏死因子α；白细胞介素6

【中图分类号】R576【文献标识码】A

InfluenceofcompoundGlycyrrhizinandUlinnastatinonbloodTNF-α,IL-6andAMYinratswithacutenecrotizingpancreatitis

Zhoulei,Linhaiduo,Zhengzhiqiang.1DepartmentofGeneralSurgery,TheSecondAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalCollege.ZhejiangWenzhou325000

Abstract：ObjectiveToinvestigatethechangesofTNF-α,IL-6andAMYinratswithacutenecrotizingpancreatitis(ANP)andtheinfluenceofcompoundGlycyrrhizinandUlinnastatinontheseparametersinANPrats.MethodsThirtymaleSprague-Dawley(SD)ratswerepidedintofivegroupsandkilledtheratsinbatchat4hand8hafterfinishedoperation.ThencollectedserumsanddetectedtheserumTNF-α,IL-6levelswithenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)andtheserumAMYlevelwithenzymaticmethod.ResultsComparedwithgroupA,theserumTNF-α,IL-6andAMYlevelsingroupBwereincreasedobviously.ComparedwithgroupB,theserumTNF-α,IL-6andAMYlevelsdecreasinginratswereinducedbythesingleorcombinationusageofUlinnastatinandGlycyrrhizin,especiallyofcombinationusage(P<0.05).ConclusionThecombinationofbothUlinnastatinandGlycyrrhizincanrelieveANPinflammationresponse,anditisimportantclinicsignificancetotreatAP.

Keywords：compound;Glycyrrhizin;Ulinnastatin;acutenecrotizingpancreatitis;tumornecrosisfactor-alpha；interleukin-6

急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是一种由于炎性因子释放引起机体以免疫失控为主的连锁反应，从而导致胰腺出现出血、坏死等一系列炎症损害的表现。病情严重，死亡率较高，尤其是急性重型胰腺炎（Acuteseverepancreatitis）常常可导致机体出现骤然死亡[1]。已有研究表明，AP发生时常常会伴有一些促炎细胞因子如：TNF-α、IL-6、IL-8等的升高，进而导致了全身炎性反应综合征的发生[2]，而且这些细胞因子的升高幅度与AP的严重程度密切相关[3]。因此IL-6和TNF-α的变化常常被当作是反映急性胰腺炎的严重程度以及判断疾病预后的重要指标[4-7]。本研究主要通过观察乌司他丁与复方甘草甜素联合应用对急性胰腺炎大鼠血清TNF-α、IL-6的影响，从而进一步探讨中西药联合应用对治疗急性胰腺炎的可能性。

1材料与方法

1.1实验动物分组

选取体重在230-300g之间的健康SD大鼠30只，雄性，随机原则分为5组，每组为6只。从A-E组分别为：假手术组；急性胰腺炎组；乌司他丁组；复方甘草甜素组以及复方甘草甜素与乌司他丁联合组。其中D、E组建模前1周要给予复方甘草甜素（RocheProductsLimited，X20000161）按2mL/60g剂量持续灌胃。

1.2急性胰腺炎大鼠模型制备

大鼠在术前12h禁食但不禁水，用0.5%戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量进行腹部皮下注射实施麻醉，依照改良过的Aho方法[8]，用5%的牛磺酸钠（用药剂量1ml/kg，注射速度0.1ml/min）进行胰管内逆行注射，制备大鼠急性胰腺炎模型。假手术组操作同模型组但不注入牛磺酸钠；C、E组在制模关腹后需要按2000U/60g剂量进行肌注乌司他丁（国药准字：H19990134，广东天普生化医药股份有限公司）。

1.3观察指标及测定方法

在制模后4h和8h分别处死3只大鼠，取腹腔静脉血5ml，离心后取血清，保存于-70℃，血清TNF-α、IL-6含量用ELISA方法进行测定。

1.4统计学处理

计量资料用均数±标准差(±s)表示，使用SPSS19.0进行统计分析。两组之间均数的比较采用t检验，p<0.05表示差异有显著性。

2结果

急性胰腺炎组（B组）的大鼠血清TNF–α、IL-6及AMY较A组明显升高（p<0.05）。与B组相比，治疗组（C、D、E组）在使用了药物乌司他丁、复方甘草甜素以及两种药物联合使用后，所测得的实验大鼠血清TNF-α、IL-6以及AMY的水平均出现了比较明显的抑制作用，差异显著，具有统计学意义（p<0.05）尤以复方甘草甜素和乌司他丁两种药物联合应用最为显著。（见表1，2，3）

表1各组间不同时间点血清TNF-α浓度变化的比较

注：#、*、**、##：分别与B组比较

3讨论

急性胰腺炎是一种因为机体体内大量炎症细胞受到活化，导致了大量炎症介质产生并且进入到血液中，从而引起了体内连锁及放大的炎症效应[9]。大量的细胞因子参与了体内的这种炎症效应，这些细胞因子在AP发病过程中相互促进，亦相互拮抗，形成复杂的细胞因子网络。而TNF-α、IL-6作为人体内的常见炎症因子，它们在急性胰腺炎的发病过程中发挥着非常重要的作用。

TNF-α是一种比较常见的细胞因子，它主要是单核-巨噬细胞在受到活化之后所分泌[10]，它介导了多种生物学作用，直接或间接地引起了组织的免疫损伤，是体内一种非常重要的炎性反应因子[11]。此外，TNF-α还具有免疫调节的作用，它可以通过作用于效应细胞从而来调节机体内其他类型炎症反应因子产生的重要作用[12]。比如TNF-α可以诱导体内细胞因子IL-6、IL-8等的生成，进而引起炎症介质释放失控及中性粒细胞活化，导致胰腺损伤[13]。目前已经有多项研究表明TNF-α的升高可诱导胰腺炎症反应的发生[14-15]。IL-6是一种在炎症反应时可以由多种细胞活化后产生并且释放的细胞因子，它是介导急性炎症反应的重要细胞因子，近些年来的研究还发现IL-6在发生AP后其水平也会发生显著地升高，是在胰腺炎病程中引起除胰腺以外组织器官损伤的重要因子[16-17]。因此，血清TNF-α、IL-6的变化可以反映出AP的严重程度及是否存在器官并发症，在临床上可用于急性胰腺炎严重程度和预后的判断。

鉴于在急性胰腺炎发病过程中细胞因子所起的作用，可以通过抑制细胞因子的产生与释放从而达到治疗急性胰腺炎的目的。乌司他丁作为一种蛋白酶抑制剂，它主要通过抑制胰蛋白酶及其他炎症介质的释放，抑制细胞因子级联反应的发生，从而减轻炎性损害[18]。我们实验结果表明在使用乌司他丁治疗后，血清TNF-α、IL-6均出现了明显地下降。但目前单纯西医治疗难以达到满意的疗效，因此在西医治疗的基础上结合中药应用，发挥中药的优势，是近年治疗AP的热点。复方甘草甜素可以抑制因急性炎症反应而引起的的毛细血管通透性增加，从而减少炎性渗出，减轻组织水肿，并可抑制白细胞的游走。实验结果显示复方甘草甜素应用组大鼠血清TNF-α、IL-6的水平较AP组出现下降。而将乌司他丁与复方甘草甜素联合应用，可以结合两者的优势，达到更佳的治疗效果，实验结果也验证了这一点，大鼠血清TNF-α、IL-6的水平出现了更为明显的下降。

总之，复方甘草甜素与乌司他丁联合应用能抑制炎症反应，有效降低大鼠血清TNF-α、IL-6的水平，有较显著的疗效。但药物在急性胰腺炎中所起的具体抗炎机理还需要后续实验的进一步确定，这将会为日后开展临床应用的研究奠定基础。

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