养肝解酒方对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病影响的研究

养肝解酒方对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病影响的研究

胡瑜卢涛

武警边防部队总医院广东,深圳,518029

【摘要】目的：探讨养肝解酒方灌胃给药对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病的药效学作用以及作用机制。方法：通过给予高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝动物模型，随机分为模型组、养肝解酒方低、中、高剂量组和阳性对照药东宝甘泰组，另设正常对照组，每组10只动物，连续给药6W。结果：表明养肝解酒方（1.4、2.8g/kg）能显著降低非酒精性脂肪肝模型大鼠血以及肝组织中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的水平（与模型组比较，P＜0.05），可改善肝脏功能，降低血清中AST、ALP、ALP以及GGT的含量（与模型组比较，P＜0.05或P＜0.01）；显著降低血清以及肝组织中MDA含量（P＜0.01），增强血清、肝组织中SOD活力（P＜0.01）；减轻由于长期高脂饮食对肝脏的继发性病理损害，脂肪肝程度显著减轻。结论：养肝解酒方对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝有较好的防治作用，其作用机制与其能抗氧化损伤、降血脂以及保肝降酶作用密切相关。

【关键词】养肝解酒方;高脂饮食;大鼠

【中图分类号】R285【文献标识码】A

1实验材料

1.1实验动物SPF级昆明小鼠，雄性，体重为180～220g，由中山大学实验动物中心提供。

1.2药物与试剂养肝解酒方（由葛根2g，丹参2g，枳椇子2g，白术1g，白芍1g，玉米低聚肽0.3g组成），将上述药物水煎，取滤液浓缩成含生药0.5g/mL，灭菌备用；东宝甘泰，通化东宝药业股份有限公司，批号：121103；胆固醇、胆盐，为北京奥博星生物技术责任有限公司产品；LDL-C、HDL-C、TG、CHO试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司产品；MDA、SOD、NFDA试剂盒，南京建成生物研究所产品；ALT、AST、ALP、GGT等生化检测试剂均由BECKMAN公司提供。

2实验方法

2.1动物造模、分组及给药[1]

取SPF级雄性SD大鼠90只，正常喂养一周后取10只作为正常对照组（生理盐水），以正常饲料喂养；另80只给予高脂饲料喂养（普通饲料加20g/kg胆固醇加100g/kg猪油，猪油加热熔化后加入胆固醇，然后拌入饲料中）。连续喂养4W（通过定时抽血检测血脂以及肝脏病理学分析来确定造模是否成功）后，选取状态较好的50只造模动物随机分为：模型对照组（生理盐水），阳性对照药药东宝甘泰组（0.4g/kg），养肝解酒方低剂量组（0.7g/kg），养肝解酒方中剂量组（1.4g/kg），养肝解酒方高剂量组（2.8g/kg），剩下动物作为后备和验证造模成功用。

高脂饲料喂养4W后按以上分组情况开始给药并继续喂养高脂饲料（正常对照组喂养正常饲料），每天1次，连续给药6W。末次给药后，隔夜禁食，次日称量体重后，乙醚麻醉，下腔静脉采血后处死，称取肝脏湿重及腹部脂肪重量，并从肝脏切取2块代表肝组织，分别用以制备石蜡切片和肝匀浆。摘取肝脏并称重，计算肝脏指数(肝脏指数=肝湿重／体重×100％)。观察大体外观后，取肝左叶作组织病理学检查；取肝右叶，制成100g／L的肝组织匀浆，离心后取上清液测血清和肝组织中的生化指标。

2.2一般情况每周观察动物活动、状态、毛发、进食大便等一般情况，并于实验结束后，称量体重（体质量），然后麻醉取肝脏进行称量（肝质量），计算肝脏系数（肝质量/体质量）。

2.3血清脂质和肝脏脂质指标检测于实验结束后，麻醉动物，腹腔静脉抽血离心取血清置-20℃保存，取部分代表肝脏组织置液氮保存（用时解冻匀浆），用全自动血液生化分析仪检测血清及肝匀浆液中胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、游离脂肪酸（FFA）的含量。

2.4肝功能检测于实验结束后，麻醉动物，腹腔静脉抽血离心取血清置-20℃保存，用全自动血液生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）。

2.5血清以及肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）取材方法同2.3，用南京建成生物研究所试剂盒进行测定，SOD检测为黄嘌呤氧化酶法，MDA检测为硫代巴比妥酸（TBA）法。

2.6肝脏病理组织学检查于实验结束后，麻醉动物，取代表肝组织置于10%福尔马林溶液中保存超过48h每个组织块均酒精梯度脱水，石蜡包埋，切片厚约4μm，进行苏木素-伊红(HE)染色。光镜下观察脑组织病理学变化。肝细胞胞浆疏松、水肿程度。按程度分为-、+、++、+++、++++级。另每张切片随机取5个视野，测每个视野中脂肪滴占总面积的百分比（AP值），再分别算出每只大鼠肝脏中脂肪滴占肝脏单位体积的百分比，即体密度值（VP值），按VP值大小进行脂肪肝程度分类：值小于10%无脂肪肝，10%～20%轻度，20%～30%中度，大于30%为重度脂肪肝；再按肝纤维结缔组织增生程度将肝纤维化分为0～4级（-、+、++、+++、++++级）

2.7统计学处理所有实验数据以表示。计量数据由SPSS17.0统计软件进行方差分析及组间检验。

3实验结果

3.1一般状况

造模过程中，正常对照组动物精神充沛，灵活好动，饮食正常，皮毛整洁，体重持续增加，无嗜睡现象；造模大鼠均有不同程度的精神萎靡，活动减少，饮食减少，皮毛凌乱，体重下降等表现，有嗜睡现象。治疗过程中，东宝甘泰组、养肝解酒方防治组大鼠与模型对照组大鼠在治疗初期外观相似，但随着治疗时间的增长，与模型对照组相比，状态有逐渐好转趋势，在活动、毛发等均呈改善趋势，体重无显著性差异（与模型对照组比较p>0.05）。

3.2肝重以及肝脏指数

高脂饮食致脂肪肝模型大鼠的肝重明显增加，肝脏指数明显升高，与正常对照组比较p<0.01。与模型对照组比较，养肝解酒方各剂量组以及阳性对照药东宝甘泰组均有一定降低脂肪肝大鼠的肝脏指数的作用趋势，但无明显统计学差异（p>0.05）。

3.3.2对肝组织中TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响

与正常对照组比较，高脂性脂肪肝模型组大鼠肝组织中TC、TG、LDL-C明显升高（p<0.05或p<0.01），肝组织中HDL-C则明显降低（p<0.05）。与模型对照组比较，养肝解酒方中、高量组以及阳性对照药东宝甘泰组均能明显降低肝组织中TC、TG、LDL-C的含量（p<0.05或p<0.01），也有一定的升高肝组织中HDL-C的趋势，但无统计学差异（p>0.05）。

3.3.3对血清以及肝组织中SOD和MDA的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠血清以及肝组织中MDA的含量明显增加（p<0.01），SOD活力明显降低（p<0.01）。与模型组比较，养肝解酒方各剂量组以及东宝甘泰组均能明显降低血清、肝组织中MDA含量（p<0.05或p<0.01），增强血清、肝组织中SOD活力（p<0.05或p<0.01）。

3.3.4肝组织病理学检查结果

肝脏外观变化情况：正常对照组肝脏肉眼观察呈鲜红色，形态规则，表面光滑。脂肪肝模型对照组肉眼见肝脏体积增大，外型饱满，颜色呈黄褐色，切面油腻状。给药组和阳性对照组部分肝脏呈红褐色，无明显油腻状。

4讨论

本实验结果显示，高脂饮食后大鼠血清和肝组织中TG、TC、LDL-C等脂质含量明显升高，并升高血清中AST、ALT、ALP等肝功能生化指标，同时降低SOD水平，增强MDA活力，且引起肝细胞脂肪变性等病理损害，表明脂肪肝模型造模成功。养肝解酒方给药6周后，能明显降低脂肪肝模型大鼠血清以及肝脏脂质水平，并能明显升高SOD水平、降低MDA活力以及改善肝脏功能作用，从而减轻单纯高脂饮食或酒精+高脂饮食对肝脏脂肪变性等继发性损害。

综上所述，养肝解酒方能清除机体自由基，增强抗氧化能力，调节和改善自由基代谢平衡；调节脂质代谢，降低血清中和肝组织TG、TC、LDL-C、NFDA的含量，升高HDL-C含量，改善体内胆固醇的分布状况；抗肝损伤，保护肝细胞，促进肝细胞损伤修复，降低转氨酶，维护肝功能正常，从而起到较好的防治脂肪肝的作用。

参考文献

[1]徐淑云，卞如镰，陈修主编.药理实验方法学[M].第三版，北京：人民卫生出版社，2002