高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定前列泰胶囊中盐酸水苏碱的含量

龙杰凤1潘玉杰2孔德加2李星2蒋坤2

1.凯里学院，贵州凯里556000；贵州百灵企业集团制药股份有限公司，贵州安顺561000贵州百灵企业集团制药股份有限公司，安顺，561000

通讯作者简介：潘玉杰，1991-07，海南三亚人，助理工程师，研究方向：中药工艺及质量标准研究

摘要：目的建立测定前列泰胶囊中盐酸水苏碱含量的方法。方法利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法，采用VenusilHILIC(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相为甲醇-0.2%冰醋酸(95∶5)，流速为1.0mL/min，柱温25℃；漂移管温度80℃，气体流速为2.5L/min，增益值为2。结果盐酸水苏碱在5.5850～27.9250μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.9999；平均加样回收率为100.03%，RSD为1.63%（n=9）。结论实验方法准确灵敏，重复性好，能有效地控制产品质量。

关键词：前列泰胶囊；高效液相色谱-蒸发光散射检测法；盐酸水苏碱

【中图分类号】R618.9【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0380-02

前列泰胶囊由益母草、萹蓄、红花、油菜蜂花粉、盐知母、盐黄柏六味药材组成，具有清热利湿，活血散结，用于慢性前列腺炎湿热挟淤症。[1]

前列泰胶囊全国有11家生产企业，现前11家企业生产前列泰胶囊的执行标准中，益母草中有效成分盐酸水苏碱的含量测定用的是高效液相色谱法，色谱柱用的是磺酸基团键合硅胶(SCX)阳离子交换柱，用紫外检器(检测波长192nm)测定，由于盐酸水苏碱的最大紫外吸收为192nm，在紫外吸收的边缘采用紫外检测器检测，杂质干扰严重，重现性差，基线不稳定，影响检测结果。

其次，益母草为前列泰方中的君药，盐酸水苏碱是其主要有效成分，11家企业现行的标准，均采用硅胶和活性炭按一定比例作为吸附剂，对样品进行处理，样品峰形依然很差。本次实验改用三乙胺作为扫尾剂对活性炭进行改性。由于盐酸水苏碱极性很大，传统的反相色谱对它的保留和分离能力较弱，通常在死时间流出而无法得到分离，而采用亲水作用色谱（HILIC）能为强极性的化合物提供合适的保留，在强极性的化合物测定上应用逐渐广泛，所以选择亲水作用色谱模式，并使用ELSD作为检测器进行检测，最终对原含量测定方法进行了改进，经试验，结果具有分离效果好、灵敏、准确等优点，更好地控制了前列泰胶囊的质量，确保临床的疗效。

1方法与结果

1.1仪器、试剂和样品

AgilentTechnologies1200series高效液相色谱仪，AlltechELSD2000ES蒸发光散射检测器，KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），甲醇（分析纯20130411，上海申博化工有限公司），石油醚（分析纯20140328，上海申博化工有限公司），甲醇（色谱纯20140721，上海申博化工有限公司），硅胶、活性炭（色谱纯，青岛化工有限公司），三乙胺（分析纯20140421，上海申博化工有限公司），盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号为112542-201405），其他均为分析纯。前列泰胶囊（20140304、20140201、20140202、20140401、20140402、20140403、20140404、20120405、20140501、20140502、20140503，贵州百灵企业集团制药股份有限公司）。

1.2色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：VenusilHILIC柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相甲醇-0.2%冰醋酸(95∶5)，体积流量1.0mL/min；柱温30℃；ELSD检测器：空气压缩机350kPa，雾化室温度80℃，增益值为2，进样量10μl。

1.3对照品溶液的制备

精密称取盐酸水苏碱对照品10mg，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL含盐酸水苏碱1mg的溶液，即得。

1.4阴性对照溶液的制备

按处方比例及制备工艺，配制不含益母草药材的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。

1.5供试品溶液的制备

取前列泰胶囊内容物2g，研细，精密称定，精密加入50mL甲醇，称定质量，超声处理30分钟(功率250W，频率100Hz)，滤过，水浴蒸干，残渣加水20mL使溶解，静置，弃去不溶物，倾取上层液，用石油醚提取4次，每次25mL，弃去石油醚液，水液水浴蒸干，残渣加甲醇10mL使溶解，加于硅胶-改性活性炭柱上（内径1.5cm，硅胶为色谱纯、100～200目，硅胶-改性活性炭=3g∶1g，先甲醇湿法装柱，然后用5%的三乙胺甲醇溶液15mL预洗），用甲醇洗脱，收集洗脱液120mL，水浴蒸干，残渣加流动相溶解并转移至10mL量瓶，定容至刻度，摇匀，即得。

1.6方法学验证

1.6.1系统适应性试验

按照上述色谱条件及样品处理方法，进行系统适应性试验，盐酸水苏碱峰与其他成分达到基线分离，且峰形良好；阴性样品试验结果表明其它成分对盐酸水苏碱的测定无干扰。结果见图1、图2、图3。

1.6.2线性关系的考察

取1.3项下的对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL分别进样，按上述色谱条件记录色谱图，测定峰面积，以峰面积的对数值为纵坐标，盐酸水苏碱对照品进样量的对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=1.1465X+4.5823（Y为峰面积，X为浓度），r=0.9999。结果表明，盐酸水苏碱在5.5850～27.9250μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

1.6.3精密度试验

取1.3项下的对照品溶液，按1.2项色谱条件进行实验，进样量均为10μl，连续进样5次，测得其峰面积积分值，RSD为0.72%，表明仪器精密度良好。

1.6.4重复性试验

取同一个批号的前列泰胶囊（批号：20140304），平行取样6份，按1.5项下方法操作并检测。盐酸水苏碱平均质量分数为5.37mg/g，RSD为0.10%，表明方法重复性较好。

1.6.5稳定性试验

取同一批号的供试品溶液（批号：20140304），按1.2项色谱条件进行试验，于0、4、8、12、16、20、24h各进样一次，进样量均为20μL，按峰面积积分值计算，盐酸水苏碱的RSD值为0.14%，表明供试品溶液中盐酸水苏碱在24h内具有良好的稳定性。

1.6.6加样回收率试验

称取已知盐酸水苏碱含量的样品（质量分数为5.28mg/g）9份，分成3组（每组3份），置50mL量瓶中，每组分别精密加入2.5204mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液4、5、6mL，精密称定，按1.5项下自“精密加入甲醇50mL”起，同法操作，并按1.2项下色谱条件进样，进样量均为10μl，测定峰面积，计算回收率。结果见表3。

2结论

盐酸水苏碱属于胺类物质，极性很大，加入三乙胺能加大柱子中填料的极性，加速物质的洗脱速度。三乙胺作为扫尾剂，能防止胺类物质在洗脱过程中出现拖带现象，导致目标物洗脱不完全或将多余杂质冲出。

本研究将盐酸水苏碱的含量测定方法改为蒸发光检测器(ELSD)进行检测，选择稳定性好的亲水性丙基酰胺键合硅胶柱(HILIC)为色谱柱进行分离，使得前列泰胶囊中盐酸水苏碱与各杂质组分得到基线分离，色谱峰良好，更利于盐酸水苏碱的定量测定；且本发明所提供的检测方法专属性强，精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，提升了前列泰的质量检测标准，加强了该药的质量可控性，从而确保了临床用药的有效性和完全性。

【参考文献】

[1]张晓萍，丁永辉等.前列泰丸的质量分析研究[J].中成药.2012,2(34):367~370.

[2]陈碧莲，祝明等.亲水作用色谱-蒸发光散射法测定益母草中盐酸水苏碱的含量[J].药物分析.2012,3(32):502~504.

[3]李存金，郭飞宇.HPLC-ELSD测定复方益母草胶囊中盐酸水苏碱的含量[J].中国现代应用药学.2013,1(30):72~74.

[4]汪琪，孙磊等.冠脉宁片（胶囊）现行标准中丹参薄层鉴别比较研究[J].时珍国医国药.2014,11(25):2267~2269.