急性心肌梗死患者血清标志物 miR-23b及 miR-126的表达及其意义的研究

急性心肌梗死患者血清标志物 miR-23b及 miR-126的表达及其意义的研究

龚岚 1 ，刘浩浩，胡晓炜，陆红兵通讯作者

无锡市第二人民医院 检验科，江苏 无锡 214000

摘要:

目的:深入探讨急性心肌梗死患者血清中miR-23b及其miR-126的变化及其作用机制，阐明血清中miR-23b及其miR-126作为急性心肌梗死潜在分子标志物的临床意义。

方法:收集107例急性心肌梗死患者及85名对照患者血清，用qRT-PCR检测其血清中miR-23b及miR-126的表达水平。与cTnI及其CK-MB对比，分析血清中miR-23b及miR-126 在急性心肌梗死中的诊断意义。

结果:在两组患者中，miR-23b及miR-126表达有明显差异，急性心肌梗死患者miR-23b的表达显著高于对照组，表明血清 miR-23b以及miR-126的含量与 cTnI呈显著正相关。

结论:急性心肌梗死血清中miR-23b及其miR-126表达水平明显增高，与血清cTnI及其CK-MB相关性好，提示血清miR-23b及其miR-126是潜在的急性心肌梗死患者临床早期诊断标志物，具有良好的临床应用前景。

关键词:血清;心肌梗死;miR-23b;miR-126

不明原因的突发胸痛涉及到的致死性疾病较多，包括急性心肌梗死，肺栓塞，主动脉夹层等疾病可对患者产生极大威胁[1]。因此，快速诊断急性心肌梗死十分必要，急性心肌梗死的诊断主要依赖于症状，体征，心电图及其实验室指标，其中，心电图是确诊急性心肌梗死十分重要的手段之一，但是，临床上发现部分心梗患者心电图无明显改变，实验室指标便成为诊断急性心肌梗死重要的方法[2]。临床上，cTnT，cTnI及其CK-MB是诊断急性心肌梗死可靠的指标[3]，但是单独凭借其结果并不能明确的诊断为心肌梗死[4]。因此，开发新型心肌梗死标志物在临床工作中有重要的意义。

miRNA是一类由21-23个核苷酸组成的非编码小RNA，由于miRNA在人血清和血清中持续存在，可通过影响细胞的分裂，增殖，凋亡和再生等参与肿瘤，自身免疫疾病，心血管疾病等病理生理过程[5, 6]。因此，运用miRNA作为疾病诊断的生物标志物在临床上具有良好的应用前景。研究发现，miR-1，miR-133a， miR-208和microRNA-499-5p是心肌细胞损伤重要的标志物[7]，动物实验表明，miR-23b及miR-126是心肌梗死重要的标志物[8, 9]，但是，临床上miR-23b及miR-126是否可以作为标志物检测心肌梗死至今尚未研究。因此，本课题组拟采用qRT-PCR检测miR-23b及miR-126在各组患者中表达情况，旨为心肌梗死早期诊断提供新方法及治疗提供新靶点。

1 资料与方法

1.1临床资料

选择2018年1月-2019年3月期间在江苏省无锡市第二人民医院心内科诊断为急性心肌梗死的107例患者为AMI组，85例健康体检者为对照组。纳入标准：AMI组：患者均表现为急性心肌梗死发作，且经冠脉造影检查确诊；对照组：健康体检者。排除标准：肿瘤患者，肺部疾病，肝肾功能不全者。两组患者均签署知情同意书。两组患者基线资料：AMI组91例男性，16例女性，年龄（64.76+13.5）岁；对照组72例男性，13例女性，年龄（60.23+9.5）岁。两组患者基线资料比较（年龄、性别比）无统计学差异（P<0.05）。

1.2血液标本采集

AMI组患者采集入院时及PCI术后7天静脉血；对照组采集体检时静脉血。

1.3血清miR-23b，miR-126水平检测

取5 ml外周静脉血样本，低速离心，分离血清，再用miRNA提取试剂盒(产自美国Qiagen公司)合成cDNA，运用TaqMan microRNA assay (产自Applied Biosystems公司)扩增miR-23b(000400, AUCACAUUGCCAGGGAUUACC)，以U6为内参，miR-23b水平以2^-△△Ct表示。

1.4血清学指标水平测定

取5 ml外周静脉血样本，离心，分离得到血清，测定血清中心肌肌钙蛋白(cTn)T（电化学发光法），量子点荧光免疫层析法测血清心肌肌钙蛋白(cTn)I，免疫紫外分光光度法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)。

1.5 统计学分析

本实验采用SPSS21.0软件进行统计分析，行正态性分布和方差齐性检验，两组比较采用成组t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析，P小于0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1一般资料

对照组与AMI组在年龄，性别方面无明显的统计学差异（P>0.05），详见表1。

表1 患者一般资料

2.2AMI患者组血清miR-23b水平明显增高

AMI患者组发病初期，其血清内miR-23b表达水平明显升高(2.23+1.00，P<0.05)，于术后第七天基本降至正常水平，与对照组相比无明显统计学差异(1.11+0.24，P>0.05)，与详见表2。

表2 各组miR-23b表达水平

*AMI术前与对照组相比，有明显统计学意义，P<0.05

2.3 AMI患者组血清miR-126水平明显增高

AMI患者组发病初期，其血清内miR-126表达水平明显升高(2.64+1.95，P<0.05)，于术后第七天基本降至正常水平，与对照组相比无明显统计学差异(1.09+0.43，P>0.05)，miR-126与miR-23b表现出同样的趋势，详见表3。

表3 各组miR-126表达水平

*AMI术前与对照组相比，有明显统计学意义，P<0.05

2.4AMI患者血清miR-23b，miR-126水平与cTnT，cTnI及CK-MB水平呈正相关

实验结果提示，术前患者血清中miR-23b表达水平与CK-MB水平呈明显正相关（R=0.832，P<0.001，见图一A），与cTnI呈正相关（R=0.2447，P<0.001，见图一B）。此外，患者血清中miR-126表达水平与cTnI表达呈明显正相关（R=0.3602，P<0.001，见图一C）。

图一 AMI患者血清miR-23b，miR-126水平与cTnT，cTnI及CK-MB水平相关性

3 讨论

miRNA在炎症，肿瘤，自身免疫疾病及其心血管疾病的发生发展过程中起重要作用，其参与该疾病过程中凋亡，增殖，坏死等病理生理过程。高通量测序表明miR-23b在坏死的心肌细胞中高表达，研究表明，miR-23b参与肿瘤和其他很多疾病的病理生理过程[10]。虽然cTnT，cTnI及其CK-MB是诊断急性心肌梗死可靠的指标，但是，cTnT，cTnI及其CK-MB升高也可是其他很多疾病的标志物[11]。

本研究检测心肌梗死患者血清中miR-23b及miR-126的表达水平，研究发现心肌梗死患者组血清中miR-23b及miR-126的表达明显增多，在术后7天，心肌梗死患者组血清中miR-23b及miR-126的表达明显降低，降至与正常对照组无明显差别。值得一提的是，我们研究发现该组人群中miR-23b及miR-126的表达水平与血清中CK-MB或cTnI成正相关，该结果预示血清中miR-23b水平可能预示AMI患者心肌受损程度，miR-23b及miR-126的表达水平可能与心肌梗死疾病的严重程度密切相关。

综上所述，AMI患者血清中miR-23b及miR-126水平升高可作为诊断急性心肌梗死的潜在指标，血清miR-23b及miR-126含量的变化可作为预测和判断急性心肌梗死治疗和疗效评估的重要指标，这也预示着miR-23b及miR-126可能参与了急性心肌梗死时心肌细胞损伤，重构等病理生理过程。

参考文献：

[1] 非胸痛急性心肌梗死患者冠状动脉 再通时间的院前影响因素分析. 中华危重病急救医学 2016; 28: 603-606.

[2] 柯元南 and 陈纪林. 不稳定性心绞痛和非ST段抬高心肌梗死诊断与治疗指南. 中华心血管病杂志 2007; 35: 295-304.

[3] Giannitsis E and Katus HA. Cardiac troponin level elevations not related to acute coronary syndromes. Nature Reviews Cardiology 2013; 10: 623-634.

[4] Mueller C, Giannitsis E, Christ M, Ordonezllanos J, Defilippi CR, Mccord J, Body R, Panteghini M, Jernberg T and Plebani M. Multicenter Evaluation of a 0-Hour/1-Hour Algorithm in the Diagnosis of Myocardial Infarction With High-Sensitivity Cardiac Troponin T. Annals of Emergency Medicine 2016; 68: 76-87.

[5] 王虹 and 林英忠. miRNA:急性心肌梗死治疗新战略标靶. 中国老年学杂志 2011; 31: 3000-3002.

[6] 裴颖皓. miRNA在急性心肌梗死诊断中的研究进展. 医学综述 2014; 20: 616-618.

[7] 杜守治, 董斌 and 齐中华. 急性心肌梗死和急性脑梗死miRNA疾病标志物的初步筛查. 中国医科大学学报 2017; 46: 681-685.

[8] 李国达, 刘衍宇, 方凌燕, 凌云, 梁一波, 邓玉丽 and 余丽. miR-126及VEGF在大鼠心肌梗死交界区表达的动态变化. 心脏杂志 2015; 639-644.

[9] miR-126对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响. 中国比较医学杂志 2016; 26: 57-63.

[10] 易志刚, 郭文安, 吴娟, 黄上萌, 李津 and 池清华. 高糖通过下调miR-23b促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移. 中国卫生标准管理 2016; 7: 20-23.

[11] 黄春晓, 曹丽霞 and 赵明. CTNI、CK-MB、Mb在心肌梗死中的意义. 中国误诊学杂志 2011; 11: 3645-3646.