骨髓细胞形态学结合免疫分型在急性髓系白血病的应用

骨髓细胞形态学结合免疫分型在急性髓系白血病的应用

蒋叙川

简阳市人民医院，四川简阳 641400

摘要：目的 探讨骨髓细胞形态学（包括细胞化学）结合细胞免疫分型在急性髓系白血病（AML）中的诊断作用。方法 分析已确诊的65例急性髓系白血病患者的细胞形态学和免疫表型结果。结果 FAB细胞形态学分型结合细胞化学染色的急性髓系白血病（AML）与免疫分型的符合率为78.5%，细胞免疫分型对于细胞化学染色（过氧化物酶POX）阳性率小于3%或阴性的AML更具有诊断价值。结论 细胞免疫分型是诊断AML的重要手段，可以弥补细胞形态学分型的不足，进一步提高AML的诊断率。

[关键词] 急性髓细胞白血病；形态学；细胞免疫表型

白血病是造血干细胞克隆性疾病，是一组高度异质性的恶性血液病，具有明显的质和量的异常。目前多数实验室对白血病的诊断仍以FAB分型和细胞化学染色为主。由于FAB形态学分类受白血病细胞的高度异质性的影响给诊断带来一定困难，其准确性为60%-80%。WHO提出了白血病的MICM分型标准，但由于细胞遗传学和分子生物学分型受到多方面的限制，其开展难度较大，随着流式细胞分析仪的快速发展，并且在临床上日趋广泛的应用，可以弥补形态学分类的不足，因此细胞免疫分型逐渐成为白血病分型的一种重要技术。本文对我院65例初诊为急性髓系白血病（AML）患者FAB细胞形态学（包括细胞化学）与细胞免疫表型分型比较，结果报告如下。

1资料与方法

1.1病例资料 2015-2016年我院诊断的AML患者65例，其中男性37例、女性28例，年龄14岁-77岁。

1.2仪器与试剂 细胞过氧化物酶染色（POX）、糖原染色（PAS）和醋酸萘酚酯酶染色（NAE）试剂为贝索公司提供；细胞免疫分型采用BECKMAN COULTER CYTOMIC FC 500流式细胞分析仪及其原装试剂。所用单克隆抗体包括：CD2、CD3、CD5、CD7、CD9、CD10、CD19、CD20，CD11b、CD13、CD14、CD15、CD56、CD64、CD71、CD38、CD33，CD34、CD117、CD38、HLA-DR。

1.3 方法

1.3.1 骨髓细胞形态学 常规方法为采集患者骨髓标本。经涂片和瑞氏吉姆萨染色后，油镜下分类计数200个有核细胞，依据FAB分型法进行分型，同时选择进行POX、PAS和NAE染色。

1.3.2 细胞免疫分型 采集肝素抗凝的患者骨髓1-2ml，检测步骤及结果判断参照仪器和试剂说明书，免疫分型结果判读参考《血液病诊断及疗效标准》^[1]。

2 结果

2.1骨髓细胞形态学分型 按照FAB形态学结合细胞化学染色分型，65例急性髓系白血病诊断为M₁ 7例，M₂ 22例，M₃ 5例，M₄ 9例，M₅15例，M_,6 3例，4例误诊为急性淋巴细胞白血病（ALL），分类中以M2和M5型多见，分别占33.8%和23.1%。

2.2 细胞免疫分型 65例急性髓系白血病经细胞免疫分型为：M0 4例，M1 7例，M2 25例，M3 5例，M4 5例，M5 17例，M6 2例。急性髓细胞白血病患者髓系抗原以CD13、CD33、cMPO、CD117为主要表达，CD64在M4和M5中有很高表达，GlyA是红系的特异性标记，在M6中均有表达。干祖细胞免疫标记CD34和HLA-DR亦有较高表达，但不在AML-M3中表达。cMPO在髓系中除MO以外的各型均有不同程度的表达，CD117在髓系各型中均有表达。骨髓细胞形态学FAB分型结合细胞化学染色的结果与细胞免疫分型的符合率为78.5%。4例POX染色阳性率小于3%或阴性的急性髓细胞白血病（AML-M0），经细胞形态学分型误诊为ALL。其结果见下表：

65例急性髓细胞白血病免疫分型结果

3 讨论

目前骨髓细胞形态学检查是基于白血病细胞的质和量的变化进行FAB分型，虽然易受检验人员专业知识的主观因素以及形态学不典型白血病的诊断有很淡大局限性，从而导致准确率不高。但仍然是诊断急性白血病最基础、最简便、最快适用的检查方法之一。细胞化学染色是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对细胞内的各种化学物质作分析的方法，可以辅助判断急性白血病的细胞类型。急性白血病是由于造血干、祖细胞恶性转化增殖而发病，白血病细胞可出现某些抗原缺失、过表达、系列交叉以及跨阶段表达等免疫分子表达异常，这种异质性有利于白血病分型的诊断^[2]。随着流式细胞技术的发展，细胞免疫分型提高了急性白血病诊断的准确性、重复性。特别是对细胞形态学和细胞化学染色（POX）有困难的急性髓细胞白血病微分化型（AML-M0）有明显优势。主要是因为该类白血病细胞形态复杂，必须依赖免疫分型才能确诊^[3]。本文4例细胞形态学结合化学染色误诊为急性淋巴细胞白血病（ALL），经细胞免疫分型均证实为AML-M0型。另外，由于患者个体差异，单独某一抗原阳性表达对鉴别细胞价值不大，应尽可能同时检测多种抗原，综合分析才能更准确地判断白血病细胞的来源、种类以及阶段，特别是对某些抗原表达或形态不典型的患者，可以减少误诊和漏诊。细胞免疫分型还可以依据细胞免疫表型对双表型或者混合型急性白血病的诊断有着明显的优势。因此流式细胞免疫分型可以更全面地、准确检测出细胞抗原的分布情况，弥补了细胞形态学和血细胞化学分型的不足。但免疫分型也不能完全替代FAB分型，AML亚型的分类还是要结合细胞形态和化学染色才能确定。二者相互结合、互相补充，才能更好的提高急性髓细胞白血病的诊断率。

参考文献

[1]张之南.血液病诊断及疗效标准[M].3版.北京:科学出版社,2008.

[2]杨艳丽，耿英华等 急性髓细胞白血病免疫分型特点及临床意义。蚌埠医学院学报2011,36（6）:561-563.

[3]黄兴琴，陈洁平，张勇等.132例急性白血病免疫分型结果分析[J].西部医学,2010,22（7）:1191-1192.

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