地中海贫血的产前筛查和基因诊断

地中海贫血的产前筛查和基因诊断

于晓明

泰安市妇幼保健院 山东泰安 271000

摘要:目的:调查分析本地区孕妇地中海贫血发病率、基因类型，探寻地中海贫血产前可靠的诊断证据。方法:对2015年3月至2017年2月11809例在我院所有进行产前检查的孕妇中开展广泛的血液学检查，对检测阳性的患者进行基因检查，并对孕妇的配偶进行筛查。对夫妻双方都患有同种类型地中海贫血的进行产前诊断，怀疑地中海贫血的夫妻进行日基因突变测序、比对，探究未知的突变基因。结果:11809例孕妇中确诊地中海贫血有248例，发病率为2.1%，其中α地中海贫血有130例，发病率3.05%;β地中海贫血患者有118例，发病率2.73%。产前诊断重型地中海贫血患儿8例。血液学检测RBC, Hb, MCV, RDW, HbA2在α, β ,α/β和β/β间差异有统计学意义(P＜0.05)。结论本地区α地中海贫血发病率比α地中海贫血高，血液学指标中的红细胞参数以及血红蛋白定量检测是筛查本病的重要指标。通过对孕妇进行地中海贫血的产前筛查，可以确诊重症患儿来及时终止妊振，避免重症患儿的出生。

关键词：地中海贫血;产前筛查;基因诊断;治疗研究

地中海贫血(thalassemia,简称地贫)是一组全球最常见的、对人类健康影响极大的单基因遗传病,其分子病理学基础主要是由于珠蛋白基因的缺陷(基因突变或缺失),使血红蛋白(Hb)四聚体中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或缺乏(即不能合成),而引起血红蛋白的组成成分(四聚体的α链、非α链)比例失衡,进而导致血红蛋白不稳定、红细胞破坏,表现为临床症状轻重不等的慢性进行性溶血性贫血^[1]。

1.资料与方法

1.1研究对象

2015年3月至2017年2月在我院所有进行产前检查的孕妇11809例，红细胞指标异常并排除缺铁及其他贫血疾病。对孕妇进行血常规和血红蛋电泳分析，并对248例地贫表型阳性者进基因检测。

1.2研究方法

用日本System KX-21自动血细胞分析仪及其配套的稀释液和溶血素试剂测定，实验前严格按照操作规程进行质控，标本为构椽酸钠静脉抗凝血1 mL。应用西门子公司的Spifecombo血红蛋白电泳仪，使用与仪器配套的Spife aLKaL I NE (pH816) Hb琼脂凝胶板。扫描仪是西门子公司Quick2scαn20000筛查血红蛋白(Hb)、平均血红蛋白(MCH)、红细胞数(RBC)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)，测定血清铁蛋白、血红蛋白A₂(Hba2)及抗碱血红蛋白(HbF)的含量。Hb<110g>6,RBC/Hb>27.7, RDW>15.0%，血清铁蛋白正常，示地中海贫血筛查阳性。血红蛋白电泳Hba2<2.5%，示A地贫表型阳性;Hba2/3.5%或/和HbF>2，示β地贫表型阳性;2.5%

1.3基因诊断

采用益生堂生物企业有限公司提供α、β地贫基因诊断试剂盒，按说明检测正常。基因和-SEA、-A3.7、-A4.23种常见缺失型α地中海贫血和HbCS,HbQS,HbWS,AvCD30，AvCD31和AvCD596种非缺失型。地贫以及17种α地中海贫血；试剂盒未诊断的筛查指标疑似β-地中海贫血的病例，进行α基因的突变热点测序，设计引物Beg-F；5c-CaGGTaCGGCTGTCaTCa-3c；IV654-R1；5c-aGCGaGCTTaGTGaTaCTTGTG-3c，按96e3 miny (96e30s，60e45s，72e2min)@30循环y72elOmin扩增β基因的3个外显子和2个内含子共1613bp，送上海英骏公司进行正、反向测序，accelrysLicense Pack进行核酸序列比对。

2.结果

11809例孕妇中确诊地中海贫血有248例，发病率为2.1%，其中。地中海贫血有130例，发病率3.05%; α地中海贫血患者有118例，发病率2.73。产前诊断重型地中海贫血患儿8例。血液学检测RBC,Hb, MCV, RDW, Hba2在α、β、α/β和β/β间差异有统计学意义(p<0.05)。对248例地中海贫血患者或基因携带者进行基因诊断，其中。地中海贫血130例α地中海贫血118例，检出β基因IVS-2nt654 (CyT)基因突变50例，CD41-42 (-CTTT)基因突变41例，TaTaboxnt-28 (AyG)突变14例，CD17 (AyT)突变13例，CD71-72(+C)突变2例，CD27-28(+C)突变2例，CD43 ( GyT)突变2例，TaTaboxnt-29 (AyG)突变1例，IVS-lntl(GyT)突变1例，BE2例，结果不明6例。

讨论

地中海贫血在我国南方发病率更高，是危害极大的染色体显性遗传疾病之一，临床按照受累基因将其分为β型地中海贫血和α型地中海贫血。多数α地中海重症胎儿在妊娠末期死在腹中，或产后30 min便死亡；通常，β地中海重症患儿及血红蛋白H病患儿在产后4～6个月发病，发育不良，有中度或重度贫血症，要维持患儿生命必须长期输血并十分严格的预防输血并发症，多数患者在未成年前夭折。 

基因诊断技术对医院条件要求高，因此难以在基层医院开展，可使用方便、简单的血液学法筛查地中海贫血疾病，包括检测红细胞脆性、红细胞参数（MCHC、MCH、MCV）及血红蛋白电泳等^[2]。血红蛋白电泳能对Hba2、HbF、Hba含量准确测量，并对地中海贫血进行分型，有效筛查高危夫妇，避免重症地中海贫血新生儿给高危夫妇带来巨大经济负担和心理创伤。  　　综上所述，地中海贫血是具有遗传性的疾病，患有该病的新生儿需要依靠长期输血延续生命，给家庭及社会造成极大负担。地中海贫血产前筛查能有效区别高危夫妇，确诊地中海贫血的胎儿，终止妊娠，大范围的筛查对提高我国新生儿人口素质有重要意义。

参考文献：  [1]朱宝生，贺静，张杰，等.云南省地中海贫血基因携带者及患者α和β珠蛋白基因突变谱与产前基因诊断[J].中华妇产科杂志，2012，47（2）：85-89.  [2]屈艳霞，陈桂兰，李志华，等.产前地中海贫血基因诊断257例分析[J].中国计划生育学杂志，2015，23（5）：324-327.