HPLC 法测定阿奇霉素片中阿奇霉素的含量

HPLC 法测定阿奇霉素片中阿奇霉素的含量

石陈子璐

浙江大学医学院附属第一医院 浙江杭州 310006

摘要：目的：采用高效液相色谱法（HPLC）测定阿奇霉素片中阿奇霉素的含量。方法：色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6×150 mm，5μm），流动相为乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（以氢氧化钠调至PH6.8）（35：65），检测波长：210nm，流速：1mL·min-1，柱温：35℃，进样量：10μL。结果：阿奇霉素在95μg·mL-1~960μg·mL-1范围内线性关系良好，相关系数为0.9999（n=5），平均回收率为99.80%，RSD为0.46%(n=6)。结论：本方法操作简单，准确可靠，灵敏度高，重现性好，可用于阿奇霉素片的质量控制。

关键词：高效液相色谱法；测定；阿奇霉素；含量

阿奇霉素为第二代大环内酯抗生素，与一般的抗生素相比，阿奇霉素片属于半合成类型的大环内酯药品，抗菌谱广，稳定性好，疗效确切，药用价值比较高，能够对受到敏感细菌影响而形成的疾病起到一定的治疗效果，临床上常被用于治疗下呼吸道感染、支气管炎、急性中耳炎、尿道炎、宫颈炎以及敏感细菌引起的皮肤软组织感染等。为了控制阿奇霉素片的质量，确保药物疗效，笔者采用高效液相色谱法测定阿奇霉素片中阿奇霉素的含量，准确可靠，灵敏度高，重现性好，可用于阿奇霉素片的质量控制。现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪，CLASS—VP色谱工作站(日本岛津) ，METTLER TOLEDO AB135-S型十万分之一天平（METTLER，瑞士），AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机。

1.2试药 阿奇霉素对照品：批号：130352-20000405，由中国药品生物制品检定研究院提供；阿奇霉素片：由上海某药业有限公司提供，批号：170905、171206、180109，规格0.25g；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯；水为自制去离子超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Agilent TC-C18柱 （4.6× 150 mm，5μ m）；流动相为乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（以氢氧化钠调至PH6.8）（35：65），检测波长为210nm，流速：1mL ·min-1，柱温：35℃，进样量：10μL。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液 精密称取阿奇霉素对照品50mg，置于50mL容量瓶中，加适量流动相溶解后，定容，摇匀，即得浓度为1g ·L-1的阿奇霉素对照品储备溶液。

2.2.2供试品溶液 取精密称取阿奇霉素对供试品适量（约相当于阿奇霉素250mg），置于50ml的容量瓶中，加流动相适量，充分摇匀使其溶解，再用流动相稀释至刻度线，摇匀。精密移取5ml置于50ml容量瓶中，加流动相定容至刻度线，摇匀。经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液2ml，进样10μL。

2.3系统适用性 分别取阿奇霉素对照品溶液、供试品溶液适量，在上述色谱条件下进样10ul。记录并观察2份溶液的色谱图。结果得出阿奇霉素峰的理论塔板数不低于3000，对照液中无干扰峰干扰测定，对照液与供试液中阿奇霉素峰的保留时间一致，阿奇霉素峰周围无干扰峰，本方法专属性好。

2.4线性关系考察 精密移取浓度为1mg ·mL-1的阿奇霉素对照品储备溶液适量，用流动相逐级稀释成含阿奇霉素浓度为1000、800、400、200、100ug ·mL-1等5个浓度级别的系列对照品工作溶液，进样10μL。记录各浓度阿奇霉素对照液的峰面积。结果得出，阿奇霉素在95μg·mL-1~960μg·mL-1范围内线性关系良好，以阿奇霉素浓度为横坐标，所得峰面积为纵坐标，得线性回归方程为Y=658.7X+61.26，相关系数为0.9999（n=5）。

2.5精密度、重复性考察 配制6份对照品溶液和6份供试品溶液，进样10μL，得RSD值分别为0.31%、0.45%，表明精密度和重复性良好。

2.6稳定性试验 取同一供试品溶液，照上述色谱条件分别于0、2、4、6、8h进样，测定峰面积，计算得出RSD=0.72％，表明阿奇霉素供试品溶液室温放置8h稳定。

2.7辅料干扰实验 根据其处方，按处方比例精密称取辅料107．98mg，置100mL量瓶中，加入约70mL稀释剂至量瓶中，摇匀，超声10min后，用稀释剂稀释至刻度，并振摇30rain。离心( 3000 r-rain)1 0min，取上清液作为供试品溶液。结果表明，辅料对含量测定方法无干扰。

2.8回收率实验 取已知含量的阿奇霉素片细粉适量共6份，精密称定，分别精密加定量阿奇霉素对照品，按供试品溶液的制备方法制取后，进行含量测定，计算回收率。实验所得阿奇霉素的回收率为99.80%，RSD为0.46%。见表l 。

表1.回收率试验数据(n=6)

2.9样品含量测定 将待测样品按“2.2.2”项下方法配制，进样，记录峰面积，采用外标法计算阿奇霉素胶囊中阿奇霉素的含量。结果见表2。

表2.含量测定结果

3.小结

 柱温的选择方面，通过比较各种柱温下的色谱图，发现在35℃的柱温下，峰形和半峰宽相对都比较好，因此柱温选择35℃。

检测波长的选择方面，紫外扫描在波长190nm~350nm 范围内进行，检测到当阿奇霉素处在210nm 波长的时候最有易于吸收到最大值，因此，检测波长选择为210nm。

综上所述，本法测定阿奇霉素的含量操作简单，准确可靠，灵敏度高，重现性好，可用于阿奇霉素片的质量控制。

参考文献：

[1]中国药典二部.[S].中国医药科技出版社.2010

[2]曹晨.高效液相色谱法测定阿奇霉素片的含量[J].黑龙江科技信息.2015年22期 [3]李荣誉,宋全兵,王林.高效液相色谱法测定阿奇霉素的含量[J].黑龙江畜牧兽医.2017年12期

通讯作者：石陈子璐，通讯邮箱：1713016@zju.edu.cn