龙葵对小鼠慢性支气管炎的影响

龙葵对小鼠慢性支气管炎的影响

谢双溪 1，王燕 *，严鑫 2，严清艳 2，刘劲萱 2，沈茹晗 3

长沙医学院基础医学院 湖南省 长沙市 410200 

中文摘要：目的:研究龙葵提取物对慢性支气管炎的治疗效果。方法：通过氨气刺激法诱发建立小鼠慢性支气管炎的模型，龙葵萃取物及阳性对照组固本培元膏给药，并通过小鼠行为学分析，肺气管组织进行石蜡固定HE染色后，切片的镜下炎症细胞浸润支气管计数分析，对龙葵提取物治疗小鼠慢性支气管炎进行初步研究，通过小鼠慢性支气管炎模型小鼠生理机能的检测，评价龙葵治疗慢性支气管炎的作用。结果:龙葵对小鼠非支气管炎症细胞浸润改善明显，且对比分析实验组与模型组结果较有统计学意义（P<0.05）,同时改善了小鼠食欲减退，体重下降，精神萎靡等症状。结论：龙葵对慢性支气管炎有一定效用，治疗效果较好，为临床治疗慢性支气管炎以及气管炎提供新的思路与途径。

英文摘要：Objective to study the therapeutic effect of Solanum nigrum extract on chronic bronchitis in mice. Methods the model of chronic bronchitis in mice was induced by ammonia stimulation. Solanum nigrum extract and Guben Peiyuan ointment in the positive control group were administrated. The preliminary study of Solanum nigrum extract on chronic bronchitis in mice was carried out through the observation of naked eye and lung and trachea sections The results showed that Solanum nigrum significantly improved the infiltration of non bronchitis cells in the experimental group compared with the model group (P < 0.05), and improved the symptoms of anorexia, weight loss, mental depression and respiratory distress in the mice. Nasal secretions were reduced or disappeared, Conclusion Solanum nigrum is effective in the treatment of chronic bronchitis.

关键词：龙葵；慢性支气管炎；治疗效果；炎症细胞

慢性支气管炎（Chronic bronchitis），是气管、支气管黏膜、黏膜下层、基底层、外膜及其周围组织的非特异性慢性炎症。临床上常以“咳、痰、喘”及反复性、慢性过程为特征[1]。慢支的病情进展常并发阻塞性肺气肿、肺动脉高压甚至肺源性心脏病[2]。患者不同程度地丧失日常生活的能力，严重威胁患者的身体健康与生活质量。

中药龙葵是茄科（Solanaceae）茄属植物龙葵（Solanum nigrum Linne.）的干燥地上部分，又名苦菜、苦葵，分布较广，常见于农田、荒地、村庄等地。性寒，味苦、微甘，有小毒，归心、肾经，具有清热解毒、活血消肿、消炎利尿的作用。临床用于治疗疔疮痈肿、小便不利和肿瘤等病症[3]。

研究表明，龙葵多糖具有激活巨噬细胞，提高吞噬作用，拮抗肿瘤，清除循环免疫复合物、增强T细胞依赖性应答等作用[4]。Shen等及Razali等的研究发现，龙葵多糖能通过降低Akt的活性，PKCα，RAS，和NF-κB蛋白，显著抑制细胞迁移和侵袭，一定程度上抑制细胞移位的发生[5]。

材料

实验动物

SD小鼠，随机分为4组，每组7只，雌雄各半，动物养于无毒塑料盒中。每天更换垫料一次，自由摄食物和饮水。室内温度18-22摄氏度，相对湿度40%-60%，自然光照。

分组及给药方案

正常组：正常小鼠+生理盐水（60mg/Kg）

模型组：慢性支气管炎小鼠+生理盐水（60mg/Kg）

阳性对照组：慢性支气管炎小鼠+固本培元膏（60mg/Kg）

实验组：慢性支气管炎小鼠+龙葵萃取物（60mg/Kg）

慢性支气管模型建立

将除空白对照组之外的其他组小鼠分别放入熏箱。用含氨气的空气以每15～20分钟重复刺激1次，每次2～3分钟，一天8次，共30天。第31天进行检查，若小鼠出现咳嗽，口鼻腔出现分泌物，肺气管组织石蜡固定HE染色切片的镜下观察出现炎症细胞浸润支气管则造模成功。

一般状态观察及指标测定

小鼠行为学观察

实验中以空白对照组为对照，观察小鼠接受刺激后是否出现咳嗽、抽搐、体重下降、食欲减退、口鼻腔出现分泌物等症状。并记录全过程小鼠体重变化与受刺激5min后咳嗽情况。

支气管、肺组织病理观察

本实验病变的主要表现为支气管周围炎症细胞浸润。分别记录有无炎细胞浸润支气管数目。

统计学处理

采用SPSS15.0软件进行条件下处理，计量资料X±S表示，组间比较采用单因素方差分析。

结果

模型组小鼠体质量相较正常对照组小鼠明显减少，而且模型组小鼠质量偏轻，给药后，阳性对照组及龙葵实验组小鼠体重开始回升，与模型组相较，龙葵组（P=0.0336<0.05）,阳性对照组（P=0.0433<0.05）具有显著意义，见表1

表 1龙葵对慢性支气管炎小鼠体重的影响（X±S）Effect of Solanum nigrum on weight of mice with chronic bronchitis (X±S）

给药后龙葵实验组与阳性对照组咳嗽次较前数明显偏少,与模型对照组比较，龙葵组（P=0.0311<0.05），阳性对照组（P=0.0409<0.05）具有显著意义，见表2

表 2龙葵对小鼠慢性支气管炎刺激后5min内咳嗽次数的影响(X±S）Effect of Solanum nigrum on the number of coughs in 5 minutes after chronic bronchitis stimulation in mice (X±S)

与空白对照组相较，模型组浸润的支气管数明显高于对照组，非浸润支气管与总志气管比值明显较低。龙葵实验组与阳性对照组浸润的支气管数明显高于模型组，非浸润支气管与总志气管比值明显较高。与模型组比较，龙葵实验组（P=0.0262<0.05）,阳性对照组（P=0.0143<0.05）具有显著意义，见表3

表 3龙葵对慢性支气管炎小鼠支气管炎症细胞浸润的影响(X±S, n=7) Effect of Solanum nigrum on cell infiltration of bronchitis in mice with chronic bronchitis (X±S, n=7)

病理检查结果（均为HE染色*400倍）

空白组（见图1）: 黏膜假复层柱状上皮细胞正常，无炎细胞浸润。模型组（见图2）: 黏膜假复层柱状上皮细胞增生，杯状细胞增多，可见炎症细胞浸润。阳性对照组（见图3）: 黏膜假复层柱状上皮细胞少量增生，杯状细胞可见少量增多，炎症细胞浸润减轻。龙葵实验组（见图4）：黏膜假复层柱状上皮细胞少量增生，杯状细胞可见少量增多，炎症细胞浸润减轻周围可见少量结缔组织。

图1 空白组 图2 模型组 图3 阳性对照组 图4 龙葵实验组

讨论

本实验通过氨气刺激法诱发建立小鼠慢性支气管炎的模型，运用龙葵萃取物及阳性对照组固本培元膏给药，并通过小鼠行为学分析及肺气管组织石蜡固定HE染色切片的镜下炎症细胞浸润支气管计数分析等对龙葵提取物治疗小鼠慢性支气管炎进行初步研究，结果所示：龙葵能改善慢性支气管炎小鼠体重下降的症状，并减少小鼠慢性支气管炎刺激后5min内咳嗽次数，减弱慢性支气管炎小鼠支气管炎症细胞浸润，可知龙葵对慢性支气管炎有一定治疗作用。

所得结果与李东[6]对小鼠5min咳嗽次数的对比分析，熊蕾[7]、王勃[8]小鼠支气管浸润情况，结果基本一致，但本结果与以上研究结果相比，对小鼠的体重变化进行了前后对比分析，更有利的证明了实验组的药物对慢性支气管炎的治疗效用。

本实验由于条件受限未对实验组及阳性对照组进行多剂量实验，未进行血象分析，之后实验可进一步改进，后期研究可围绕龙葵对小鼠慢性支气管炎的治疗机理及有效成分的提取等方向进行。

参考文献：

[1] 庄严, 李贵南, 周勇,等.慢性支气管炎相关因素研究[J]. 中国新生儿科杂志, 2014, 29(6):376-380.

[2] 赵冬莹, ZHAODong-ying.慢性支气管炎的治疗进展[J]. 临床儿科杂志, 2012, 30(9):887-890.

[3] 李时珍. 本草纲目. 北京: 人民卫生出版社, 2003: 1046-1048

[4] Razali F N, Ismail A, Abidin N Z, et al. Stimulatory Effects of Polysaccharide Fraction from Solanum nigrum on RAW 264.7 Murine Macrophage Cells. Plos One, 2014, 9(10): 141-152

[5] 龚时文, 赵志毅, 黄春南,等.慢性支气管炎道细菌移位[J]. 广东医学, 2001, 22(1):26-27.

[6] 李东. 葎草颗粒对慢性支气管炎模型小鼠的作用.医药导报2015,(34)10,1284-1287

[7] 熊蕾,汪佳政,皮建辉,谭娟筋.骨草提取物对小鼠慢性支气管炎的干预作用.怀化学院大学生研究性学习与创新性计划项目(怀院教发[2012]12号) R562.21;R283.6;R-332;

[8] 王博,齐绪交,张俊威,王伟明,李继昌黑龙江中医药2018,(47)05,155-156.芪风固表颗粒对慢性支气管炎模型肺泡灌洗液及肺组织病理学影响.

作者简介：谢双溪，男，湖南邵阳，临床医学，2017级

通讯作者：王燕，女，湖南长沙，实验师

项目资助：本项目受长沙医学院大学生创新性项目资助项目编号：（长医教〔2019〕61号-137）