小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量均匀度测定

小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量均匀度测定

闫红贺

哈药集团制药六厂 黑龙江 哈尔滨 150056

摘要：目的 建立高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中的马来酸氯苯那敏含量均匀度。方法 色谱柱为迪马Diamonsil-C18（4.6*250*5um）；流动相为磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸1ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（75:25）；柱温为30℃；检测波长为262nm；进样量20ul，外标法以峰面积计算。结果 小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏线性范围为8-28ug/ml，相关系数为0.9997。平均回收率为100.6%，RSD=0.97%。结论 本方法可以准确的测定小儿氨酚黄那敏颗粒中的马来酸氯苯那敏含量，重现性好，稳定可靠。

关键词：小儿氨酚黄那敏颗粒；马来酸氯苯那敏；含量均匀度

小儿氨酚黄那敏颗粒是由对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、人工牛黄为主要成分，添加必要辅料制成的复方制剂，主要用来治疗小儿感冒、解热、镇痛。目前国家标准中规定检测对乙酰氨基酚的含量，采用紫外分光光度法测定，但是对于马来酸氯苯那敏并未做要求，但是，马来酸氯苯那敏作为缓解小儿感冒过程中的打喷嚏流鼻涕等症状具有重要作用，所以，马来酸氯苯那敏的含量是否均匀至关重要，根据国家药典委员会对小儿氨酚黄那敏颗粒标准提高中提及的测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量均匀度的方法，对该方法的不适用性进行了部分改良，得到了一种采用高效液相色谱仪测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量均匀度的有效方法。

1仪器与试剂

安捷伦高效液相色谱仪1260系统，紫外检测器，马来酸氯苯那敏对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号：100047-201507），小儿氨酚黄那敏颗粒（批号161101、161102、161103马来酸氯苯那敏标示量为0.5mg），乙腈为色谱纯，磷酸二氢铵为分析纯，水为纯化水。

2方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱为迪马Diamonsil-C18（4.6*250*5um）；流动相为以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵11.5g，加水适量使溶解，加磷酸1ml，用水稀释至1000ml）-乙腈（75:25）；柱温为30℃；检测波长为262nm；进样量20ul，外标法以峰面积计算。

2.2对照品及样品制备 取小儿氨酚黄那敏颗粒10袋，分别置25ml量瓶中，加流动相适量，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取马来酸氯苯那敏对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含马来酸氯苯那敏20μg的溶液，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算每袋的含量，并求得10袋的平均含量，即得。出峰顺序为马来酸峰和氯苯那敏峰。

2.3专属性 按照处方中的辅料量，称定一定量的各辅料混合均匀，精密称定约相当于一袋量的辅料，置25ml容量瓶中，加流动相溶解定容，过滤后得辅料溶液。将马来酸氯苯那敏对照品、辅料溶液和供试液按照2.1项色谱条件注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在氯苯那敏峰出峰处辅料峰没有干扰，辅料对氯苯那敏含量测定没有影响。

2.4线性 精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量加流动相制成1ml中含有0.1mg马来酸氯苯那敏的对照品溶液1，精密吸取0.4、0.6、1.0、1.2、1.4ml对照溶液1，至50ml容量瓶中，加流动相定容至刻度，制成浓度为8ug/ml、12 ug/ml、20 ug/ml、24 ug/ml、28 ug/ml的溶液，按照以上色谱条件进样，以浓度对峰面积进行线性方程，相关系数为0.9997，结果表明马来酸氯苯那敏在该色谱条件下在8-28ug/ml浓度范围内，呈现良好的线性关系。

2.5重复性实验 取小儿氨酚黄那敏颗粒（161101）6份分别置于25ml容量瓶中，加流动相溶解定容，滤过，取续滤液20ul注入液相色谱，按照上述色谱提条件进样，6份样品结果RSD=0.91%（n=6）

2.6回收率实验 取马来酸氯苯那敏对照品溶液1分别精密吸取8ml加入事先精密称定好的相当于一袋处方量的辅料的25ml容量瓶中，共操作6份，流动相定容，混匀，取续滤液按照上述色谱条件进样，结果平均回收率为100.6%，RSD=0.97%（n=6）。

2.7中间精密度 分别由实验人员1和实验人员2在不同日期、不同仪器对同一批次样品进行测定，分析员1和分析员2各自平行2份样品马来酸氯苯那敏含量，中间精密度试验测定结果平均值的差值为1.05%。

2.8耐用性实验

2.8.1色谱柱的影响 分别考察了不同色谱柱厂家(WATERS、安捷伦、迪马)三家色谱柱厂家相同色谱条件下进样，结果三家色谱柱进样结果均符合要求，氯苯那敏峰与杂质峰分离度为2.01、1.96、1.88均符合要求，理论塔板数能达到4000以上，同时连续进样5针的峰面积的rsd为0.49%符合要求。

2.8.2柱温的影响 将柱温分别设定为25℃、35℃进行实验，考察柱温对该方法的影响，结果均符合要求，氯苯那敏峰与杂质峰分离度为2.01、2.35，理论塔板数能达到4000以上，同时连续进样5针的峰面积rsd分别为0.66%、0.75%符合要求。

2.8.3流速的影响 将液相色谱仪的流速分别设定为0.8ml/min及1.2ml/min进行实验，考察流速对该方法的影响，结果均符合要求，氯苯那敏峰与杂质峰分离度为均符合要求，理论塔板数能达到4000以上，同时连续进样5针的峰面积的rsd为0.82%符合要求。

2.8.4样品稳定性影响 将同一份样品的溶液在室温下放置，分别在0、2、4、8、16、24小时测定其峰面积，计算峰面积的RSD=0.95%（n=6）。说明该方法的样品溶液稳定，在24小时之内都可以进行测定。

2.9不同厂家产品的适用性 取3个不同厂家生产的小儿氨酚黄那敏颗粒按照该方法测定氯苯那敏含量均匀度，结果见下表

表1不同厂家氯苯那敏含量均匀度对比

上述结果可以看出，该方法测定不同厂家的产品适用性好，准确度高。

3讨论

由于马来酸氯苯那敏在小儿氨酚黄那敏颗粒中含量低，所以控制其含量均匀度极为重要，本方法简单快速，样品中马来酸氯苯那敏与其他成分分离度好，各辅料成分对氯苯那敏含量测定没有干扰，且操作简便，上述三家产品测定结果均符合含量均匀度要求。

参考文献：

[1]《中国药典》2015年版4部

[2]小儿氨酚黄那敏颗粒标准（国家药典委员会征求意见稿）

[3]ICH指导原则Q2（R1）

[4]药品检验标准操作规程2015版