蔷薇科中药配方颗粒微生物限度检查法方法学研究

蔷薇科中药配方颗粒微生物限度检查法方法学研究

刘彦

黑龙江省中医药科学院 黑龙江 哈尔滨  150036

【摘要】目的 建立蔷薇科中药配方颗粒微生物限度检查法，并使用方法学加以验证。方法 采用常规法（平血法）、薄膜过滤法。 结果 使用常规法测定，蔷薇科中药8种配方颗粒中山楂、苦杏仁、桃仁、乌梅、木瓜对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉的回收率均高于70%，而其中地榆、金樱子、枇杷叶对试验菌株均出现不同的抑制作用，回收率部分低于70%；使用薄膜过滤法，蔷薇科中药8种配方颗粒对5种试验菌株均无抑制作用，回收率均高于70%，说明蔷薇科中药8种配方颗粒均可采用薄膜过滤法进行细菌检查、酵母菌以及霉菌计数。 结论 蔷薇科中药配方颗粒对大多数菌株无抑制作用，对个别微生物菌株具有一定的抑制作用，可使用薄膜过滤法进行细菌、酵母菌以及霉菌计数。

【关键词】蔷薇科；中药配方颗粒；微生物限度；方法学验证

蔷薇科分布广泛，基本遍布全世界，其中以北温带居多，其主要形态体征为叶互生，常伴托叶，整齐，花托凸隆至凹陷等^[1]，常见的蔷薇科中药有山楂、苦杏仁、桃仁、乌梅、木瓜等^[2]，被广泛应用于中药配方中，为了进一步研究蔷薇科中药配方颗粒中的污染微生物，我院建立蔷薇科中药配方颗粒微生物限度检查法，并使用方法学加以验证，具体论述如下。

1.材料与方法

1.1材料

中药配方：山楂配方颗粒（批号1111071S）、苦杏仁配方颗粒（批号1007021S）、桃仁配方颗粒（批号1006171S）、乌梅配方颗粒（批号1106100）、木瓜配方颗粒（批号1203023）、地榆配方颗粒（批号1007211S）、金樱子配方颗粒（批号1111110）、枇杷叶配方颗粒（批号1004281Z）；仪器：S60微生物限度培养器、HTY-2000型聚菌仪^[3]；培养基：改良马丁培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基；菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉。

1.2方法

1. 菌液制备：取新鲜培养物金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌接种置于营养肉汤培养基中，放入温度为31-35℃的环境中培养20-24h，培养后，取1ml培养物加入0.9%氯化钠溶液制成菌悬液；取新鲜培养物白色念球菌接种置于改良马丁培养基中，放入温度为22-27℃的环境中培养25-48h，培养后，取1ml培养物加入0.9%氯化钠溶液制成菌悬液；取新鲜培养物黑曲霉接种置于斜面培养基中，放入温度为22-27℃的环境中培养5-7h，培养后，使用无菌NS溶液对霉菌孢子进行清洗，并将孢子吸取至无菌试管中，加入0.9%氯化钠溶液制成孢子悬液。以上所有悬液均稀释为约含菌50-100个（cfu·ml^-1）^[4]。

2. 供试液制备：取个样品颗粒10g，加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲至100ml，制备成1：10的供试液。

3. 回收率试验：分别采用常规法（平血法）与薄膜过滤法对菌落数进行测定^[5]。

1.4统计学分析

采用SPSS 21.0对研究对象采集的数据进行分析处理，计量数据采用均数±标准差(X±S)表示；计数资料采用%表示,使用X²对数据进行校检；P＜0.05为差异具有统计学意义。

2. 结果

2.1 蔷薇科中药配方颗粒常规法的回收率。

蔷薇科中药8种配方颗粒中山楂、苦杏仁、桃仁、乌梅、木瓜对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉的回收率均高于70%，说明可采用常规法进行细菌、酵母菌以及霉菌计数，而其中地榆、金樱子、枇杷叶对试验菌株均出现不同的抑制作用，地榆对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念球菌、枯草芽孢杆菌的回收率低于70%，说明不能采用常规法进行细菌、酵母菌以及霉菌计数，金樱子对金黄色葡萄球菌回收率低于70%，说明不能采用常规法进行细菌检查，但可以进行酵母菌以及霉菌计数，枇杷叶对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率低于70%，不能采用常规法进行细菌检查，但可以进行酵母菌以及霉菌计数。详见表1。

表1蔷薇科中药配方颗粒常规法的回收率（%）

2.2 蔷薇科中药配方颗粒薄膜过滤法的回收率。

蔷薇科中药8种配方颗粒对5种试验菌株均无抑制作用，回收率均高于70%，说明蔷薇科中药8种配方颗粒均可采用薄膜过滤法进行细菌检查、酵母菌以及霉菌计数。

2. 讨论

本研究显示，使用常规法测定，蔷薇科中药8种配方颗粒中山楂、苦杏仁、桃仁、乌梅、木瓜对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉的回收率均高于70%，而其中地榆、金樱子、枇杷叶对试验菌株均出现不同的抑制作用，回收率部分低于70%；使用薄膜过滤法，蔷薇科中药8种配方颗粒对5种试验菌株均无抑制作用，回收率均高于70%，说明蔷薇科中药8种配方颗粒均可采用薄膜过滤法进行细菌检查、酵母菌以及霉菌计数。

综上所述，蔷薇科中药配方颗粒对大多数菌株无抑制作用，对个别微生物菌株具有一定的抑制作用，可使用薄膜过滤法进行细菌、酵母菌以及霉菌计数。

【参考文献】

[1]贾辉,姚东,王作君,张敬一.《中国药典》2010版与2015版微生物限度检查法对两种制剂检测结果的比较研究[J].实用药物与临床,2019,22(02):169-173.

[2]周志,庄意琼,罗俊,应国红.中药乳香、没药配方颗粒微生物限度检查方法适用性验证[J].今日药学,2019,28(07):442-444.

[3]王似锦,刘文杰,牛振东,高春.5种中药配方颗粒微生物学质量分析[J].中成药,2018,35(07):1442-1448.

[4]李趣嫦,钟燕飞,肖建光,苟强.蔷薇科中药配方颗粒微生物限度检查法方法学研究[J].中国民族民间医药,2018,22(09):28-29+31.

[5]陆广欣,林丽英,湛文青,梁桂霞.精制冠心片等中药配方制剂微生物限度检查方法的验证[J].现代食品与药品杂志,2017(03):26-29.