结直肠癌KRAS、NRAS和BRAF基因罕见突变类型及其临床意义(附1 513例)

(整期优先)网络出版时间:2020-08-10
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摘要目的探讨结直肠癌KRAS、NRAS和BRAF基因罕见突变类型及其临床意义。方法采用回顾性描述性研究方法。收集2013年12月至2018年11月北京大学肿瘤医院收治的1 513例结直肠癌患者的临床病理资料;男921例,女592例;平均年龄为59岁,年龄范围为15~97岁。提取肿瘤组织基因组DNA,采用Sanger测序法进行KRAS(第2、3外显子),NRAS(第2、3外显子)和BRAF(第15外显子)基因突变检测。观察指标:(1)KRAS、NRAS和BRAF基因突变类型情况。(2)KRAS、NRAS和BRAF基因突变类型与临床病理特征的关系。(3)单一基因罕见突变及其临床病理特征。(4)同时2种基因突变及其临床病理特征。计数资料采用绝对数和百分比表示,组间比较采用χ2检验。结果(1)KRAS、NRAS和BRAF基因突变类型情况:1 513例结直肠癌患者中,KRAS、NRAS和BRAF的基因突变率分别为37.806%(572/1 513)、3.173%(48/1 513)和5.486%(83/1 513)。KRAS外显子2突变率为35.889%(543/1 513),外显子3突变率为1.917%(29/1 513)。NRAS外显子2突变率为1.322%(20/1 513),外显子3突变率为1.851%(28/1 513)。BRAF外显子15突变率为5.486%(83/1 513)。KRAS基因突变类型主要为外显子2第12、13密码子和外显子3第61密码子突变,突变率分别为27.759%(420/1 513)、7.733%(117/1 513)和1.586%(24/1 513)。7例结直肠癌患者发生KRAS基因第14、59及60密码子区域的罕见突变,突变率为0.463%(7/1 513),其中2例[0.132%(2/1 513)]V14I突变、2例[0.132%(2/1 513)]A59T突变、2例[0.132%(2/1 513)]A59E及1例[0.066%(1/1 513)]G60D突变。NRAS基因突变类型主要为外显子2第12、13密码子及外显子3第61密码子突变,突变类型主要为Q61K,突变率为0.925%(14/1 513),其次为G12D突变,突变率为0.727%(11/1 513)。Q61R、Q61H、Q61L、G13R、G12C、G12V、G12S、G13D及G13C的突变率均较低。BRAF基因突变类型主要为外显子15第600密码子突变,突变类型主要为V600E突变,突变率为4.957%(75/1 513)。8例结直肠癌患者发生BRAF基因罕见突变,突变率为0.529%(8/1 513),其中5例[0.330%(5/1 513)]D594G突变、1例[0.066%(1/1 513)]D594H突变、1例[0.066%(1/1 513)]S607T突变及1例[0.066%(1/1 513)]599~600密码子插入突变AGA(T599 V600insAGA)。1 513例患者中,4例[(0.264%,4/1 513)]发生KRAS基因第12及13密码子同时突变,其中2例[(0.132%,2/1 513)]发生G12V与G13D同时突变;1例[(0.066%,1/1 513)]发生G12D与G13A同时突变;1例[(0.066%,1/1 513)]发生G12V与G13F同时突变。此外,1例[(0.066%,1/1 513)]发生KRAS G13D与NRAS G12S同时突变,1例[(0.066%,1/1 513)]发生KRAS G12C与NRAS Q61H同时突变。(2)KRAS、NRAS和BRAF基因突变类型与临床病理特征的关系:KRAS基因突变中肿瘤部位、肿瘤分化程度比较,差异均有统计学意义(χ2=25.317,4.166,P<0.05)。BRAF基因突变中性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度、淋巴结转移比较,差异均有统计学意义(χ2=11.290,22.317,38.035,12.611,P<0.05)。进一步研究结果显示:NRAS基因突变类型中Q61K突变和Q61R突变发生在年龄<65岁、≥65岁比例分别为12/18、2/10和1/18、5/10,两者比较,差异均有统计学意义(χ2=5.600,7.542,P<0.05)。(3)单一基因罕见突变及其临床病理特征:1 513例患者中,15例发生单一基因罕见突变。7例发生KRAS基因第14、59及60密码子罕见突变患者中,男6例,女1例;年龄<65岁6例,年龄≥65岁1例;肿瘤位于左半结肠3例,右半结肠3例,直肠1例;肿瘤组织学类型及分化程度为高、中分化腺癌6例,低分化腺癌1例;TNM分期Ⅳ期6例,Ⅱ期1例;有远处转移6例,无远处转移1例;有淋巴结转移3例,无淋巴结转移4例;术后均无复发。8例发生BRAF基因罕见突变患者中,男4例,女4例;年龄<65岁4例,年龄≥65岁4例;肿瘤位于左半结肠5例,右半结肠1例,直肠2例;肿瘤组织学类型及分化程度为中分化腺癌7例,低分化腺癌1例;TNM分期Ⅳ期5例,Ⅲ期2例,Ⅱ期1例;有远处转移6例,无远处转移2例;有淋巴结转移3例,无淋巴结转移5例;术后复发1例。(4)同时2种基因突变及其临床病理特征:1 513例患者中,6例发生同时2种基因突变,男5例,女1例;年龄<65岁2例,年龄≥65岁4例;肿瘤位于左半结肠1例,右半结肠4例,直肠1例;肿瘤组织学类型及分化程度为高、中分化腺癌5例,低分化腺癌1例;TNM分期Ⅳ期5例,Ⅱ期1例;有远处转移4例,无远处转移2例;有淋巴结转移3例,无淋巴结转移3例;术后复发1例。结论结直肠癌患者的KRAS和BRAF基因罕见突变常发生在罕见的密码子区域,并以点突变为主,KRAS、NRAS和BRAF基因突变与临床病理特征相关,可为结直肠癌的治疗提供重要依据。