新型冠状病毒肺炎患者咽拭子和粪便标本核酸检测结果分析

新型冠状病毒肺炎患者咽拭子和粪便标本核酸检测结果分析

郭玺 罗煜（通讯作者） 李红娟 杜钰婕 徐斌

云南省 昆明市第三人民医院 637000

【摘要】 目的 检测新型冠状病毒肺炎（novel coronavirus pneumonia，COVID-19）病例的咽拭子及粪便样本的携带病毒状态，初步观察2019新型冠状病毒在机体不同系统的状态、变化，对影响其变化的因素进行分析。方法 回顾性分析昆明市第三人民医院2020年1月24日起至2020年3月17日在我院隔离治疗的COVID-19确诊患者，收集性别、年龄、吸烟史、白细胞计数、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T及CD4+/CD8+值，分析上述因素与咽拭子样本及粪便样本核酸转阴时间的关系。将确诊的35例患者分为咽拭子(+)/粪便(+)及咽拭子(+)/粪便(-）两组进行对比，分析两组样本核酸表达之间的差异。结果：性别、年龄、吸烟史、白细胞计数、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T、CD4/CD8值与咽拭子样本转阴时间无相关性（P>0.05)；而性别、年龄、吸烟史、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T、CD4/CD8值与粪便样本转阴时间无关联（P>0.05），白细胞计数与粪便样本核酸转阴时间相关（P<0.05）。CD4+T在咽拭子核酸表达均为阳性而粪便核酸表达为阴性的两组标本中表达存在显著差异（P<0.05）。结论：1.性别、年龄、吸烟史、白细胞计数、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T及CD4+/CD8+值不能影响患者咽拭子样本核酸检测转阴时间。2.性别、年龄、吸烟史、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T及CD4+/CD8+值与粪便样本核酸检测转阴时间无关，而白细胞计数是影响粪便样本核酸检测转阴时间的因素。3.CD4+T是影响咽拭子样本核酸表达均为阳性时的粪便样本核酸表达结果的重要因素。

【关 键词】COVID-19；新型冠状病毒肺炎；核酸检测；结果分析

2019新型冠状病毒肺炎（COVID-19）^（1）⾃2019年12⽉在中国武汉爆发以来，先后波及国内外多个省份及国家地区^（1）。据中华人民共和国国家卫生健康委员会统计显示:截止至2020年3⽉17⽇，全球累计185737例，国内累计确诊81135例，其中国内现存重症病例2830例，国外死亡病例数为4191例，国内死亡病例数3231例^（2）。其属于冠状病毒科β属，其基因特征与严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome，SARSA）相关的冠状病毒和中东呼吸综合征相关冠状病毒有明显的区别。发病时以发热、干咳、乏力为主要表现。该病传播迅速，目前已明确呼吸道飞沫传播和接触传播是病毒传播主要途径^（3）。由于PT-PCR可以检测各种样本中的2019-nCoV RNA，并具有技术成熟、应用简单且准确率高等有点，因此在COVID-19的诊断、治疗疗效及治愈评估中起着重要的作用。有研究指出目前可以通过RT-PCT技术检测不同生物样本中携带病毒的状况，但缺乏对于COVID-19患者核酸检测变化及其影响因素分析报道，因此本研究通过收集入院后患者相关检验资料，对治疗过程中病毒核酸检测的变化进行统计后分析影响其变化可能存在的因素，阐述不同身体系统的分布特点及临床意义，为COVID-19的诊疗提供一定的依据。

1 资料与方法：

1.1资料 昆明市第三人民医院作为新型冠状肺炎定点收治医院，取于2020年1月26日接诊首例COVID-19患者。本研究纳入接诊首例以来至2020年3月17日本院收治的所有COVID-19确诊病例35例。根据COVID-19诊断标准：依据《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）》，符合相关流行病学、临床表现，以及实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性或病毒基因测序与已知的新型冠状病毒高度同源。

1.2方法 回顾性分析昆明市第三人民医院2020年1月24日起至今在院隔离治疗的COVID-19确诊患者的性别、年龄、吸烟史、白细胞计数、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T及CD4+/CD8+值与咽拭子样本、粪便样本核酸检测转阴时间的相关性关系。将确诊的35例COVID-19患者分为咽拭子(+)/粪便(+)及咽拭子(+)/粪便(-)两组进行对比，分析两组样本核酸表达的差异。

1.3统计学处理 采⽤SPSS 22.0统计软件。计量资料⽤x±s表示，两组⽐较采⽤两独⽴样本t检验，多组⽐较采⽤单因素分析；由于CD4+T为非正态分布，因此我们采用方差分析及非参数检验进行组间比较，P<0.05为差异有统计学意义。

结果：

1. 基本资料：总共纳入35例COVID-19确诊患者，咽拭子核酸检测均为阳性，其中15例患者粪便核酸检测为阳性；男性16例，女性19例；年龄3-79岁，平均年龄为40岁，≤30岁8例，30-40岁5例，≥40岁22例；有吸烟史10例，无吸烟史25例；入院时均行血检，白细胞计数正常22例，降低13例；血沉速率正常24例，升高11例； CD8+T正常18例，降低17例；CD4+T正常7例，降低28例；CD3+T正常13例；降低22例；CD4+/CD8+正常19例，升高9例，降低7例。

2. 35例COVID-19患者临床特征下不同样本病毒核酸检测：咽拭子核酸检测转阴时间2-23天，平均10.4±0.88天，中位时间10天；粪便核酸检测转阴时间2-14天，平均2.54±0.65天，中位时间0天。性别、吸烟史、白细胞计数、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T、CD4/CD8值与咽拭子样本转阴时间无相关性（P>0.05)；性别、年龄、吸烟史、血沉速率、CD4+、CD8+、CD3+T、CD4/CD8值与粪便样本转阴时间无关（P>0.05），而白细胞计数与粪便样本核酸转阴时间无关（P<0.05）。

3. 不同人口学及临床特征下咽拭子/粪便样本核酸表达结果比较：通过使用方差分析检验得出性别、年龄、吸烟史、白细胞计数、血沉速率、CD8+、CD3+T及CD4+/CD8+在两组之间表达无明显差异（P>0.05）；CD4+T在两组样本核酸表达不同的组别中存在显著差异（P<0.05，见表3），但由于CD4+T为非正态分布，因此将CD4+T代入非参数检验后得出CD4+T是影响咽拭子/粪便样本核酸表达组间差异的因素（P<0.05，见表1）。

表1 CD4+T在咽拭子/粪便样本核酸表达差异分析

讨论：

最初我们从确诊患者的咽拭子中扩增出SARS-CoV-2病毒，由于患者除了存在咳嗽、咳痰等症状外，部分患者有腹泻症状，因此再到从患者粪便中检出SARS-CoV-2核酸阳性，目前为止，有研究证实咽拭子、痰液、粪便、尿液、血液均有可能检测出病毒^（5）。患者随着机体免疫系统的较快激活和增强，体内病毒被清除或抑制在低水平，因此有的病例也呈现SARS-CoV-2核酸检测早期转为阴性。因此本研究对不同患者同一时间咽拭子及粪便样本的SARS-CoV-2核酸进行了检测，以观察COVID-19在呼吸道、消化道的分布、变化及差异比较。

研究结果显示15例COVID-19确诊病例粪便标本的SARS-CoV-2阳性转为阴性中位时间在性别、年龄、吸烟史、血沉数值、CD3+、CD8+、CD4+T及CD4/CD8等各变量组间均无统值计学差异（P>0.05）。而白细胞数值的变化具有统计学意义（P=0.017）。白细胞具有活跃的移动能力，可以从血管内迁徙到血管外，或从血管外组织迁移到血管内，因此白细胞除存在与血液和淋巴中外，也广泛存在与血管、淋巴管以外的组织中。白细胞是人体与疾病斗争的“卫士”。白细胞数值正常范围为（4-10）x10^⁹/L，可因每日不同时间、机体的功能状态而在一定范围内变化。白细胞计数的升高不完全是疾病的表现，存在生理性及病理性升高之分。而白细胞计数的降低主要考虑与病毒感染有关，例如流行性感冒、病毒性肺炎、病毒性肝炎、水痘、风疹等，或者长期接触放射线、自身免疫性疾病、肿瘤的放化疗后都可能导致白细胞的减少^（6）。确诊为2019-nCoV且咽拭子及粪便标本均为阳性的患者入院时统一接受采血检查，结果回报15例粪便标本阳性患者中4例白细胞数值降低（占26.7%），具有不同程度的降低，统计后得出结果：白细胞数值与粪便样本核酸转阴时间存在相关（P<0.05），提示白细胞数值可影响患者粪便标本中核酸转阴的时间，我们考虑新型冠状肺炎入侵机体后，人体首先做出反应的是白细胞，数值降低符合病毒感染的机制。由于我们研究的病例数有限，后期我们可以通过加大样本量来进一步验证白细胞影响患者粪便标本核酸转阴时间的相关性，并且研究白细胞影响粪便标本核酸转阴的机制、原理。

现目前全国新型冠状肺炎的病情趋势在政府大力监督及群众配合下得到了一定的控制，由于目前COVID-19尚未研制出有效的疫苗，因此对于提高疾病的综合诊断水平对提升诊断阳性率、降低疾病的死亡率即为重中之重。本研究通过探索咽拭子及粪便样本中核酸检测变化，对影响核酸变化的因素进行分析，为后期病毒传播、监测及控制上起一定的指导意义，希望对未知病毒的探索及管理上能有所帮助。

参考文献：

[1]国家卫生健康委．截至3月17日24时新型冠状病毒肺炎疫情最新情况［EB /OL］．(2020－03－17) ［2020－03－24］

[2] 李宝林，李芹，吴刚，曾章锐，黄富礼，詹小亭，唐敏，刘靳波． 15例 COVID-19患者治疗后痰、粪便标本新型冠状病毒核酸检测结果比较[J/OL]．中国感染控制杂志.http://kns.cnki.net/kcms/detail/43.1390.r. 20200306.1240.002.html

[3]曾希鹏，谢朝梅，谢燕湘，黎雅娟．常德市 79 例新型冠状病毒肺炎确诊病例本底资料及核酸检测结果分析[J/OL]．实用预防医学.http://kns.cnki.net/kcms/detail/43. 1223.r.20200306.1249.006.html

[4]吴冰珊，俞婷婷，黄枝妙，陈宏彬，陈炜，张炎华，游丽斌，朱颖，吴晶晶，鄢育青，翁育伟.新型冠状病毒肺炎确诊病例粪便标本的病毒核酸检测．中国人兽共患病学

[5]黄秀红.血常规检查对筛查贫血及白细胞减少症的临床意义研究[J].基层医学论坛,2019,23(11):1570-1571.

[6]王云，赵长城，谷妍，姚余有，刘杨，岳莉，石玉如，查晓丹，戚应杰．80例新型冠状病毒感染肺炎患者相关血液检测指标分析．临床输血与检验.http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1239. R.20200313.1835.004.html