滤膜法在测定水中大肠菌群中的应用

滤膜法在测定水中大肠菌群中的应用

侯莉

喜德县疾病预防控制中心 四川 喜德 616750

社会快速发展，各个行业也随之发展，加大了对水污染程度，特别是对生活饮用水的安全性及可靠性越来越重视，为了保证生活饮用水更加安全可靠，人们寻找更快速、更灵敏的饮用水监测方法。而大肠菌群作为评价饮用水卫生质量重要评价指标，可将水污染程度予以反映，对人们饮用水安全做以支撑，滤膜法作为检测水中大肠菌群方法之一，其具有操作便捷、结果可靠等特点，被人们所普遍应用。那么什么是滤膜法？测定水中大肠菌群有什么意义？滤膜法测定水中大肠菌群的原理是什么？滤膜法测定水中大肠菌群的过程及注意事项有哪些？滤膜法检测水中大肠菌群有哪些优势？下面将详细介绍。

1. 什么是滤膜法？

滤膜法作为检测水样中大肠菌群的常用方法，具体而言，将一定水量注入已经灭菌的微孔薄膜滤器中，通过对其进行抽滤，细菌被保留在滤膜之上，再将滤膜放置于贴满品红亚硫酸的培养基上，经过一定时间培养，对滤膜上的大肠菌群菌落数量予以计算及鉴定，以每升或每100毫克水样作为基础，计算其大肠菌群数量，此方法具有操作简单、速度快、结果可靠等特点，通常适用于杂质较少的水样。

2. 测定水中大肠菌群的意义是什么？

通过检查水中是否存在病原菌，从而可判断水质的安全性及可靠性，但是因为病原菌种具有种类繁多、培养困难等特点，使直接从水中进行对病原菌检测难以实现，因人类肠道病原菌主要来源为粪便污染水，与水体中病原菌相比较，其粪便中病原菌数量较少，所以通过检测水中是否存在肠道正常细菌种类，从而判定水质质量安全性及可靠性。若检测水中存在大肠菌群，表明水样受到粪便污染，存在病原菌被污染的可能。

3. 滤膜法测定水中大肠菌群原理？

滤膜法检测水中大肠菌群原理，采取过滤器将水样予以过滤，使其中细菌存留在过滤膜上，然后将滤膜存放在特定培养基上予以培养，大肠菌群通过在滤膜上不断生长，从而直接对其数量予以计算，所用滤膜通常使用乙酸纤维膜。

4. 滤膜法测定水中大肠菌群的过程及注意事项？

滤膜法测定水中大肠菌群的过程重要为四个方面：

4.1准备工作

将滤膜放入烧杯中，在烧杯中注入一定量蒸馏水，将其放置于沸水中煮沸灭菌三次，每次保持在15分钟左右。前两次煮沸之后需要更换水对其洗涤2-3次，去除其中残留溶剂，对过滤器也应予以灭菌，用点燃的酒精灭球，火焰进行灭菌，也可以对其采取121℃高温高压灭菌，通常持续时间为20分钟。

4.2过滤水样

用无菌的镊子夹取滤膜边缘部分，将其粗糙面向上放置在已经灭菌的滤床上，并同时固定好容器，将100ml的水样注入滤器中，然后打开过滤器阀门，在负压0.5大气压下进行抽滤。(若水样中含菌数量较多，可以对水样予以稀释，为防止菌落数量过多使计算准确性难以保证）

4.3培养

将水样过滤完成后，再进行抽气5s，然后关上滤器阀门，取下过滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，将其放置在品红亚硫酸钠培养基上，将滤膜截留细菌面向上，滤膜与培养基完全紧贴，两者之间不能留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内进行培养，通常培养时间保持在24 ± 2h。

4.4观察结果

首先，挑出符合特征菌落进行革兰氏染色、镜检，通常有三种特征：第一，呈现紫红色，具有金属光泽的菌落；第二，深红色，不带或略带金属光泽的菌落；第三，淡红色，中心颜色较深的菌落。检测革兰氏染色均为阴性的无芽孢杆菌，对其接种乳糖蛋白胨培养液，放置于37℃内培养24h,其中有产生酸气的菌落，判定为大肠菌群阳性。

4.5滤膜法检测试验注意事项

在滤膜法检测试验中需注意两方面：其一，采样后水样的正确保存最为关键，若保存不当，可使样品中的大肠菌群细菌死亡或在一定条件下生产，对检测结果的准确性都有一定影响，检验室应在接到水样时，立即采取检验，若不能对其予以立即检测，应将其放置于4℃冰箱，2h内检测。其二，生活饮用水通常是经过氯处理消毒的，水中含有一定含量氯，使大肠菌群处于受损或抑制状态，所以采取水样时候应加入代硫酸钠脱氯，使受损细胞得以修复，避免计算结果偏低或假阴性结果出现。

5. 滤膜法检测水中大肠菌群有哪些优势？

滤膜法检测水中大肠菌群有四方面优势：第一，与直接法相比较可以检测大量样品：第二，浓缩效应使微生物的检验结果提高；第三，带有菌落的滤膜可以作为检测永久记录存档：第四，可见菌落与样品量直接对应，得出定量结果。

总的来说滤膜法是指可以检测水样中大肠细菌群的方法，其具有操作简单、结果准确性高等特点，在其检测进程中需特别注意水样的保存及受损细胞的修复工作，只有如此能确保检测结果的准确性，实现检测水污染程度目标，为人们饮用安全、健康的水资源发挥自身价值。