试析血府逐瘀丸质量标准的建立

试析血府逐瘀丸质量标准的建立

孙未娜

哈药集团世一堂制药厂 150000

【摘 要】目的：对血府逐瘀丸质量标准进行建立。方法：对血府逐瘀丸中的当归、川芎、地黄等进行定性的鉴别，而该鉴别使用的方法是薄层色谱法；对桃仁中的苦杏仁苷的含量进行测定，此测定的方法使用的是高效液相色谱法。结果：经过测验可以得到的结果是其薄层色谱斑点较为清晰，而阴性对照没有干扰特征。苦杏仁苷进样量为0.348~3.482 ug，在此范围内的线性关系良好。平均的回收率为98.9%，当n=6时，RSD=0.9%。结论:实验中使用的方法实验结果的准确性高、具有一定的灵敏性、重复性，因此得出的结论是可以对该制剂的质量加以良好的控制。

【关键词】血府逐瘀丸;薄层色谱;高效液相色谱;苦杏仁苷

血府逐瘀丸的主要成分是柴胡、当归、地黄、赤芍、红花、桃仁、枳壳等，其中共有11味药材组成。其主要功效是活血化瘀，对行气止痛具有良好的功效。临床主要是对瘀血内阻以及头痛胸痛的病症具有良好的功效，在处方中其君药为桃仁、红花，而臣药则是当归、赤芍和川芎。血府逐瘀丸的原标准是收载于《卫生部药品标准》中，该质量标准中仅有对性状和检查项的描述，即便是《国家食品药品监督管理局标准中也仅仅是对血府逐瘀丸中的部分药材进行了薄层鉴别或者是对枳壳(麸妙)中柚皮苷进行了简单的测定。基于此，为了对该制剂的质量进行控制，本文在实验中对当归、川芎、地黄、红花也做出了薄层鉴别，为该制剂的质量提供有效的参考价值。

1仪器与试药

1.1仪器

Waters高效液相色谱仪:515型高压泵;2487紫外检测器;N2000工作站。Precisa 92SM-202A电子分析天平,感量0.01mg(普利赛因国际贸易有限公司),超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司),ZF-II型四用紫外分析仪(上海宝山顾村电光仪器厂)。

1.2试药

苦杏仁苷、当归、川芎、红花和地黄等对照药材均购自中国药品生物制品检定所;甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。血府逐瘀丸(药都制药集团股份有限公司，批号:。硅胶G、硅胶H薄层板(青岛海洋化工厂),甲醇,乙腈为色谱纯,水为纯化水,其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1当归、川芎TLC鉴别

取当归和川芎2g进行精密的研磨并加入25ml的乙醇，对其溶液进行一小时的加热和回流，将加热后的溶液进行放冷和过滤直到滤液挥干，过滤后的残渣中加入1ml的乙酸乙酯进行溶解，此溶液作为供试品的溶液。以上步骤结束后再取当归的对照药材和川芎的对照物各0.5g，通过使用以上的相同方法制成对照药材的溶液。按照处方比例分别去除了当归和川芎之外的其余药材，按照以上方法制成当归和川芎的银行对照液。按照薄层色谱法进行试验，对上方制备的五种溶液进行吸取，这5种溶液分别吸取10μl,将溶液点在同一个薄层板上，将正乙烷-乙酸乙酯作为溶液的展开剂，依照着展开、取出、晾干的步骤进行，最后在紫外光灯(365 nm)下进行检查审视。检视后的结果是，供试品色谱和对照药材的色谱相对应的位置上所显示荧光斑点相同，阴性对照显示没有任何干扰（图1）。

2.2地黄TLC鉴别

取本品3 g,研细,加甲醇30 ml,加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液。另取地黄对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。按处方比例取除地黄外其他药材，依法制备阴性对照液。照薄层色谱法进行试验，吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-水-冰醋酸(8:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,105 C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰(图2)。

2.3红花TLC鉴别

取本品3 g,研细,加80%丙酮20 ml,超声(100 W,53kHz)15 min,放置,上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材1g,同法制成对照药材溶液。按处方比例取除红花外其他药材.依法制备阴性对照液。照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(7:0.4:2:3)为展开剂,展开,取出，晾干，置紫外光灯(365 Inm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无千扰(图3)。

2.4含量测定

2.4.1色谱条件

采用LanboB Kromasil C18色谱柱(250mm x4.6 mm,5μm);以甲醇乙腈~0.3%醋酸(12:8:80)为流动相;检测波长为210 nm;流速1.0 ml.min^-';柱温:30 C;进样量:20μ;理论塔板数按苦杏仁苷峰计均不低于3 000。

2.4.2对照品溶液的制备

精密称取苦杳仁苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.3482mg的溶液,即得。

2.4.3供试品溶液的制备

适量的对本品进行提取，经过研细后，去除2g，将其进行紧密的称定后使用具塞锥形瓶中，将50%的甲醇共25g加入其中经过密塞后进行称重，进行30min的超声后再进行称定重量，有减失的重量使用甲醇进行填补，最后对溶液进行摇匀、过滤以及取续滤液，其续滤液即是供试品溶液。

2.4.4干扰试验

按处方比例及制备工艺,配制不含桃仁的阴性样品,按“2.4.3"项下方法制成阴性样品溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各20μl,按“2.4.1”项下色谱条件测定，记录色谱图,阴性样品在苦杏仁苷峰位置无吸收峰,表明处方中其他成分对测定结果无干扰。

2.4.5线性关系考察

精密量取“2.4.2”项下对照品溶液0.5,1,2,3,5ml,分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度,摇匀,得不同浓度的对照品溶液,分别精密吸取20μl按“2.4.1”项下方法测定,以进样量为横坐标(X)、苦杏仁苷峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得回归方程:Y=4.62x10'X-1.72x10*(r=0.9999,n=5),表明苦杏仁苷进样量在0.348~3.482μg内线性关系良好。

2.4.6精密度试验

精密吸取上述对照品溶液20μ山,连续进样测定6次,测得苦杏仁苷峰面积的RSD为0.62%(n=6)。

2.4.7重复性试验

取同一批(批号:091201)样品6份，照“2.4.3"项下方法制得供试品溶液,分别进样测定含量。结果样品中苦杏仁苷含量的平均含量为0.325 mg.g',RSD为1.08%(n=6),表明该方法重复性良好。

2.4.8稳定性试验

取上述供试品溶液(批号:091201)分别于0,2,4,6,8,12 h进样测定,计算苦杏仁苷峰面积的RSD为0.83%(n=6),表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4.9加样回收率试验

取已知苦杏仁昔含量的样品(批号:091201)6份,每份1.5 g,精密称定,准确加人-一定量苦杏仁苷对照品,依法测定，结果平均回收率为98.9%，RSD为0.83%(n=6),表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4.9加样回收率试验

取已知苦杏仁苷含量的样品(批号:091201)6份,每份1.5 g,精密称定,准确加入--定量苦杏仁苷对照品,依法测定,结果平均回收率为98.9%，RSD为0.9%(n=6)。

3讨论

在以往对当归川芎进行鉴别的实试验时，曾经使用超声提取法制备供试液，当时却因为乙醚沸点较低且挥发较为严重，因此对待测组带来的了一定的损失从而对斑点的鉴定产生了一定的影响。因此后来对试验的方法进行了改变，改为了使用加热回流的方法进行试验，试验的结果较为满意。

参考文献

1. 王瑞芬.血府逐瘀丸质量标准的建立[J].中国药师,2011(05):58-59.

2. 赵明杰,勾晓丹.血府逐瘀丸的质量标准控制[J].辽宁中医杂志,2007,034(011):1618-1619.

3. 高雅宁.血府逐瘀丸质量控制方法研究[M].沈阳药科大学,2015.