血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰进展分析

血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰进展分析

贾绍府 ; 廖英萍通讯作者

广西民族医院检验科 广西 南宁 530001

【摘要】：糖尿病是临床常见的非传染性慢性病，会严重威胁到人们的身体健康以及生活质量，早期诊治是控制病情加重的关键。血糖、糖化血红蛋白是糖尿病的诊疗指标，具有较多的检验方法，但外界因素会对检验结果的准确性产生一定的影响。本文就血糖及糖化血红蛋白的检测及干扰因素的进展进行综述，旨在提升糖尿病的诊疗效果。

【关键词】：血糖；糖化血红蛋白；检测

糖尿病的主要特征为血糖升高^[1]，其发病率随着人们饮食和生活习惯的改变而呈现持续增长趋势^[2]，因糖尿病死亡的人数也在持续增加。血糖指标（空腹血糖、餐后2h血糖）可对人体中即刻血糖含量进行反映，而糖化血红蛋白能够对检测对象近8-12周的血糖情况进行反映^[3,4]。由于血糖的波动性大，糖化血红蛋白的截值敏感性存在差异，因此不同国家对于血糖、糖化血红蛋白的控制、治疗目标也存在着区别。血糖、糖化血红蛋白的检验准确性对于协助临床诊疗十分重要，因此本文对血糖、糖化血红蛋白的检测方法、干扰因素进行综述。

1. 检测方法

   1. 血糖的检测方法

血糖的检测主要包括空腹血糖、餐后随机血糖，根据临床需求选择不同的检测系统进行测定。在中心实验室中酶法是测定血糖水平的主要方法，具有较高的敏感度以及特异性。酶法比较常用的方法包括己糖激酶（hex－okinase，HK）法、葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase，GOD）法和葡萄糖脱氢酶（Glucose dehydrogenase，GDH）法。即时检测系统中一般应用电化学法对血葡萄糖含量进行测定^[5]，GOD、GDH是血糖仪检测技术主要采用的生物酶法，但两种方法各有缺陷，因此临床需结合患者的实际情况合理选择不同的血糖仪，例如GOD血糖仪测定结果易被氧分压干扰，GDH血糖仪则易被糖类物质所干扰。

1. 2. 糖化血红蛋白的检测方法

糖化血红蛋白是红细胞中血红蛋白结合血清中糖类物质的产物^[6,7]，血糖浓度、血糖和血红蛋白接触时间是影响其含量的重要因素^[8]。临床实验室中根据组分所带电荷的不同、基团结构的不同将糖化血红蛋白检测分析方法分为两大类，而床旁检测主要以糖化血红蛋白床旁分析仪为主^[9]。

1. 1. 1. 基于电荷差异

         1. 阳离子交换层析法

阳离子交换层析法是根据不同组分所携带的不同电荷种类进行分离^[10]，糖基化过程可使糖化血红蛋白分子表面携带种类完全不同的电荷。弱酸性溶液中，通常糖化血红蛋白会携带正电荷，存在阳离子特性，经过阳离子交换层析柱时被树脂吸附，利用磷酸盐缓冲液能够脱出糖化血红蛋白，最终得到血红蛋白层析谱，可用百分率表示糖化血红蛋白^[11]。离子交换层析法中主要包含手工微柱法、低效液相色谱法、高效液相色谱法，其中高效液相色谱法是国际上公认的糖化血红蛋白检验金标准^[12]，但由于仪器、试剂昂贵，因此难以在基层医院中普及应用；手工微柱法存在操作繁琐、影响因素多等不足，因此在临床中较少应用；低效液相色谱法的测定原理同高效液相色谱法，并具有操作简单、经济性好等优势。

1. 1. 1. 2. 电泳法

电泳法的检测原理：在一定条件下，胶体颗粒所带电荷不同，向负极泳动的速度存在差异。方法主要包括醋酸纤维素电泳、丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳等，其中琼脂糖凝胶电泳完成后，根据距离负极端的远近进行排列分别为HbA₀、HbA_1c、HbA_1b、HbA_1a。光密度仪扫描计算后可得到HbA_1c的百分比。温度、pH值、缓冲液浓度不会对检测结果造成较大的影响^[13]，而氨基甲酰化会影响检测结果^[14]。毛细管电泳对HbA_1c、Hb进行检测具有快速简单、结果精确等优势^[15]，等电聚焦电泳则具有分辨率高、重复性好的特点。

1. 1. 2. 基于基团结构差异

         1. 亲和层析法

亲和层析法将聚丙烯酰胺凝胶作为介质，硼酸结合糖化血红蛋白分子上的葡萄糖顺位二元基形成五环化合物，糖化血红蛋白与微柱结合，可洗脱未糖化的血红蛋白，经过一系列操作后得到洗脱后的糖化血红蛋白。异常血红蛋白不会干扰检测结果^[16]，同阳离子交换层析法相比，对样本储存时间未严格要求。经过此法彻底的结果同血糖平均值所测的HbA_1c高度相关。

1. 1. 1. 2. 免疫法

免疫法能对HbA_1c的β链N端3-4个糖化氨基酸特异性抗体进行检测^[17]，按照标记抗体的物质差异，出现不同的检测方法。主要包括胶乳凝聚免疫比浊法、胶乳凝集抑制法、离子捕获法、荧光免疫法、放射免疫法。

2. 干扰因素

   1. 血糖的干扰因素

      1. 药物

在同一检验项目中比较不同检验方法得出的结果，能够及时发现临床检验措施以及干扰因素。但复方丹参片、多巴胺、维生素C会干扰氧化酶偶联比色法检测结果，但不会影响氧化酶电极法测定结果。另外维生素C会对血糖检测准确性产生影响，出现低血糖情况，因此临床应对药物对不同检验方法的影响及程度充分掌握，以减少临床误诊误治等情况的发生。

1. 1. 2. 其他

检验前标本处理时间长、血细胞比容改变等因素均会对血糖测量值产生影响。及时处理离体后的血液标本可减少对血葡萄糖浓度的影响，另外，温度＜25℃时血液标本保存时间为8h，＜4℃则可保存72h。血液粘度的增加会使血液中不同组分的扩散速度减缓，从而使传感器中电流减少；溶血可释放细胞内容物，增加血红蛋白浓度，影响葡萄糖测定试剂盒测定血清葡萄糖的结果。同时不同类型的血糖检测仪、所用酶法和技术方法的差异也会影响血糖检测结果。

1. 2. 糖化血红蛋白的干扰因素

（1）糖化血红蛋白的反应初期会生成L-Alc，存在结构不稳定的特点，其会随着血糖浓度的变化而生成葡萄糖，对糖化血红蛋白检测结果产生影响，尤其是对电泳法、离子交换层析法的影响更大。而维生素C、E以及阿司匹林等药物均会对血红蛋白的糖基化进行抑制，因此会影响HbA_1c结果。（2）Hb变异体：临床比较常见的Hb变异体为HbS、HbE、HbC和HbD^[18]。Hb变异体对不同检测方法所造成的干扰不同^[19]，因此在存在血红蛋白变异体的情况下，不适合应用HbA_1c对糖尿病进行诊断。（3）常见化学衍生物：氨基甲酰Hb比较常见，会对根据电荷差异原理的检查方法产生影响。（4）影响血红蛋白存活时间或血红蛋白糖基化的因素会干扰HbA_1c结果，导致数值偏低或升高。（5）储存环境：血液标本的贮存温度、时间、测定方法均会影响糖化血红蛋白检测结果^[20]。（6）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏、贫血、异常γ-球蛋白血症、高甘油三酯血症、高胆红素血症等亦会对糖化血红蛋白检测结果造成干扰。

3. 小结与展望

血糖、糖化血红蛋白的联合应用能够促使糖尿病的筛查率、诊断准确率提高，对于预防糖尿病并发症的发生具有重要作用。了解血糖、糖化血红蛋白的检测方法和干扰因素，有助于检验技术的持续改进，对糖尿病的诊治、预后改善具有较好的作用。

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