PCR技术在猪病诊断和防治中的应用

PCR技术在猪病诊断和防治中的应用

张江年

贵州省松桃县山地生态畜牧业发展中心 贵州省铜仁市 554100

摘要：随着养殖业的高速发展，猪的疫病发生变得更加的严重，其中以非典型、多种病毒混合方式所存在，因为病猪在发病后并未有以往病症的现象，所以在临床中发现和治疗的难度都比较大。本文主要分析PCR技术的特点，然后通过该技术在临床中分析多种猪的病症，能够进行必要的诊断与防治处理，从而可以更好的控制猪病的发展。

关键词：PCR；猪病；诊断

猪病呈现出流行的态势，并且严重性逐步增大，极大的危害养猪事业的发展，也会给社会稳步发展带来一定的负面影响。猪病防治工作的重点就是要进行多种病原菌感染的遏制，从而可以达到防治的效果。因此，寻找出一种有特异性的快速诊断猪病方法有着非常重要的意义，PCR技术能够满足该要求。因此，综合进行PCR技术在猪病检测中做出防治与诊断，可以促进猪身体质量的提升。

1PCR技术的发展

PCR技术主要的优势就是扩增速度比较快，简单便捷，可以快速的实现目标基因的扩增，从而能够实现微量目的基因检测，该方式的特异性就是通过靶序列两端的寡核苷酸引物来确定。随着PCR技术水平的不断提高，传统PCR技术已经有了很大的发展，衍生出很多先进技术，如多重PCR技术、RT-PCR技术、荧光定量PCR技术，这些技术应用到动物疫病检测有着非常高的优势。

猪病诊断与防止环节中，PCR技术的合理应用主要是有如下优势：第一，操作简单；第二，特异性好；第三，扩增性能强。PCR技术应用之下可以准确的进行目的基因扩展分析，然后能够达到微量基因快速检测的效果。

PCR技术应用中，其特异性能够因为寡核苷酸产生的影响，该技术取得很大的成功，产生了比较多先进的PCR技术。比如：PCR多重技术、PCR荧光技术、RT-PCR技术，在动物疫病检测环节有着重要的价值。在进行猪病诊断与防治环节，通过PCR技术应用已经获得行业内专家的支持，能够快速发现病原菌，总结出有效的治疗方法，可以促进养殖户经济效益的提升。

2PCR技术单一病毒检测中的应用

2.1猪2型圆环病毒

技术研发人员从基因库内的2型圆环病毒ORF2的基因序列设计引物，从临床角度出发来获得该病毒基因模板，然后经过筛选之后确定最佳反应状态，然后能够获得该病毒检测PCR方法。经过一系列的试验，发现该方式对于2型圆环病毒株实施基因扩增能够获取长度为559bp的目的DNA片段，而同等状态之下发生反应也会导致猪类似病毒的检测，如猪瘟病毒、猪细小病毒等方面，在检测之后如果呈阴性，就表示这种方法有特异性；经过实验分析之后发现，通过最低浓度为PCV-2DNA含量为10.8pg的样品，效果是最好的。然后将该方式应用到临床检测中，随机选择了30个养猪场进行病料的检测，总计样本数量是81份，效果非常好，这种方式的应用效果比较好，可以给养猪场进行防疫检测和应用。还有人通过荧光定量PCR的方式进行检测圆环2型病毒，这种方式较之传统检测方式效果更好，可以特异地检测PCV-2，且与PCV-1等多种猪病毒会存在交叉反应，灵敏度可达1×102拷贝/μL，且变异系数低于5%，要比其他的常规方式有着更好的效果。

2.2猪瘟病毒

只要是发生猪瘟，就会严重危害养猪业的发展，会给养殖户造成巨大的损失。我国管理部门已经组织进行多种方式组织猪瘟传播，但是效果较差。当前有很多研究人员选择多种引物，并且通过应用了反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测猪瘟病毒的方式，从实际效果分析，扩增之后可以得到猪瘟病毒或者牛病毒性腹泻病毒的特性核算序列，然后做好病毒区分，该方式有着较高的特异性与稳定性，检测效果好且速度快。

2.3母猪繁殖障碍与呼吸综合征

该病发生之后，容易导致母猪流产、产弱仔或者幼崽死亡率较高等问题，从1987年被人类发现之后，已经在世界很多国家都发生过，我国将其作为二级传染病进行防治，由于其会给母猪繁殖产生不利影响，还会导致仔猪死亡的情况，极大的影响养猪业的发展。快速诊断能够及时的进行疾病预防，传统检测方法效果较差，浪费时间，会导致病毒传播过快，同时还会和其他病毒混淆，结果不能作为防治处理。研究人员通过采取反式聚合酶链式的方式来进行检测，从大量的研究和分析，选择确定了检测PCR方法，在具体的应用中还需要注意下面几个问题：一是陈旧样本中所提取出来的RNA极易降解，电泳过程中能够确定样品提取的RNA有明显的三条，完整性是非常好的，带形也比较清晰。二是提取的RNA及其反转录后的cDNA在零下20℃大约一周就会发生降解，所以在检测时要确保样本新鲜，以提升检测效果。

3PCR在混合感染中的应用

多重PCR技术是主要就是通过相同反应体系内中加入两种及以上的病毒引物，和传统PCR技术对比分析，多重PCR能够快速的检测两种或者以上的病原菌，检测准确率比较高，速度也非常快，敏感性较强。从猪病防治方面分析，多重病毒感染是比较容易存在的，兽医从业者经过多年经验分析总结，如果仅凭经验会导致判断准确性不足，延误治疗，而通过使用多重PCR技术能够提高检测效率和精度。当前通过分析猪瘟、流行乙脑炎、呼吸综合征病毒等方面所导致的繁殖病原进行分析，了解多重病原混合之下导致混合感染的情况，研究人员确定了5对引物来进行病毒检测，应用多重RT-PCR方法，扩增产物分别为508、380和263bp，灵敏度比较高，说明多重PCR法的综合应用效果比较好，应用到该类的混合病毒感染检测有着非常好的效果。

4多重PCR技术的应用前景

多重PCR技术应用实践中，检测速度快、特异性好、灵敏度高，对于进行流行病学治理有着极为良好的效果。多重PCR方法在反应中通过进行不同种类引物的抑制反应，引物和非靶序列之下混合物进行非特异性增容，所以在明确具体的多重PCR方案过程中，首先应该确定最佳的引物设计方案，然后是进行优化反应，创造良好反应条件，然后能够避免出现非特异性扩增与假阳性的情况存在。此外，通过多重PCR方式有着非常高的灵敏度，如在硅玻基片中完成系列核酸扩增反应的多重PCR基因芯片技术、LAMP技术、实时多重PCR技术、光定量多重PCR等。但是具体使用中会有着明显的不足，只要是受到了很少量的外部DNA感染，导致出现假阳性的情况存在，并且反应之下会导致引物进行扩增，如果实验条件相对较差，就会导致出现扩增失败或者假阳性等情况的出现。

5结语

猪病发生之后会给养猪业产生致命性的打击，造成巨大的经济损失，而且目前我国的猪病发生率呈现出上升的态势，所以进行猪病诊断与防治有着非常重要的价值。当前我国的常规猪病诊断与防治的综合效果较差，而通过PCR技术能够获得非常好的效果，未来发展中还需要加强研究，以更好的促进该技术水平的提升，为猪养殖领域高速发展起到一定促进作用。

参考文献

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[2] 王金平, 张会超. PCR技术在猪病诊断和防治中的应用[J]. 现代畜牧科技, 2018, 037(006):P.69-69.

[3] 杨福. 现代生物技术在猪病诊断和防治中的应用研究[J]. 兽医导刊, 2019, 000(006):155.

作者简介：张江年（1978-03-15），男，土家族，籍贯：贵州省铜仁市，当前职称：兽医师，学历：本科，研究方向：动物医学