江西普正制药股份有限公司,江西 吉安 343000
摘要:应用高效液相色谱法测定穿王消炎胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法:通过采用高效液相色谱仪进行穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量测定,提高了穿王消炎胶囊质量标准的可控性。结果:穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯在进样量为3.278~4.862mg范围内呈良好的线性关系,回归方程式分别为y=188492x-43.256,r2=0.9993;y=519132x-75.525,r2=0.9992,脱水穿心莲内酯的平均加样回收率99.2%,RSD为1.0%;穿心莲内酯的平均加样回收率99.4%,RSD为1.1%。结论: 该方法准确可信,操作简便可行,具有质量把控性,适用于测定穿王消炎胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。
关键词:穿王消炎胶囊;穿心莲内酯;脱水穿心莲内酯含量;高效液相色谱仪
前言:穿王消炎胶囊是一种清热解毒的中成药,是穿心莲和了哥王的复方制剂。穿王消炎胶囊临床上可以用于多种急慢性的炎症的治疗,包括急慢性的扁桃体炎、咽喉炎、肺炎等呼吸道的感染,以及急性肠胃炎、细菌性痢疾等消化系统的感染。它对于消除炎症反应、改善临床症状、缩短患者的康复时间等效果均较好,临床常与阿莫西林、克拉维酸钾等合用增强疗效。在本次标准研究中,采用高效液相色谱法对穿王消炎胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量进行了测定,更有利于反映穿王消炎胶囊的质量,对穿王消炎胶囊的质量评价具有重要的意义。
1 仪器与试药
1.1仪器设备
安捷伦 1260型高效液相色谱仪(含四元泵、自动进样器、检测器、工作站);BSA224S-CW电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);9960D型超声波清洗仪(科贝尔)。
1.2试剂与试药
甲醇(色谱纯;来源:西陇科学)、甲醇(分析纯;来源:天津恒兴)、穿心莲内酯对照品(批号:110797-201108;来源:中国食品药品检定研究院)、脱水穿心莲内酯对照品(批号:110854-201509;来源:中国食品药品检定研究院)、水均来自自制超纯水。10批穿王消炎胶囊在线产品(批号:170501、160901、170102,160401、170301、160101、160201、160202、160203、160401规格:每粒装0.44g、0.22 g)由江西普正制药有限公司生产和提供。
2 含量测定
2.1色谱条件的选择 | 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂:甲醇-水(65:35)为流动相;检测波长250nm。柱温30 ℃;流量1.0 mL/min;进样量20μL。理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算应不低于4000。 |
2.2对照品溶液的制备 | 精密称取穿心莲内酯对照品和脱水穿心莲内酯对照品适量,分别加60%甲醇制成每1ml各含10µg的混合溶液,即得。 |
2.3供试品溶液的制备 | 取内容物约0.2g,精密称定,置50ml量瓶中,加60%甲醇溶液48ml,超声处理(功率90W,频率59kHz)30分钟,放冷,加60%甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,取续滤液,即得。 |
2.4测定法 | 精密吸取对照溶液与供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪,测定,即得。 |
3 方法学验证
方法学验证项目 | 实验步骤 | 实验结果 |
线性关系考察 | 精密称取穿王消炎胶囊0.1639g、0.1814g、0.2003g、0.2255g0.2431g,按照“2.3”项下的方法制备,按上述“2.1”色谱条件测定样品峰面积,以样品浓度和峰面积进行回归方程处理,得回归方程。 | 回归方程式分别为y=185667x-33.662,r2=0.9977;y=517726x+74.367,r2=0.9968,穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯在进样量为3.278~4.862mg范围内具有良好的线性关系。 |
重复性试验 | 精密吸取供试品溶液20ul,按照“2.1”项下的方法重复进样6次。 | RSD分别为0.2%和0.07%,表明该方法重复性良好。 |
精密度试验 | 精密吸取对照品混合溶液20ul,按照“2.1”项下的方法重复进样6次。 | 测得穿心莲内酯峰面积RSD为0.3%,脱水穿心莲内酯峰面积RSD为0.1%,表明仪器精密度良好。 |
稳定性试验 | 将供试品溶液分别于0、1、2、3、5、8、12 h,按照“2.1”项下的方法进样测定。 | 脱水穿心莲内酯峰面积RSD为0.8%,表明供试品溶液在12 h内稳定。 |
4样品的测定 取10批穿王消炎胶囊样品(170501、160901、170102,160401、170301、160101、160201、160202、160203、160401)内容物,按“含量测定”方法进行检测,结果见表1
表1 穿王消炎胶囊含量测定结果(n=10)
品名 | 批号 | 脱水穿心莲内酯含量 (mg/粒) | 穿心莲内酯含量 (mg/粒) |
穿王消炎胶囊 | 170501 | 7.23 | 1.64 |
穿王消炎胶囊 | 160901 | 2.84 | 0.16 |
穿王消炎胶囊 | 170102 | 1.87 | 0.15 |
穿王消炎胶囊 | 160401 | 4.49 | 0.18 |
穿王消炎胶囊 | 170301 | 6.99 | 1.63 |
穿王消炎胶囊 | 160101 | 5.58 | 1.23 |
穿王消炎胶囊 | 160201 | 4.20 | 1.14 |
穿王消炎胶囊 | 160202 | 4.25 | 0.98 |
穿王消炎胶囊 | 160203 | 1.83 | 0.26 |
穿王消炎胶囊 | 160401 | 4.30 | 1.04 |
5 结果与讨论
原穿王消炎胶囊标准已建立了穿心莲内酯的薄层鉴别。没有穿心莲内酯含量的检测。中国药典2015年版穿心莲采用高效液相色谱仪测定穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯含量,企业内控标准也采用高效液相色谱仪测定脱水穿心莲内酯含量。因此,在上述条件基础上,采用高效液相色谱仪用同一色谱条件同一方法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量,本次实验建立了穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯含量测定方法并对色谱条件进行了考察,根据实验结果确定了色谱条件的选择。同时对色谱柱也进行比较,优选确定适宜色谱柱为安捷伦色谱柱(Eclipse XDB-C18 4.6*250mm 5um)。通过方法学考察,本实验采用 “用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂:甲醇-水(65:35)为流动相;检测波长250nm。流速为每分钟1.0ml;理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算应不低于4000。且方法其线性关系良好、加样回收率良好、精密度及重复性稳定性良好,操作简便,结果可靠,更具有质量把控性。
参考文献:
[1] 黄晓丹,苏子仁、赖小平、穿心莲片生产过程中脱水穿心莲内酯的含量变化。中国中药杂质志,2002,27(12):911-912.
[2] 邓楠,王凯, 高效液相色谱法测定穿王消炎胶囊两种成分含量 中国医院药学杂志2006年08期)
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015.
作者简介:
康爱华:1983.08.10,女,江西吉安人,助理工程师,研究方向:质量控制