一种血清凝集检测卡在沙门氏菌血清型鉴定中的应用

一种血清凝集检测卡在沙门氏菌血清型鉴定中的应用

刘航

德阳市第二人民医院检验科 四川 德阳 618000

【摘要】目的 探讨血清凝集检测卡在沙门氏菌中的应用，提高沙门氏菌血清的鉴定准确性和时效性，本实验收集2017年-2019年本地区临床分离的沙门氏菌106株，进行常规手工血清凝集鉴定，作为对照组。用血清凝集检测卡方法学改进后重复进行150株沙门血清型鉴定，作为实验组。两组鉴定结论进行对比，结果，对照组106株沙门菌血清型鉴定有99株符合，实验组中106株沙门菌血清型鉴定有102株符合，两组符合率差异有统计学意义（P<0.01），结论：一种血清凝集检测卡在沙门氏菌血清型鉴定中能有效提高沙门氏菌血清型的鉴定准确性和时效性。

一种血清凝集检测卡鉴定沙门菌血清型是利用沙门菌菌体抗原及鞭毛抗原与相应血清抗体抗体结合，形成肉眼可见的凝集颗粒，利用相应凝胶分子筛作用，通过一定的低速离心力的作用，使凝胶颗粒悬浮在凝胶的上层，此检测卡具有良好的特异性和敏感性，凝集结果敏感率高，特异性强，结果判读准确且实验卡条可长时间保存，保证实验结果的可靠性，受到外部因素影响小，等特点。临床屠光前景广阔，沙门氏菌血清型的鉴定目前临床实验室均为手工操作，各实验厂家试剂说明各异，因此受到外部因素影响较多，实验本身存在的因素如：Vi抗原的存在，H抗原1项或2项抗原丢失等，可是实验室的沙门氏菌血清型鉴定出现错误或与血清对照不符的现象时有发生。为了规避上述因素，我们采用一种血清凝集检测卡进行沙门氏菌的血清型鉴定，以更加科学的方法，质量控制标准操作流程，达到各实验室统一标准操作流程，更加科学有效、准确、快速的完成沙门氏菌的血清学鉴定，为临床在沙门氏菌引起的疾病能更加可靠的诊疗依据。为验证上述理论推测，我们设计了下述检测验证实验。

1. 检测数据与实验方法：

1.1收集本地区2017年-2019年的鼠伤寒沙门菌及乙型副伤寒沙门菌，经标准方法学鉴定志贺菌、致泻大肠埃希菌检验依据GB/T4789.5.6 -2003《食品卫生微生物学检验》^{[ 1]}，沙门菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌检验依据GB/T4789.4.7.10 -2008《食品卫生微生物学检验》^{[ 2]},临床分离株106株进行手工血清型鉴定，作为对照组，采用一种沙门氏菌血清鉴定凝集检测卡对106株沙门菌进行血清型鉴定，作为实验组。两组检测结论进行比较，比较两组数据的实验符合率。

1.2仪器与试剂：

沙门氏菌血清凝集检测卡，TGC-200恒温，低速离心机，宁波天润生物药业有限公司提供的沙门氏菌诊断血清，O及Vi血清效价>10:320;H血清效价>1:800

1.3方法：

对照组，106株沙门氏菌进行手工血清凝集检测，取3.0麦氏单位菌悬液10ul于清洁玻片，加入100ul血清抗体，轻轻摇动玻片，1分钟内肉眼观察结果，同时试验以无菌生理盐水作为阴性对照，以此方法对每一株菌进行多价抗原、O抗原、H抗原、Vi抗原进行逐一血清凝集试验，观察结果:1中内凝集为阳性，呈均匀浑浊为阴性。计算检测符合率。

实验组，106株沙门氏菌来源与对照组相同，整个检测过程采用我们研发的一种沙门氏菌血清凝集检测卡进行血清型鉴定，检测卡中相应分布O多价，A-F群血清抗体，O因子血清15种没，O复合因子血清抗体3种，H因子血清抗体31种，H复合因子血清抗体5种，H多价血清4种，Vi因子血清抗体1种。配制3.0麦氏单位待测菌悬液，向通过一定工艺处理后且包被上述血清抗体的血清检测卡中，加入100ul菌悬液，充分混匀，37摄氏度环境反应5min后800r/min,离心2min，再1500r/min,离心3min，取出血清凝集检测卡，进行结果判读。对实验结果进行分析，计算检测符合率。实验室血清凝集检测卡应用与沙门氏菌的血清型鉴定，利用凝胶分子筛原理，对凝集颗粒进行阻断，达到良好且准确的判读结果的目的，有效规避检测环境和检测人员等实验外部因素导致的结果差异性影响，采用一种沙门氏菌血清凝集检测卡检测，实验人员按照标准操作方法进行检测和质量控制。

1.4统计学方法：

采用SPSS 17.0统计学软件，对采用沙门氏菌血清凝集检测卡的106株菌符合率和常规手工沙门氏菌血清学检测符合率进行比较，p<0.01,为差异有统计学意义。

2.0结论：

2.1对照组结果：

106株沙门氏菌，78株为0:4（B）群鼠伤寒沙门氏菌，其中10株为肉眼无法判读H抗原，不确定。38株乙型副伤寒沙门菌，7株为肉眼无法判读H抗原，不确定。鉴定结果如表1

表1 106株常规沙门血清凝集鉴定结果

2.2实验组结果：

实验组采用一种沙门氏菌血清凝集检测卡进行血清型检测，106株株沙门氏菌，78株为0:4（B）群鼠伤寒沙门氏菌，其中2株为肉眼无法判读H抗原，不确定。38株乙型副伤寒沙门菌，2株为肉眼无法判读H抗原，不确定。Vi抗原检出率：100%，鉴定结果如表2

表2 106株沙门血清凝集检测卡鉴定结果

实验组血清型符合率符合率与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01）

3.0讨论：

沙门氏菌为临床引起腹泻的主要致病菌^[3]，临床检测实验室对其常规检查，方法学采用传统手工实验，过程中应用玻片较多且整个过程繁琐，质量可控性极差。一种沙门氏菌血清凝集检测卡的研究出现，有效规避检测环境和检测人员等实验外部因素导致的结果差异性影响^[4],[5]，采用一种沙门氏菌血清凝集检测卡检测，实验人员按照标准操作方法进行检测和质量控制。一种血清凝集检测卡鉴定沙门菌血清型是利用沙门菌菌体抗原及鞭毛抗原与相应血清抗体抗体结合，形成肉眼可见的凝集颗粒，利用相应凝胶分子筛作用^[6]，通过一定的低速离心力的作用，使凝胶颗粒悬浮在凝胶的上层，此检测卡具有良好的特异性和敏感性，凝集结果敏感率高，特异性强，结果判读准确且实验卡条可长时间保存，保证实验结果的可靠性，受到外部因素影响小，等特点。本研究利用实验凝胶分析，通过大量实验数据得到针对沙门氏菌体积合适的凝胶配比，达到分子筛效应。为凝集的抗原抗体菌悬液，通过实验设定离心力，能够顺利通过凝胶柱，沉降与实验杯底部，如果待测菌悬液细菌和包被抗体发生抗原抗体反应形成肉眼可见颗粒，在实验设定离心力作用下，不能够顺利通过凝胶柱，在凝胶柱上方出现大量凝集颗粒阻塞凝胶分子筛表面。

本研究通过设定实验，设置对照组及实验组实验，得出结论差异性明显，对照组：鼠伤寒沙门氏菌的鉴定符合率：87.20%；乙型副伤寒沙门氏菌81.60%，总体鉴定符合率：93.40%。实验组：鼠伤寒沙门氏菌的鉴定符合率：97.4%；乙型副伤寒沙门氏菌94.70%，总体鉴定符合率：96.20%。实验组血清型符合率符合率与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01）

一种沙门氏菌血清凝集检测卡的研就出现，使沙门氏菌血清学检查更加规范质量控制标准操作流程，达到各实验室统一标准操作流程，更加科学有效、准确、快速的完成沙门氏菌的血清学鉴定，为临床在沙门氏菌引起的疾病能更加可靠的诊疗依据，不断提升实验室沙门氏菌血清学检测质量。

【参考文献】

[1] GB/T4789.5.6 -2003.食品卫生微生物学检验[ S]

[2] GB/T4789.4.7.10 -2008.食品卫生微生物学检验[ S]

[3] 冉陆, 余华丽, 王子军, 等.世界卫生组织全球沙门菌监测网2006-2010年规划简介[ J] .疾病监测, 2007, 22 ( 2) :143 -144.

[4] 邓峥华，邓春明,实用预防医学. 2015 年9 月 第22 卷 第9 期 Pract Prev Med，Sep． 2015，Vol. 22，No． 9

[5] 罗信昌, 罗兰妹, 蔡苏薇, 何　艳.中国卫生检验杂志. 1004 -8685( 2005) 09 -1126 -02

[6]武建.中国输血杂志.1004-549X(2003)05-0369-04