微小RNA-613对炎症环境下CHON-001细胞增殖和凋亡的影响

(整期优先)网络出版时间:2020-11-08
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摘要目的观察炎症环境下微小RNA(miRNA,miR)-613在CHON-001细胞中的变化及其对增殖和凋亡的影响。方法CHON-1细胞购自中国科学院上海细胞库。研究分实验1、2,实验1分为白细胞介素(IL)-1β刺激前0 h组、刺激后3 h组、6 h组、12 h组及24 h组,各组应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CHON-001细胞内miR-613的表达。实验2分对照组(不做任何处理)、IL-1β组(仅IL-1β刺激)、IL-1β+miR-613组(IL-1β刺激且转染miR-613激动剂)、miR-613组(仅转染miR-613激动剂);应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测miR-613对CHON-001细胞增殖的影响;应用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-613对CHON-001细胞凋亡的影响。多组间比较采用单因素方差分析(One way-ANOVA)。结果实验1中,0 h组miR-613的相对表达量是0.99±0.06,miR-613在3 h组(0.67±0.12比0.99±0.06,F=8.124,P<0.01),6 h组(0.47±0.07比0.99±0.06,F=12.257,P<0.01),12 h组(0.34±0.10比0.99±0.06,F=17.941,P<0.01)和24 h组(0.19±0.04比0.99±0.06,F=26.899,P<0.01)的相对表达量均较0 h组显著降低。实验2中,CCK-8显示,IL-1β组的细胞增殖率(0.51±0.03)较对照组(1.00±0.01)显著降低(F=16.243,P<0.01);IL-1β+miR-613组的细胞增殖率(0.79±0.02)较IL-1β组(0.51±0.03)显著升高(F=8.257,P<0.01)。Western blot显示,B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白在IL-1β组的相对表达量(0.44±0.05)较对照组(0.13±0.02)显著升高(F=11.481,P<0.01);bax蛋白在IL-1β+miR-613组的相对表达量(0.28±0.06)较IL-1β组(0.44±0.05)显著下降(F=7.423,P<0.01)。Active Caspase-3蛋白在IL-1β组的相对表达量(0.41±0.02)较对照组(0.08±0.01)显著升高(F=12.151,P<0.01);Active Caspase-3蛋白在IL-1β+miR-613组的相对表达量(0.23±0.02)较IL-1β组(0.41±0.02)显著下降(F=9.246,P<0.01)。B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白在IL-1β组的相对表达量(0.22±0.02)较对照组(0.63±0.02)显著下降(F=20.126,P<0.01);bcl-2蛋白在IL-1β+miR-613组的相对表达量(0.45±0.03)较IL-1β组(0.22±0.02)显著升高(F=8.467,P<0.01)。结论炎症环境下miR-613在CHON-001细胞的表达降低;而升高miR-613的表达可以促进炎症环境CHON-001细胞的增殖并抑制其凋亡。