结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间及准确率影响分析

结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间及准确率影响分析

白建华

黑河市爱辉区农村疾病预防控制中心 黑龙江 黑河 164300

摘要：目的：分析结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间及准确率影响。方法：选取市疾控中心保存的250株结核菌株，选择2018年1月~2019年6月期间我中心收治的82例肺结核患者为研究对象，在患者的痰标本中分理出结核菌，进行罗氏培养基药敏试验，培养4周、6周之后将检测结果与标准结果进行对比分析，分析准确率。结果：所有菌组药敏实验的结果判读时间及准确率对比为：SM（链霉素）准确率第4周（92.67%）低于第6周（97.92%）、INH（异烟肼）准确率第4周（99.17%）高于第6周（96.67%）、EMB（乙胺丁醇）准确率第4周（92.67%）低于第6周（98.33%）、RFP（利福平）准确率第4周（90.83%）低于第6周（98.75%）（P<0.05）。结论：建议于第4周进行异烟脐药敏结果判读，于第6周进行链霉素、乙胺丁醇、利福平的药敏结果判读，结果较为准确。

关键词：结核菌；罗氏培养基；药敏试验；判读时间；准确率

Analysis on the time and accuracy of drug sensitivity test results in Roche culture medium for tuberculosis bacteria

Abstract: Objective: To analyze the effect of time and accuracy of drug sensitivity test for tuberculosis bacteria in Roche culture medium.Method: choose 250 strains of TB strains preserved, the centers for disease control and prevention, choose from January 2018 to June 2019 I center admitted during the period of 82 pulmonary tuberculosis patients as the research object, in the sputum specimens of patients with isolating n/med tuberculosis bacterium, drug sensitive test for roche medium, 4 weeks, 6 weeks after the compare test results with the standard analysis, analysis of accuracy.Results: all groups of bacteria medicine sensitive experiment results for interpretation of time and accuracy: SM (streptomycin) accuracy 4 weeks (92.67%) less than 6 weeks (97.92%), INH (INH) accuracy (99.17%) than 4 weeks (96.67%), 6 weeks EMB (ethambutol) accuracy 4 weeks (92.67%) less than 6 weeks (98.33%), RFP (rifampicin) accuracy 4 weeks (90.83%) less than 6 weeks (98.75%) (P<0.05).Conclusion: It is suggested that the sensitivity of isomeric umbilicus should be interpreted at the 4th week, and that of streptomycin, ethambutanol and rifampicin at the 6th week.

Key words: tuberculosis;Roche culture medium;Drug sensitivity test;Interpretation time;accuracy

引言

罗氏培养基是结核菌药敏试验最常用的基础培养基，世界卫生组织将罗氏培养法作为结核菌药敏试验的标准方法，但是在实际临床检验中，结核菌罗氏培养基药敏试验结果影响因素较多，尤其是结果判读时间尚存在一定争议，需进一步深入探索。为进一步提高结核菌罗氏培养基药敏试验结果准确性，探索判读时间与检测结果的关系，本次研究选择2018年1月~2019年6月期间我中心收治的82例肺结核患者为研究对象，对培养4周和6周判读的结果进行了比对分析，现总结报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取市疾控中心保存的250株结核菌株，选择2018年1月~2019年6月期间我中心收治的82例肺结核患者为研究对象，从这些患者中的痰标本中分离出结核菌。在所有肺结核患者中，男性42例，女性40例，年龄在25岁~75岁之间，所有患者的痰标本涂片检查均为阳性。

1.2 方法

分别对250株结核菌株及82例患者痰标本分离出的结核菌进行实验，两组菌株均培养至第6周，统计第4周、6周的数据进行对比。使用统一标准（《全国结核病诊断细菌学检验规程》）制备的改良罗氏培养基进行接种和孵育。培养基配方：谷氨酸钠（纯度99%以上）7.2 g、KH ₂ PO ₄ 2.4 g、MgSO ₄.7H ₂ O 0.24 g、枸橼酸镁0.6 g、丙三醇12 mL、蒸馏水600 mL、新鲜鸡蛋液1000 mL、孔雀绿（2%）20 mL。培养基药物浓度SM（链霉素）4μg/mL；INH（异烟肼）0.2μg/mL；EMB（乙胺丁醇）2μg/mL；RFP（利福平）40μg/mL。每只标本取0.01 mL均匀接种于每只培养管的斜面上（每只培养管7 mL）水平放置且斜面向上置于37℃的环境中24 h，之后分别竖直培养于37℃的环境4周、6周，期间进行SM（链霉素）、INH（异烟肼）、EMB（乙胺丁醇）、RFP（利福平）四种药物的药敏实验，观察所有菌组在第4、6、8周的实验结果准确率，找出每种药物最准确的药敏试验时间点。

1.3 统计学分析

本次研究采用SPSS20.0统计学软件分析所有数据，计量资料符合正态分布采用均数±标准差表示，组间比较采用成组t检验；计数资料采用率或构成比表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05认为差异具有统计学意义。

2 结果

因菌株在6周后开始变黄、变干，没有继续生长，所以药敏实验结果只对比第4周和第6周。对比发现，所有菌组INH在第4周准确率更高，SM、EMB、RFP在第6周准确率更高（P<0.05 ），详见表1。

表1 所有菌组不同时间不同药品准确率对比（n=240）

3 讨论

本研究所选取的结核菌菌株包括两种，一是来自市疾控中心保存的结核菌株，二是从我中心收治的结核病病人痰液分离出的结核菌菌株，主要是为了保证实验结果的广泛性。实验的四种药物为SM（链霉素）、INH（异烟肼）、EMB（乙胺丁醇）、RFP（利福平）。其中链霉素是应用于结核病治疗的主要药物，它作用于结核菌体内的核糖体，为了抑制结核菌的蛋白质合成，破坏结核菌的细胞完整性；异烟肼也是抗结核病的一种主药，它口服易吸收，易溶于水，常与链霉素一起使用，主治结核性淋巴腺脓疡和浸润性肺结核；乙胺丁醇作用机制目前尚未完全证明，部分学者认为其是通过影响结核菌内核糖核酸的合成而抑制结核菌生长，本品主要应用于对链霉素过敏的病人；利福平是一种与其他抗结核药联合应用结核病的初治与复治，它具有广谱抗菌作用，对结核杆菌具有较好的抗菌活性。

近年来，部分文献研究提出，结核菌罗氏培养基药敏结果和判读时间存在一定联系，培养4~8周后的判读结果存在差异性。但是，在实验室药敏试验中，含药培养基培养6周后培养基会变黄变干，而菌株会变老变干，失去检测价值，因而一般不采用6周以后的判读结果，故不采取8周为判断时间点，主要采取4周和6周作为判断时间点。为此，本次研究对比了培养4周和6周的判断结果准确性，与实验室质控下标准结果比较，

研究结果显示，所有菌组的药敏试验结果时间及准确率对比为：SM（链霉素）准确率第4周低于第6周、INH（异烟脐）准确率第4周高于第6周、EMB（乙胺丁醇）准确率第4周低于第6周、RFP（利福平）准确率第4周低于第6周（P<0.05）。所以，建议于第4周进行异烟脐药敏结果判读，于第6周进行链霉素、乙胺丁醇、利福平的药敏结果判读。

参考文献：

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