摘要目的构建肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素糖基识别结构域(LSECtin-CRD)双半胱氨酸(Cys)突变体原核表达载体，获得LSECtin-CRD突变体蛋白，并鉴定其生物学活性。方法基于LSECtin-CRD的三维结构模型选择突变位点；通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)对LSECtin-CRD基因引入Cys点突变，构建pET28b-Tat-LSECtin-CRD突变体载体；IPTG诱导可溶性表达LSECtin-CRD突变体蛋白，SDS-PAGE鉴定蛋白质表达水平；亲和层析方法对突变体蛋白进行纯化；通过检测突变体蛋白的甘露糖和GlcNAc结合能力鉴定其生物活性。结果菌液PCR和测序结果表明LSECtin-CRD双Cys突变体G205C-A227C和G205C-D279C原核表达载体构建成功，SDS-PAGE结果显示两个突变体蛋白均实现高效可溶性表达，单糖结合试验结果显示两个突变体蛋白均具有良好的生物学活性。结论本研究获得了具有生物学活性的LSECtin-CRD双Cys突变体蛋白，为进一步研究LSECtin-CRD结构和功能关系提供实验依据。
