HPLC法测定碳酸饮料中的维生素C

HPLC 法测定碳酸饮料中的维生素 C

李 伟 杨会娟

青海省地质矿产测试应用中心 青海 西宁 810008

摘要 采用反相高效液相色谱法(HPLC)，测定碳酸饮料中的维生素C食品添加剂。实验采用C₁₈柱化学键合固定相，以体积比为6：94的甲醇和0.02mol/L乙酸铵(PH值为5.4)混合液为流动相，在紫外检测波长230nm，流速0.8ml/min,常温下进行检测。相关系数：维生素C为0.9987。变异系数(RSD%)小于1.16 (n=6),回收率范围为98.0%—102%。此方法具有灵敏度高，样品处理简单，工作效率高的优点，其结果令人满意。

关键词 HPLC 维生素C 饮料

Determination of vitamin C in carbonated beverages by HPLC

li Wei， Yang Huijuan

（Qinghai geological and mineral resources test application center， Xining Qinghai 810008）

Abstract: Using reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC), the determination of vitamin C food additives in carbonated drinks. Experiments using C18 column chemical bond synthetic stationary phase volume than 6:94 methanol and 0.02 mol / L ammonium acetate (pH 5.4) mixture as mobile phase, in the UV detection wavelength was 230nm, flow rate 0.8ml/min, at room temperature were detected. The correlation coefficient: vitamin C was 0.9987. Coefficient of variation (RSD%) is less than 1.16 (n=6), the recovery range is 98% - 102%. The method has the advantages of high sensitivity, simple process and high work efficiency, and the result is satisfactory.

Key Words: Reversed-phase HPLC, vitamin C, Drinks

食品是维持人类生存的基本物质，随着生产水平和人民生活水平的提高，人们对食品的要求也不断提高，各种添加维生素C的饮料、果汁不断涌入市场。食品添加剂有维生素、氨基酸与矿物质等种类。维生素是调节人体各种新陈代谢过程比不可少的营养素，它几乎不能在人体内产生，必须从体外不断摄取，当膳食中长期缺乏某种维生素时，就会引起代谢失调、生长停滞，以致进入病理状态。因此维生素在人体营养上有重大的功用，维生素强化剂在强化食品中亦占有重要的地位。人工加入的食品添加剂分析是在食品分析中的主要应用之一^[1-2]。

本文采用单一波长，等度淋洗的方法，用0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液进行样品处理后，经0.45mm滤膜过滤后直接进样，并就反相高效液相色谱法测定食品中常见的三种食品添加剂的波长、回收率、精密度、线形范围等进行了研究，选择了最合适的分离色谱条件。样品实验表明，此法灵敏、准确快速、简单、实用，得到了令人满意的结果。

1 实验部分

1.1 试剂

(1) 甲醇(AR):经0.45μm滤膜过滤

(2) 0.02mol/L乙酸铵溶液:称取1.54g乙酸铵(AR)加水溶解,于1000ml容量瓶中定容,溶解后经滤膜过滤,PH值为5.4

(3) 0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液:称取0.5gEDTA(AR)于1000ml水中加入2ml冰乙酸摇匀即可

(4)维生素C标准储备液(1.0g/ml):称取维生素C(AR)0.1000g加水、0.4%醋酸溶液定容至100ml,临用时配

(5)维生素C标准使用液(不同浓度):吸取上述储备液适量，定容至大小不同的容量瓶中，此标准使用液每毫升含维生素C的量 (mg)均为0.008，0.01， 0.02， 0.04， 0.06， 0.08， 0.1，0.12， 0.14， 0.16， 0.18。

1.2

仪器

Waters 高效液相色谱系统进样器；Waters 600E泵；Waters 2487紫外检测器 ；超越2000色谱工作站(浙江省科学器材进出口有限责任公司)；微量进样器；超声波清洗器(天津奥特恩斯仪器有限公司)；分析天平；抽滤装置；水系针头滤器(先德(天津)科技仪器有限公司) 规格φ13,0.45。

1.3 色谱条件

色谱柱: Nova-PakC₁₈(3.9×150mm)；流动相:甲醇:0.02mol/L乙酸铵＝6:94(V/V)；检测器:紫外检测器；波长: 230nm；流速: 0.8ml/min；柱温:室温

进样体积:10μL；检测灵敏度: 1.000AUFS。

1. 4. 样品预处理

1.4.1 碳酸饮料

取样30ml于小烧杯中,超声波震荡10min除去CO₂。准确吸取上述溶液0.1ml和10ml加0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液分别定容到250ml和50.0ml经针头滤器过滤滤液注入样品瓶直接进样分析。

2 结果与讨论

2.1 流动相选择

液相色谱中流动相的选择是非常重要的。在给定固定相的情况下，溶质的保留和溶质对的分离主要由流动相的性质决定。一理想的流动相应具备如下性质：具有稳定的化学性质；溶剂的选择要与使用的检测器有相溶性；溶剂粘度小，易于纯化，沸点不应太低；溶剂的毒性应尽可能小，并不易起火；成本低^[3-4]。

色谱分离中流动相的选择直接影响组分的分离度。本实验表明，流动相中甲醇与0.02mol/L乙酸铵(PH值为5.4)的比例为6:94时各组分分离较好(见图一)。

2.2 流速的选择

流速的大小直接影响着柱及系统的压力、组分分离度、洗脱时间。在流动相固定后，选择最佳分离度和最短分析时间的流速。流速太小,分析时间过长；流速太大，系统压力过高，容易冲塌柱子，分离度减小。通过实验选择在0.8ml/min和1.0ml/min流速下测定。在流速为0.8ml/min时，结果发现峰形好，干扰峰少，分离度好，基线较稳（如图1）。再将流速改为1.0ml/min时，发现保留时间没有什么变化(如图2)。

[1]维生素C

图1 流动相比例为6：94时色谱图

[1]维生素C

图2 流速为1.0ml/min时色谱图

2.3 标准曲线的绘制

准 确量取维生素C的标准储备液，配制一系列不同浓度的标准溶液，用微量进样器分别移取10μL进行反相高效液相色谱法(HPLC)分析。实验表明，维生素C的浓度与色谱峰面积呈良好的线形关系。(结果见表1)

表1 维生素C浓度和峰面积

通过进行多次点的取舍后作图发现维生素C在0.01mg/ml—0.18mg/ml范围内线

表2 程与相关系数

项目 保留时间 回归方程 相关系数

维生素C 1.205 y=15168456.26x－157458.61 0.9987

性良好。标准曲线(见图3)。在此线性范围内计算回归方程和相关系数 (见表2) 。

2.4 精密度实验

用浓度为0.08mg/ml的标准使用液做同一水平六次测定,其结果(见表3)

表3 精密度实验

由此可见:本实验精密度好,实验方法的重现性是令人满意的。

2.5 样品回收率

取碳酸饮料添加一定量的维生素C标准溶液依法测定测得回收率为：维生素C 为101%结果(见表4)。

表4 碳酸饮料的加标回收

3 结论

经实验认为，采用0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液做提取液，不但对维生素C的测定没有影响，尤其是既不干扰维生素C的测定，又能抑制Cu²⁺或Fe³⁺的氧化作用。实验结果表明此处理方法对提高维生素C的稳定性较为有效，加标回收率在98%以上。

由实验可知：本方法的灵敏度高、基质干扰小，且回收率高、精密度好。具有灵敏、准确、高效、实用、操作简单等诸多优点。特别适合于日常食品样品的快速测定。

参考文献

[1] 王天竹.食品卫生检疫方法（理化部分）注解（下）[M] .北京：中国标准出版社，2008.386-392

[2] 蒋燕霞，肖礼娥，林榜建.HPLC法分析油菜花粉中维生素C含量[J].海峡药学，2013.25（3）；53-54

[3] 胡晓艳. HPLC法测定力度申泡腾片中维生素C含量[J].广东药学，2005.15（1）；8-10

[4] 刘平，李强，金庆中等.保健食品及营养素补充剂中维生素C稳定性研究[J].中国食品卫生杂志，2011.23（2）；137-141

李伟（1983-），男，青海省地质矿产测试应用中心，高级工程师，研究方向：长期从事化学分析工作。