大兴安岭地区人民医院 165000
【摘要】目的 分析丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)双抗原夹心法化学发光检测的应用效果。方法 选取本院2019年10月-2020年10月诊治的65例丙型肝炎病毒抗体患者血清标本开展本次试验研究,65例标本均分别进行间接法检测(对照组)和双抗原夹心法检测(观察组),比较两组检测效果。结果 对照组和观察组的检测灵敏度均为100%,组间比较无差别(P>0.05);对照组和观察组的检测特异度分别为92.63%和98.48%,组间比较差异显著(P<0.05)。 结论 在丙型肝炎病毒抗体检测过程中应用双抗原夹心法化学发光检测能够获取到更好的检测效果,检测灵敏度和特异度高,可以为患者后续治疗工作提供重要依据,具有推广价值。
【关键词】丙型肝炎病毒抗体;双抗原夹心法;化学发光检测
[Abstract] Objective To analyze the application effect of double antigen sandwich chemiluminescence detection for hepatitis C virus antibody (anti HCV). Methods 65 serum samples of hepatitis C virus antibody patients diagnosed and treated in our hospital from October 2019 to October 2020 were selected to carry out the experimental study. 65 samples were detected by indirect method (control group) and double antigen sandwich method (observation group), and the detection effect of the two groups was compared. Results the detection sensitivity of the control group and the observation group were 100%, and there was no difference between the groups (P > 0.05); the detection specificity of the control group and the observation group were 92.63% and 98.48%, respectively, with significant difference between the two groups (P < 0.05). Conclusion the application of double antigen sandwich chemiluminescence detection in the detection of hepatitis C virus antibody can obtain better detection effect, high detection sensitivity and specificity, which can provide important basis for the follow-up treatment of patients, and has the promotion value.
[Key words] hepatitis C virus antibody; double antigen sandwich method; chemiluminescence detection
丙型肝炎病毒在临床上非常常见,其感染呈现出世界性分布状态,目前,我国的丙型肝炎病毒感染者约为4000万人【1-2】。当人体受到丙型肝炎病毒感染以后产生的感染即为抗-HCV,目前临床上检测该抗体常用的方法有化学发光法、酶联免疫法、 时间分辨荧光免疫分析法等,均应用间接法展开检测,但在实际检测工作中,间接法具有假阳性高等缺点,临床检验成本会提升,会从侧面加重患者的精神负担,为此探索具有高灵敏度、高特异性的检测方式具有重要意义【3】。本次研究主要以丙型肝炎病毒抗体患者血清标本为对象,分析双抗原夹心法化学发光检测的应用效果。
1 资料和方法
1.1一般资料
选取本院2019年10月-2020年10月诊治的65例丙型肝炎病毒抗体患者血清标本开展本次试验研究。65例患者中有男35例,女30例,平均年龄为(42.35±5.87)岁。
1.2方法
1.2.1材料
选取重组融合HCV抗原,均来源于芬兰Hytest公司,包含有NS5、NS3、core片段;选取生物素和吖啶酯,均来源于Sigma公司;选取素磁颗和化学发光激发液1和2,均来源于苏州长光华医生物医学工程有限公司;选取间接法化学发光检测试剂盒,丙型肝炎病毒抗体测定试剂盒,来源于Abbott公司。
1.2.2方法
1.2.2.1制备吖啶酯标记抗原
取适量重组融合HCV抗原,应用pH9.5CB0.05mol/L将抗原浓度调整为1mg/mL,根据吖啶酯:按抗原=10-20:1,计算好活化吖啶酯的含量并加入进去,令其进行室温反应,时间约为0.5-1.0个小时,将反应液转移到透析袋中,将截留分子量控制在8000-12000,应用pH9.5CB0.05mol/L展开透析处理,透析时间为24个小时,然后将等量甘油加入进去,将其放置于-20℃的环境中进行保存。
1.2.2.2制备生物素标记抗原
取适量重组融合HCV抗原,应用pH9.5CB0.05mol/L将抗原浓度调整为1mg/mL,根据生物素:抗体=10-20:1,计算好活化生物素的含量并加入进去,后续步骤同制备吖啶酯标记抗原的方法相同。
1.2.3操作步骤
首先进行反应,将吖啶酯标记重组丙型肝炎抗原以及生物素标记重组丙型肝炎抗原和样本之间进行充分反应以后,组建成抗原-抗体-抗原这一夹心复合体。将链霉亲和素磁微粒加入进去,在生物素和链霉亲和素的相互作用下,复合体会进一步发展成为固相。将反应液放置在一个磁场之内,令检测液中含有的磁微粒被吸附,然后展开洗涤,冲洗并去除未能够结合的物质。然后将化学发光激发液 1和2注入进去,对化学发光光子的实际强度进行检测,以临界值为依据,对样本之中是否存在有 Anti-HCV进行判定,样本中含有的RLU值与Anti-HCV浓度之间呈现出正相关。
1.3观察指标
评估两组检测效效果:应用EXCEL软件对实验结果进行分析和计算,对比两组检测灵敏度和特异性。
1.4 统计学分析
数据分析取SPSS19.0软件,计数资料用%表示,行 检验,(P<0.05)时代表具有统计学意义。
2 结果
对照组和观察组的检测灵敏度均为100%,组间比较无差别( =0.000,P=1.000);对照组和观察组的检测特异度分别为92.63%和98.48%,组间比较差异显著(
=4.029,P=0.045)。
3 讨论
丙型肝炎具有全球性感染特这一特点,目前就全球范围内,HCV的感染率为3%左右,我国HCV的感染率约为3.2%,慢性丙型肝炎的实际肝硬化率为10-15%左右, 丙型肝炎慢性化率可高达50-85%,对于失代偿期肝硬化患者来说,其10年之内生存率约为25%【4-5】。
HCV感染一般情况下具有隐匿性,常常被人们所忽视,患者在感染HCV的情况下,随着其临床病程的延长,其临床治疗就越困难,治愈率就越低,在病情进展影响下,患者会进一步出现肝细胞癌和肝硬化等种种严重性疾病,严重影响到了患者的健康安全,为此选取科学有效的检测方式对患者进行早期诊断具有积极意义,双抗原夹心法应用两种重组抗原对吖啶酯和生物素分别进行标记,相对比于间接检测法来说,能够有效提升患者的诊断灵敏度和特异度,能够显著提升患者的诊断效果【6-9】。本次研究结果表明对照组和观察组的检测灵敏度均为100%,组间比较无差别(P>0.05);对照组和观察组的检测特异度分别为92.63%和98.48%,组间比较差异显著(P<0.05)。说明双抗原夹心法化学发光检测的应用有利于优化丙型肝炎病毒抗体检测工作【10】。
综上所述,在丙型肝炎病毒抗体检测过程中应用双抗原夹心法化学发光检测能够获取到更好的检测效果,检测灵敏度和特异度高,可以为患者后续治疗工作提供重要依据,具有推广价值。
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