分光光度计计量检定的一些注意事项

分光光度计计量检定的一些注意事项

孙瑛

常州检验检测标准认证研究院 江苏常州 213000

摘要：伴随分光光度计的准确性、灵敏性在不断进步，其应用的范围也在增加。本文主要从其测量原理开始介绍，其中参数中的波长以及物质性能参数是通过影响鉴定的因素确定的；从检测原理出发，简单讲述鉴定过程中应注意的事项。主要先从检定波长，即粗检及后续调整进行具体阐述，然后分析鉴定要素，在计量标准、比色皿以及波长会出现的最大误差和重复性展开说明，对分光光度计的检定提供相应的指导性建议。

关键词：分光光度计；计量检定；注意事项

1 分光光度计波长检定

1.1 分光光度计测量原理

分光光度计的主要构成如图 1 所示。

图 1 分光光度计组成

使用分光光度法将光度计进行简单分组，可以分为红外光波长、紫外光波长、可见光波长等范围，并从中选取任何一种混合光源中进行过滤得到新的需要的单光色，并将其特点通过电路转到其他具有信号的显示器中。不在遵循经典的牛顿力学的是在微观动力学中的分子运动，光子在量子力学中具有波粒二象性，λ=C/V（光速：C、频率：V、光的波长：λ），在光照的作用下的分子可能会发生那个跃迁，不同波长范围的光能也有所不同，导致发生跃迁的等级也有所不同，不同物质对光的照射在分子上的体验可以利用吸收光带进行表示，物质的吸光能力A符合Lambert-Beer law法则：

A=-lg（ ）=K×L×C A=-lg（I/ I₀）=-lgT=klc （1-1）

公式（1-1）中的符号，其物理意义大致为：监测的I单色光强与I₀入射光强的比值取对数，正比K、I、C分别是光的吸收度、溶液中光程以及溶液浓度的乘积。为了获得单色光，需要良好的光源，并且当复杂光通过滤光片之类的装置并且获得单色光时，用窄狭缝来调整光和其它方法，最后，通过色盘溶液进行测量系统，以获得理想的光强度。实现了光信号的采集。

1.2 分光光度计波长粗检

分光光度计的光谱原理是对使用最敏感的光源的波长，理想状态是波长稳定，但环境复杂，在使用过程中粗心大意和失误会无意中破坏光路。为了避免使用光度计，在使用前必须查看波长，因为光路问题浪费了检测时间。如果粗检不合格，则重新检查直至合格。

粗检方法通常在580nm处可见光波长，窄波长设置为2 nm（显示误差间隔）。用钨灯稳定电源一段时间，正常粗糙度的测量结果应为强度为580nm的黄黄光斑，白纸光斑强，分辨率强。上述试验将使用氘灯进行。白纸上的光斑应低于钨灯投射时的光斑强度。你可以从580nm大方向调整波长。根据可见光的颜色，光斑的颜色逐渐变红，并从580 nm调整到一个小方向。通过可见光的分布颜色，斑点的颜色变为紫色。在实际测量中，如果没有出现上述现象，需要对光度计进行细化检测，如果出现，则完成粗检测，用氧化玻璃滤光片或石英汞灯对整个波段进行检测，而每一段的波长都与相关的规范规则有关，因此有可能对其进行调整，即操作。

图2 工作原理

1.3 波长调整后续工作

许多分光光度计用于定量分析。例如，检测一种物质中的微量有机成分不需要知道具体的含量，只需要比较样品和标准样品的曲线。首先，通过获得标准样品的溶液吸光度，获得样品的吸光度后，需要通过比较标准曲线来测量物质的含量。当波长被偏置时，有必要调整波长。调整标准满足所有仪表指标相应检验规则的要求。重新校准的光度计在使用前需要重新绘制曲线。因为没有重画，所以有必要通知用户调整信息，以免造成测量错误。否则，由于检查协调人的疏忽，波长调整后不通知用户，如果发现测量结果不成功，可以反复检查，无法查出原因，影响效果和利润。用户在使用分光光度计进行测试时要小心，但如果测试结果与理想数据有较大偏差，首先要对波长进行复核，如果有问题，再对标准曲线进行复核，并对测试进行复核，并对最简单图片的方法进行复核。

分光光度计使用完毕后，即使长时间不使用，也要定期对人员进行光斑检测，调整波长，重新检查信号系统的转换精度，使用完毕后，将光度计放置在无背光、清洁、无振动的地方，没有电磁辐射，也没有温度。合适的温度和湿度位置是为了保证波长的准确性和稳定性。

2 分光光度计检定要素

2.1 比色皿成套性的检定

分光光度计在使用时往往忽略测试设施。虽然重点放在光度计的自校准上，但由于没有比色皿进行性能测试，使用中的测试结果误差较大。造成这个问题的原因是公司和实验室用户对光谱仪的原理不太了解。公式（1-1）的I和K由比色皿的宽度和性能决定，当比色皿之间发生变化时，检测结果变为倍数并发生偏差。例如，在一家公司，当使用分光光度计测量光谱时，即使溶液得到确认，也符合测量标准，但测量结果总是有问题的。该问题的原因是在检测步骤中样品溶液的比色皿的固定是恒定的，但是长时间的反应被多个样品的注入所污染，并且比色皿的性能参数与标准样品不同。由于新的无色碟子不一定都能定型，所以在使用和测试之前，必须使用相关规则的比色皿。设置错误必须满足小于规则的要求。清洗前要用pH值小的水擦干，清洗后要注意用蒸馏水擦干和擦干。

2.2 计量标准的合理性

作为检定仪器，与测量标准的接触是不可避免的。由于分光光度计的标准因行业而异，所以不知道使用时应遵循哪种标准。例如，集合的误差范围尽可能按照国家规则的规范来设定。工作环境、工作温度、湿度等，以具体测量对象为准，并填写规则作为测试的标准值，并且可以避免必要的通信和繁琐的转换，避免由于阶段引起的系统误差。

2.3 波长检定关键因素

例如，在紫外-可见光的波长范围内，当使用氘灯时，波长应在365 nm内不会出现谱线，并且分支谱线出现在365nm或更大。在可见光波长范围内，使用汞灯时会出现许多光谱线，但必须点火。在波长重复测试中，扫描光源必须保持稳定，采用稳压流的功率，波长精度一般为重叠部分的一半或更少。

3 结束语

由于分光光度计的工作原理不太常见，操作人员经验不足，通讯调整滞后，光度计的测量结果常因故障或粗心大意而出错。作为分光光度计领域中必须广泛学习和使用的一项重要的检测规则。从波长、比色皿、环境、维护、电源灯等方面保证光度计检测的准确性。

参考文献:

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