药品中微生物污染检测方法验证的必要性研究

药品中微生物污染检测方法验证的必要性研究

徐婉婷1田海燕1孙茂坤*2
1聊城市食品药品检验检测中心252000
2山东省立第三医院250031

摘要：对微生物的检测的过程比较耗时、复杂以及繁琐，并且在其中还存在着很多不确定的干扰因素，因此需要对药品中微生物污染检测方法进行验证。

关键词：药品；微生物污染检测；验证；必要性

微生物尤其是混在药品之中的微生物，其生长会受到各种因素影响，药品自身可能会有防腐剂以及抑菌成分，这些成分会对微生物起到抑制甚至是消灭的作用，而受到抑制作用的微生物也会受到一定损伤^[1]。因此在药品中微生物污染检测中，培养基的条件、测定的方法、测定样品浓度、样品处理的方法以及微生物抗性都会对检测结果造成一定影响，所以要对药品中微生物污染检测方法进行验证^[2]。本文就此介绍了药品微生物污染检测的原则、难点、过程以及存在问题，具体如下。

1. 
   

2. 药品微生物污染检测的原则

选择药品微生物污染检测的方法往往需要遵循两个原则，即操作需要简单快速，方法需要适宜。第一操作需要简单快速，制备实验溶液、消除抑菌的成分以及检验微生物都需要快速而又简单，因为检验方法太慢或者操作比较复杂繁琐，会导致实验产品中的被污染微生物被破坏，并且会产生人为的污染。第二方法需要适宜，对于药品微生物污染检测需要选择比较合适的方法，尤其是抑菌剂或者中和剂的消除方法在选择时应该尽量减少人为的破坏，避免试验产品中被污染的微生物遭受到破坏，并且使用膜过滤法筛选那些有强抑菌作用的产品。

2. 
   

3. 药品微生物污染检测的难点

1. 
   

2. 微生物的状态非常不稳定。微生物的生命活动如生长繁殖需要处在适宜的条件与环境中，如果环境不适合微生物生存则对微生物的生命活动造成影响，微生物可能会进入休眠的状态，这也是在不同时间以及不同环境中对微生物的检测会出现不同检测结果的原因。特别是那些混在抑菌药品里的微生物，只是受到了抑菌药物的抑制作用却没有被彻底地消灭，当这些没有被彻底杀死的微生物随着人服用药物进入到人体中时，等到条件与环境合适时又会重新生长于繁殖起来，从而对人体会造成危害。

3. 微生物具有不确定性。微生物污染药品是一件不确定的事件，而造成这种污染的因素也有多种，如包装环节受到污染，运输过程受到污染，设备污染，制药的环境受到污染等，而这些药品污染的来源与路径也无法预测，并且对于基数庞大的药品的检查一般采取的是抽样式的检查，微生物污染又是一个随机的变量，从而导致了检测的难度大大增加。

4. 微生物具有不均匀性。微生物是有簇团性的，由微生物形成的簇团紧密度以及大小有可遗传性的特点，并且差异比较大，对检查的有效性会造成一定影响。

5. 对微生物的检查比较复杂。对药品中微生物污染检测方法验证的时间周期比较长，检测的程序也比较繁琐，并且存在许多干扰因素，使检测的难度大大提升。

3. 
   

4. 药品微生物污染检测的过程

准备菌株，对培养基进行无菌检查。在使用培养基时，检查有无微生物受到污染或者出现干燥收缩，控制菌设定相应的对照组，检测专属性，培养基经预培养后根据测定的微生物选择标准的菌株实验，菌株不能超过五代。

验证酵母菌、霉菌与细菌的计数方法与判断指标。平行实验需要进行三次及以上，对每次实验的菌株回收率进行计算。验证的菌株为枯草杆菌、黑曲霉菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌以及白色念珠菌。分为菌液组、实验组、供试品的对照组以及稀释剂的对照组，具体方法为每一株实验菌准备两个平皿，使用平皿法或者薄膜过滤法进行计数。根据实验的结果计算稀释剂的对照组菌株的回收率以及供试品组菌株的回收率，若是在任何一次的实验中，实验组菌株的回收率在50%以下，则应该使用薄膜过滤法、培养基稀释法等对供试品中抑菌活性进行消除，然后重新进行验证。

制备特殊的供试品。供试品由于其自身特性会产生出假阴性，因此可以利用微生物和供试品之间的差异在生产的过程中将供试品对于药品微生物的影响消除，就可以准确地测出药品微生物真正的含量。具体做法为：（1）使用中和法，使用的中和剂对微生物应该无毒，并且和抑菌成分相结合之后产生的物质对微生物也应该无毒，或者对微生物有毒但是却不影响待检查的菌株的检出。（2）使用薄膜过滤法，这种方法是一种比较常被用于检测的方法，一般用于过滤产品，如无菌的检查，为了减少抑菌的效果，选择滤膜时应选择吸附性低的。如果经过简单的过滤后没有将抗菌物质完全清除，则应该使用其他的措施配合清除，如果药品中存在防腐剂，则可以洗涤滤膜或者稀释来使抑菌作用降低。（3）使用培养基稀释法，首先在培养基内加入一定量的供试液、供试品，使单位体积的供试液或者供试品的浓度稀释到没有明显的抑菌作用。注意这种方法的适用范围为：样品的抑菌活性比较弱，并且不能用薄膜过滤的方法，该方法验证的重点在于：对增加到培养基的量以及供试液或供试品没有显示抑菌活性之间的关系把握好^[3]。

4. 
   

5. 药品微生物检测存在的问题

首先是负责药品微生物检测的工作人员水平过低，检测工作人员大多都不是微生物专业的，在没有经过相关的专业培训情况下，对于相关的操作步骤、检测方法以及对结果的观察和分析都不能很好地掌握，因此会提高在检验过程中出现的风险。然后是负责药品微生物检测的工作人员的检测意识比较低，有很大一部分的检验人员不能完全理解微生物检验的方法及其适用性的实验，没有重视药品检验方法的适用性实验。最后是对检验人员的培训不够，科技在不断地发展，检验技术也在不断地提高，检验人员若是自身水平一直原地踏步而跟不上时代的发展，那么会对检验结果造成很大误差。

参考文献

[1]张丽梅,张竞帆,马勇,王晓峰.LOGISTIC回归在药品微生物检出数据分析中的应用[J].首都食品与医药,2020,27(11):128-130.

[2]周文君,刘爱明.不同药品的微生物限度检验方法验证的对比分析[J].家庭医药.就医选药,2017(09):46.

[3]李燕.加强药品微生物实验室检测能力的措施探讨[J].科学中国人,2017(09):68.

徐婉婷，女，1982年10月，山东聊城，本科，药品检验，聊城市食品药品检验检测中心，主管药师。