结核分枝杆菌(MTB)耐药突变基因检测在结核检测中的应用

结核分枝杆菌 (MTB)耐药突变基因检测在结核检测中的应用

周頔

湖南省胸科医院 湖南长沙 410000

摘要：目的：研究在结核分枝杆菌（MTB）耐药突变基因检测在结核患者中的检测效果。方法：选取2019年4月～2020年4月在我院治疗的肺结核患者562例，分别进行Xpert MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测、液体培养法、直接涂片三种检测方法，将临床诊断作为金标准。结果：MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测的准确度、灵敏度、特异度均高于液体培养法与直接涂片法，P＜0.05。结论：在结核病的检测中，采用MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测具有较高的诊断价值。

关键词：结核分枝杆菌；耐药突变基因；结核病

结核病是常见的感染病，是由结核分枝杆菌（MTB）引起的强烈的慢性疾病，最常见的为肺结核，是导致人类死亡的主要原因之一。据有关统计学报道，我国每年新发的结核患者可多达上百万里，仅次于印度及印度尼西亚。我国对结核病的防治规划是在2030年之前，争取将结核病的发病率降低80％，为了实现这个目标，对结核病患者的早期诊疗及耐药性检测就非常重要了^[1]。当前结核病的诊断依然依赖传统的涂片及培养法，培养周期长，生物安全性高，检出率较低。近些年开始推荐Xpert MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测，具有快速便捷的作用^[2]。本文就Xpert MTB/RIF系统结合利福平对可疑肺结核患者进行检测，评价此检测方式在耐药突变基因中的检测价值进行研究，现汇报如下。

1.资料及方法

1.1一般资料

选取我院收治的562例疑似肺结核患者，均于2019年4月～2020年4月期间收治，男369例，女193例，年龄：18-75岁，平均年龄（42.45±9.81）岁。临床诊断结果显示562例疑似结合患者中，MTB阳性424例、阴性138例。

1.2方法

所有患者均采用美国BD公司生产的BACTECMGIT960系统、MGIT管及利福平药粉；采用美国Cepheid公司生产的Xpert MTB/RIF设备及试剂盒以及贝索公司生产的抗酸染液。留取患者的痰液标本，按照《分枝杆菌分离培养标准》中的相关操作程序进行，N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH消化处理，之后将菌液悬垂在1.2mL的磷酸盐缓冲液中，将其中的0.5mL进行Xpert MTB/RIF系统检测，再取0.5mL根据BACTEC MGIT960系统用于分枝杆菌培养瓶中进行痰液培养，将剩下的0.2mL进行涂片抗酸染色检测。

1.3观察指标

（1）Xpert MTB/RIF检测结果；（2）液体培养法检测结果；（3）直接涂片法检测结果；（4）三种检测方法的准确度、灵敏度、特异度。

1.4评价标准

采用细菌学检查阳性为确诊结合病的依据。根据抗酸染色的多少来评定直接涂片法的结果，阳性：4+、3+、2+、1+；根据BACTEC MGIT960系统来评定液体培养法的阳性情况，采用涂片涂片萋尼氏染色镜检排除杂菌的污染后进行液体药物敏感性使用，并计算报阳时间；Xpert MTB/RIF系统用未检出、极低、低、中、高五个量级来表示，循环次数＞38则MTB未检出；循环次数29-38，MTB检出极低；循环次数23-28，MTB检出低；循环次数16-22则MTB检出中等；循环次数＜16则MTB检出高^[3]。

1.5统计学分析

采用统计学软件SPSS24.0，“ ”、（ ）表示计量、计数，实施t、c²检验，P<0.05：有统计学差异。

2.结果

2.1 Xpert MTB/RIF检测结果

Xpert MTB/RIF诊断阳性418例、阴性134例，6个阳性误诊为阴性；4个阴性误诊为阳性，详见表1：

表1 Xpert MTB/RIF检测结果分析表 n

2.2 液体培养法检测结果

液体培养法诊断阳性402例、阴性126例，22个阳性误诊为阴性；12个阴性误诊为阳性，详见表2：

表2 液体培养法检测结果分析表 n

2.2 直接涂片法检测结果

直接涂片法检查结果诊断阳性356例、阴性110例，68个阳性误诊为阴性；28个阴性误诊为阳性，详见表3：

表3 直接涂片法检测结果 n

2.4 准确度、特异度、灵敏度

Xpert MTB/RIF的诊断准确度、灵敏度、特异度显著较高，见表4。

表4 三种检查方法的准确度、特异度、灵敏度对比表

注：t/P为Xpert MTB/RIF与液体培养法比较；t1/P1为Xpert MTB/RIF与直接涂片法比较；t2/P2为液体培养法与直接涂片法比较。

3.讨论

结核病的检查虽然采用传统的结核菌培养、涂片抗酸染色、胸片检查对大部分结核病患者均可作出明确的诊断，但也容易出现漏诊和误诊；结核菌培养虽然有很高的特异度，但因为培养时间较长，无法满足临床快速诊断的需要，虽然这些年也出现了集中快速诊断的方法，如短期培养在进行免疫抗原性分析，尽管可以鉴别典型与非典型的MTB，敏感性高，但是也存在较大缺陷，如重复性差；还有一种短期培养如核酸探针杂交法，可降低诊断的假阴性率，但是容易出现假阳性，加之操作繁琐，缺乏诊断优势^[4]。

近些年，Xpert MTB/RIF系统的优势逐渐体现出来^[5]。Xpert MTB/RIF系统是一种检测MTB耐药性的系统，可根据是否发生基因突变来检测样本中是否含有MTB及是否对利福平耐药，可全自动的对样本进行提取、纯化、浓缩，结果在2h内就可以得出，是一种全自动化半定量巢式实时聚合酶联反应系统^[6]。本研究采用Xpert MTB/RIF系统、直接涂片法、液体培养法进行检测，Xpert MTB/RIF系统的准确度、灵敏度、特异度均高于其它两种检测方法，说明此系统可保持良好的检测性能。

综上所述，Xpert MTB/RIF系统应用在MTB的检测中，具有较高的诊断价值，值得临床推广。

参考文献

[1]李爱芳、崔晓利、康磊,等. 荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(09):120-124.

[2]薛建昌, 梁冰锋, 吴海峰,等. 2种结核分枝杆菌耐药基因突变检测方法诊断利福平耐药结核病的评估研究[J]. 遵义医科大学学报, 2020, 195(02):123-132.

[3]施伎蝉、何贵清、宁洪叶,等. 结核分枝杆菌耐药基因芯片检测在复治肺结核患者中的应用价值[J]. 浙江医学, 2020, 42(21):39-60.

[4]杨映晖、伍定辉、苏伟明,等. 基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(11):60-64.

[5]胡旭, 邢宝春. GeneXpert MTB/RIF在结核性心包炎诊断及利福平耐药检测中的应用[J]. 重庆医学, 2019, 48(04):698-701.

[6]李慧玲, 张译如, 杨雪莹,等. 佳木斯地区某院Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌基因及利福平耐药基因阳性率情况分析[J]. 黑龙江医药科学, 2020, 043(001):179-181.