不同产地半枝莲的UPLC指纹图谱研究

不同产地半枝莲的 UPLC指纹图谱研究

王长英 1 徐有光 1 张惠卿 2

1潍坊市中医院 药学部，山东 潍坊 261041

2潍坊市人民医院 药学部，山东 潍坊 261041

［摘要］ 目的:研究并建立半枝莲药材的UPLC指纹图谱。方法:采用反相超高效液相色谱法，C18柱，甲醇-甲酸水进行梯度洗脱，检测波长270 nm，对7个不同来源的药材进行了检测。结果:建立了半枝莲药材UPLC-UV指纹图谱共有模式，20个共有峰被标定。7批半枝莲药材的相似度均在0.990以上。结论:UPLC指纹图谱鉴别半枝莲具有重复性好、特征性强、方法简便等特点,可作为半枝莲药材的鉴别方法。

［关键词］ 半枝莲；超高效液相色谱法；指纹图谱

半枝莲Scutellaria barbata.D.D 为中医清热解毒药，具清热解毒，化瘀利尿功效^[1]。化学成分研究表明，半枝莲含有大量黄酮类、二萜类、挥发油类及多糖等化学成分^[2]；药理研究表明，半枝莲具有抗肿瘤^[3]、抗氧化、抗菌及免疫调节^[4]等药理活性。中药指纹图谱获得中药特征的色谱共有峰^［5］，特点是整体性、模糊性和量化性，能够全面体现中药总体质量，已成为鉴别真伪、控制质量的重要方法^［6］。我们采用半枝莲UPLC指纹图谱法控制半枝莲质量。该法简单快速，结果准确，为半枝莲药材栽培及相关制剂的质量控制提供了参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦超高效液相色谱仪1290; AS10200 超声处理器(天津特赛恩斯仪器有限公司) ; ME55型电子分析天平(瑞士梅特勒) ; 甲醇、甲酸为色谱纯; 水(超纯水)，使用前均经0.22 μm 滤膜滤过; 其余试剂均为分析纯。

1.2 试药

对照品野黄芩苷(批号: 110715-201718)、野黄芩素(批号:110726-201718 ) 、芹菜素(批号: 115624-201718)、半枝莲对照药材（121293-201404），均购自中国食品药品检定研究院。安徽亳州中药材市场（1号：湖南新宁，2号：安徽省临泉县，3号：安徽亳州），成都荷花池中药材市场（4号：四川双流），河北安国中药材市场（5号：河南确山，6号：陕西渭南，7号山西岚县），经潍坊市中医院王修斌主任中药师鉴定为半枝莲Scutellariabarbata D.Don 的干燥全草。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 (1.7 μm，2.1 mm×100 mm)；流动相：甲醇（A）–0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱(0min，10% A；0→5 min，26% A; 5→12 min，26% A; 12→20min，30% A; 20→27 min，32% A; 27→35min，38% A; 35→40min，43% A; 40→48min，60% A)， 35 ℃，0.2 mL/min，进样体积 2 μL，270nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备

精密称取野黄芩苷、野黄芩素、芹菜素对照品适量，分别用甲醇制成质量浓度分别为72.32、23.53、22.57 μg·mL^-1 的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密称取半枝莲粉末（4号筛）1.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 30 m L，密塞，称定重量，超声 30 min（25 k Hz，30 ℃，300 W），放冷，再次称定，补足减失重量，摇匀，12000 r/min 离心10 min，取上清，即得。

2. 4 方法验证

2. 4. 1 精密度试验

对制备的供试品溶液分别连续进样6次进行 UPLC 分析，对图谱进行检测，计算色谱峰的相对峰面积和相对保留时间的相对标准偏差(RSD) ，考察其精密度。

结果各共有峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD均小于4%，符合指纹图谱要求。

2. 4. 2 重复性试验

取同一批药材粉末6份，按“2. 2”项下方法制备供试品溶液，分别测定指纹图谱，计算色谱峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD，考察其重复性。结果各共有峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD均小于5%，符合指纹图谱要求。

2. 4. 3 稳定性试验

同一供试品溶液，分别于 0、5、10、20、25、30 h 进样，分别测定指纹图谱，计算色谱峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD，考察其稳定性。结果各共有峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD均小于5%，符合指纹图谱要求。

2.5 指纹图谱共有模式的建立

精密称定 7批不同产地半枝莲和对照药材粉末0.05 g，按照“2. 2”项下步骤制备供试品溶液，按“2. 1”色谱条件进样测定，得到7批不同产地和对照药材半枝莲的 UPLC 色谱图，对数据进行分析处理建立了半枝莲UPLC指纹图谱。3结果

3.1 半枝莲指纹图谱的建立

采用UPLC–UV 的方法对 7个批次和对照药材的半枝莲进行分析，将所得到的 7个批次的色谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（130723 版，2012）中，以 S8 标准药材色谱图为参照图谱，选择中位数法，设置时间宽度为0.1

，进行多点校正后，进行共有峰匹配，生成的指纹图谱，见图1，分析得到 20 个共有峰。

图1 7批半枝莲药材的指纹图谱

通过对半枝莲指纹图谱的相似度分析，7个批次的半枝莲药材中有 20 个共有峰，通过与对照品保留时间和紫外色谱吸收图谱比较，鉴定出 5号峰为野黄芩苷、13号峰为野黄芩素、19号峰为芹菜素。

3.2 相似度评价

将7批不同产地的半枝莲的指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（130723 版，2012），以S8对照药材色谱图为参照图谱，计算各批次药材与标准药材的相似度，如表1所示，半枝莲药材与标准药材的相似度在 0.990–0.996 之间，半枝莲药材总体上稳定性较高。

表1 不同产地的半枝莲药材 UPLC指纹图谱的相似度

4 结 论

4.1实验考察了半枝莲样品在 270 nm 和 335 nm 波长下的色谱图，结果发现 270 nm波长下的色谱图峰形好，紫外吸收较强，峰数较多，因此选择 270 nm 作为检测波长。

4.2本实验分别采用甲醇－甲酸水和乙腈－磷酸水 做流动相梯度洗脱，结果，采用甲醇－甲酸水分离效果和色谱峰峰形较好，故本实验用甲醇－甲酸水作为流动相。同时，本实验对流动相梯度进行了优化，最终选择“2. 1”项下的流动相梯度洗脱条件进行色谱分析。

4.3由图1可见，标定了20个共有峰对样品图谱进行分析可以看出，各个样品中主要的色谱峰基本一致，但各峰的面积差异较大。可见，不同产地半枝莲成分组成基本上还是一致的，但各成分的含量有一定的差异。

课题来源:

潍坊市中医药科技计划项目(2020-1-004)：半枝莲基于网络药理学——线粒体通路诱导A549肺癌凋亡机制研究

潍坊市中医药科技计划项目(2021-4-062)：半枝莲黄酮成分基于血清药理学——网络药理学诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制研究

参考文献

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典: 一部［S］． 北京: 中国医药科技出版社，2015: 109-110．

［2］Peng, Jun. Scutellaria barbata D. Don induces G1/S arrest via modulation of p53 and Akt pathways in human colon carcinoma cells.[J]. Oncology Reports, 2013, 29(4):1623-1628.

［3］卢小路, 徐海波, 石梦莹,等. 半枝莲通过Hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新[J]. 中药药理与临床, 2015(1):139-141.

［4］Antioxidant activities of several Scutellaria taxa and bioactive phytoconstituents from Scutellaria hastifolia L.[J]. Industrial Crops and Products, 2015, 77:196-203.

［5］谢培山.色谱指纹图谱分析是中草药质量控制的可行策略[J].中药新药与临床药理,2001(03):141-151+169-234.

［6］[1]刘昌孝,陈士林,肖小河,张铁军,侯文彬,廖茂梁.中药质量标志物(Q-Marker):中药产品质量控制的新概念[J].中草药,2016,47(09):1443-1457.