丹参提取物的毒性研究与安全性评价

丹参提取物的毒性研究与安全性评价

王志芳、于光

牡丹江师范学院 黑龙江 157011

摘要 目的：对丹参提取物的食用安全性进行毒理学研究。结论：丹参提取物急性毒性分级属无毒级，无遗传毒性，最大无损害作用剂量大于0.83g/kg体重，相当于人体推荐摄人量的100倍。丹参提取物在本研究剂量范围内是安全的。

关键词：丹参 安全

血脂异常是导致动脉粥样硬化和冠心病的主要因素。因此，降低血脂在心血管疾病一、二级预防中具有重要作用。目前调脂药有他汀类、倍特类、烟酸及胆酸螯合剂，这些药物的长期使用会带来一定的不良反应，如增加肌病和横纹肌溶解的概率，破坏肝脏功能，引起轻度肾脏损伤等等，阻碍了这些药物的长期使用^[1-2]。因此，急需开发出安全、有效、毒副作用小、可长期服用的降血脂产品。丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎。丹参味苦、微寒，入心、心包及肝经，具有活血通络、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦之功效。我们对丹参提取物的毒性和安全性进行了研究，为原料开发推广提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1受试物 丹参提取物 人体推荐量0.5g/d,是以丹参经65%乙醇提取制得，规格：丹参酮ⅡA 1%。

1.1.2实验动物 清洁级健康小鼠和SD大鼠。

1.1.3菌株 选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,共四株, 即 TA97a、TA98、TA100、TA102，经生物学鉴定合格。

1.1.4实验仪器 电子天平,Abacus全自动血液分析仪, Li- asys全自动生化分析仪,Olympus显微镜, 恒温水浴箱。

1.2方法

1.2.1 大、小鼠急性毒性试验 均按最大耐受量试验方法。实验前隔夜禁食, 不禁水。剂量为20g/kg体重,灌胃量为20ml/kg体重,给药后观察2周,判定其最大耐受量(MTD),评价其急性毒性强弱。

1.2.2 遗传毒性

1.2.2.1 小鼠骨髓细胞微核试验 小鼠每组10只，雌性各半，受试物设3个剂量组，2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及阴性（无菌水）、阳性（环磷酰胺40mg/kg）对照组。按文献^[3]介绍的方法进行实验。

1.2.2.2 小鼠精子畸形试验 小鼠每组10只，受试物设3个剂量组，2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及阴性（纯化水）、阳性（环磷酰胺40mg/kg）对照组。按常规进行实验。

1.2.2.3 Ames试验 采用标准平板掺入法在加和不加S的条件下进行，实验设 5个剂量, 5000μg/皿、1000μg/皿、200μg/皿、40μg/皿、8μg/皿, 另设空白对照、溶剂对照 (无菌水) 、阳性对照组, 阳性物为9 -氨基吖啶、2.7 -氨基芴、叠氮钠、2 -乙酰氨基芴、丝裂霉素C。实验结果以各剂量组与阴性对照组平均回变菌落数的比值(MR)来判断。

1.2.3 大鼠30d喂养试验 动物随机分成4组，每组20只,雌雄各半，受试物设3个剂量组,0.21g/kg、0.42g/kg、0.83 g/kg，另设阴性对照组，经口给药，按不同剂量要求将样品均匀拌入基础饲料。大鼠2只/笼饲养，自由进食饮水。连续观察30d，每周记录体重和进食量并计算食物利用率，实验期末断头取血、处死，对每只大鼠进行脏器大体观察，同时取肝、肾称重并计算脏体比，同时进行血象、血生化检查，并取肝、肾、胃肠进行病理组织学检查，常规制片，H-E染色。

1.3 统计学处理

数据采用SPS 12.0 forWindows统计软件包分析, 采用OneWayANVOA分析, 差异显著性检验水准为0.05。

2结果

2.1 大、小鼠急性毒性试验

实验期间, 各大、小鼠均未出现异常症状、体征, 也无死亡。丹参提取物对雌、雄性小鼠和雌、雄性大鼠经口MTD均大于20.0g/kg体重，属无毒级。

2.2 遗传毒性试验

2.2.1 小鼠骨髓细胞微核试验 结果显示阳性对照组微核率高达1.86% - 1.96%，而剂量组的微核率在0.14%-0.16%。与阴性对照组(0.14%-0.18%)相比差别无统计学意义( P>0.05), 提示丹参提取物对小鼠骨髓细胞染色体无明显断裂效应。

表1 小鼠骨髓细胞微核试验结果（`x±s，n=5）

2.2.2 小鼠精子畸形试验 结果显示各剂量组的精子畸形率在1.60%-1.84%, 与阴性对照组(1.84%) 相近,而阳性对照组的精子畸形率高达5.84%,提示丹参提取物对小鼠精子形态无影响。

表2 小鼠精子畸形检测结果（n=5）

2.2.3 Ames试验 丹参提取物各剂量组回变菌落数与阴性对照组比较均无明显差异。未见丹参提取物有致突变作用。

表3 Ames试验结果（`x±s）

2.3 大鼠30d喂养试验

2.3.1 生长发育 试验期间, 大鼠生长良好,各剂量组大鼠均无异常症状和体征,也无死亡。经方差分析检验,各剂量组动物的体重、进食量、食物利用率与阴性对照组比,差别无统计学意义( P>0.05) 。

2.3.2血常规及生化检查 各剂量组与阴性对照组比,差别无统计学意义 ( P>0.05) 。

2.3.3 病理组织学检查 解剖时大体观察未见异常, 脏器系数各剂量组与阴性对照组比较未见明显差别。镜下观察对照组和剂量组动物的肝、肾、胃、十二指肠均未见明显的病理改变。

3结论

实验结果表明:丹参提取物雌雄性大、小鼠经口MTD大于 20.0 g/kg体重, 根据急性毒性分级标准, 属无毒级；小鼠精子畸形试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验三项遗传毒性试验结果均为阴性；30d喂养试验显示大鼠体重、总食物利用率、血常规、血液生化指标、脏体比以及肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸和卵巢的病理组织学检查均未见异常改变。得出丹参提取物的最大无损害作用剂量大于0.83g/kg体重, 相当于人体推荐摄人量的100倍。综上所述, 丹参提取物在本研究剂量范围内是安全的。

参考文献

1. 刘萍，红岩.血脂异常与冠心病.现代中西医结合杂志.2006,15:265-266.

2. 李凝旭，李庚山，李建军.他汀类药物调脂外的抗动脉粥样硬化作用机制.中国动脉硬化杂志.2002,（10）：268-270.

3. 药物非临床研究质量管理规范.2003.