鸟不宿薄层鉴别和质量控制研究

鸟不宿薄层鉴别和质量控制研究

朱红红

镇江市第一人民医院招标采购中心，江苏 镇江 212000

摘要：目的：建立和完善鸟不宿薄层鉴别和质量控制方法。方法：考察不同展开剂、不同点样量、不同薄层板对薄层效果的影响，并考察了不同时间和不同温湿度的稳定性。结果：以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸（7:3:0.3）为展开剂、点样量3~5μl、硅胶G预制薄层板（德国MK），色谱分离效果较好，斑点清晰、圆整，同时薄层色谱在0h~24h内，温度5℃~25℃、湿度30%~60%条件下均稳定。结论：本研究确定的薄层色谱条件，客观、科学、准确，适用于鸟不宿的鉴别和质量控制。

关键词：鸟不宿；薄层鉴别；质量控制

1、药材基源及样品信息

鸟不宿为五加科植物刺楸Kalopanax setemLobus（Thunb.）Koidz.的干燥茎枝。刺楸中的化学成分主要有三萜及皂苷类、苯丙素类及多酚类等。其中刺楸皂苷在水解后能够得到常春藤皂苷元，可以作为定性及定量的指标。共收集鸟不宿饮片七批次，分别来自山东、安徽、广西、河北等地。但是该七批饮片均由五加科植物楤木炮制^[1]，均为伪品。因此，我们又分别采集了云南昆明、江苏镇江南山(春秋两季各1批)、江苏南京中医药大学(春秋两季各1批)三地的五批刺楸茎枝进行了分析。

2、实验仪器与方法

2.1、以常春藤皂苷元对照品为对照，制定本品的薄层鉴别方法。

METTLER XS205电子分析天平； KQ-250DB超声波清洗仪。

2.2溶液的制备：

取本品粉末1g，加入甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过。滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液，蒸干^[2]。残渣加甲醇20ml使溶解，再加入盐酸2ml，加热回流水解2小时，水解物加水10ml，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取常春藤皂苷元对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3薄层鉴别色谱条件：t:15℃，RH:50％，展开剂：正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸（7:3:0.3），点样量：5μl，薄层板：硅胶G板，展距：13cm，显色：10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点清晰，紫外光灯（365nm）下观察。

结果判定：结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。而楤木（伪品）色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的荧光主斑点。因此，此方法可以准确鉴别鸟不宿（刺楸）与楤木。在紫外光灯（365nm）下观察的斑点较日光下更多，更清晰。样品日光下的薄层色谱图见图1，荧光下的薄层色谱图见图2。

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图1 鸟不宿日光下的薄层色谱图

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图2 鸟不宿荧光下的薄层色谱图

备注：1：常春藤皂苷元对照品；2：供试品1（镇江161104）；3：供试品2（南京160318）；4：供试品3（镇江160309）；5：供试品4（昆明151220）6：供试品5（南京161209）7: 供试品6（楤木）

3、不同色谱条件的比较

3.1、不同展开剂的比较

按照上述方法配制供试与对照溶液，采用四种不同的展开剂^[3]进行展开效果的比较，T:15℃，RH:50%，供试品1（镇江161104），供试品2（南京160318），以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸（10:10:0.3）为展开剂，常春藤皂苷元Rf值太小；以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸（6:4:0.3）为展开剂，虽然常春藤皂苷元Rf值合适，但是样品斑点拖尾，不清晰；以氯仿-乙醇（9.3:0.7）为展开剂，斑点清晰，分离较好，Rf值合适，但是容易引起边缘效应，不利于结果判断；以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋

酸（7:3:0.3）为展开剂，展开的斑点比较合适。

3.2、不同点样量的比较

采用点样量1、3、5、10、20μl分别点样，T:15℃，RH:50%，展开剂：正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸（7:3:0.3），薄层板：硅胶G板，展距：13cm，显色：10％硫酸乙醇溶液），结果见图3。由图3可见，点样量3~5μl，色谱分离效果较好，斑点清晰、圆整^[4]。

1 3 5 10 20（μl）

图3 鸟不宿不同点样量的薄层色谱图

3.3、不同薄层板的比较

采用不同薄层板进行层析，T:15℃；RH:50%，可以看出，硅胶G预制薄层板（德国MK）层析效果最好，斑点清晰。硅胶G预制薄层板（青岛海洋）与自制硅胶G薄层板对照品与供试品中常春藤皂苷元点也分离较好，但供试品溶液中其他成分斑点分离不如硅胶G预制薄层板（德国MK）。

3.4、不同时间溶液稳定性考察

将供试品溶液分别放置0h、2h、8h、24h，点样，展开，显色，T:15℃，RH:50%，结果表明，供试品溶液经放置24h后，层析结果依然稳定，斑点清晰^[5]。3.5、不3.5同温、湿度稳定性考察

将对照品和供试品溶液分别点样，分别在5℃ 50%、15℃ 60%、25℃ 30%展开，显色，结果表明，供试品溶液在不同温、湿度条件下层析，斑点清晰，结果稳定。

4、讨论

通过本研究发现，薄层色谱能将鸟不宿饮片与伪品楤木进行鉴别。在薄层色谱条件的考察中，采用不同的展开剂、不同点样量和不同薄层板对实验的影响，最终确定最佳的实验条件为：以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸（7:3:0.3）为展开剂、点样量3~5μl、硅胶G预制薄层板（德国MK）。薄层色谱稳定性考察发现，样品溶液在24h内、温度5℃~25℃、湿度30%~60%条件下层析结果均稳定。

此次研究比较全面地考查了鸟不宿饮片的薄层色谱条件^[6]，所建立的方法具有简便、快速、可靠的特点，为生产企业的质量控制提供了技术依据，同时能够准确地鉴别其伪品，避免临床混用，确保了鸟不宿饮片的安全、有效使用。

参考文献：

[1]《江苏省中药饮片炮制规范（2002版）》[S],2002.江苏：江苏科学技术出版社，476.

[2] 董福轮,季蓓,陈英群.鸟不宿、地锦草降低血糖的临床研究[J]. 四川中医2012,(4):24-25.（缺年份）

[3]李荷.薄层树脂相吸光光度法的建立及其在环境样品分析中的应用研究. Diss. 北京化工大学, 2001.

[4]李雪英,李东庆,白诗缘.薄层研究方法综述[J]. 地球物理学进展, 2014, 05(5):2197-2197.

[5]吕长淮.反相薄层色谱法在药物分析中的应用研究进展[J]. 安徽医药, 2008, 12(009):854-855.

[6]张朝民,黄海欣,张玉洁.含皂苷药材的薄层色谱鉴别试验[J]. 现代中药研究与实践, 2003, 17(006):53-54.