HPLC测定小米辣中天然辣椒碱、二氢辣椒碱的含量

HPLC测定小米辣 中天然辣椒碱、二氢辣椒碱 的含量

吴宗耀，徐立军 ，杨春艳，卓玛草

西藏藏医药大学 ，西藏 拉萨 850000

摘要：目的：建立高效液相色谱法测定藏药小米辣中天然辣椒碱、二氢辣椒碱的含量方法，完善和提高其质量控制。方法：查阅文献，分类进行探讨，并采用高效液相色谱法进行测定。结果：小米辣中天然辣椒碱、二氢辣椒碱，在不同的产地，所含的成分含量不同，天然辣椒碱含量产自林芝的最高，拉萨次之，乃东的最低；二氢辣椒碱含量产自拉萨的最高，林芝次之，乃东最低。结论：拉萨和林芝所产小米辣质量较好，乃东次之。

关键词：小米辣；天然辣椒碱；二氢辣椒碱；HPLC

现代医学研究发现，小米辣含辣椒碱、二氢辣椒碱、辣椒红素等化学成分^[1,2]。为了探讨西藏自治区不同产地小米辣的质量，研究人员分别选取产自林芝、拉萨、乃东的不同批次的小米辣，用高效液相色谱法测定其有效化学成分天然辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。现将实验结果报道如下：

1、试验仪器、试剂与材料

美国Agilent 1260高效液相色谱仪；Sartorius BP121s电子天平；移液枪，规格：1000 μl、200 μl、100 μl，北京虹湖联合化工产品有限公司生产；色谱级甲醇购自美国Fisher公司，水为超纯水，分析级乙腈购自成都市科龙化工试剂厂；天然辣椒碱、二氢辣椒碱对照品均购于北京索莱宝科技有限公司，纯度>98%，符合HPLC含量测定要求。

取本品粉末1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理10min，放冷，加甲醇稀释到刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，即得。

色谱条件：C18柱（250mm×4.6mm,5.0µm），甲醇—水（65:35）为流动相；检测波长为280nm。

三批样品：小米辣（20200512，林芝），（20200610，拉萨）、（20200620，乃东）。

所有样品均置-20°C冰箱中低温保存。

2、色谱条件^[3]

CHICEIDO CAPCELL PAK HPLC C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm, 5 μm)；检测波长为280 nm。柱温：35 ◦C；流速：1.0 mL/min；进样量：50 μL；流动相为水（A）-乙腈（B）；梯度洗脱程序0～20min，40%～70% B；20～30 min，70%～90% B；检测波长280 nm；柱温35 ℃；流速1.0 mL/min；进样量50 μL。

3、对照品溶液的制备

取天然辣椒碱对照品5.021 mg，精密称定，置于5 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。再分别稀释成0.8 mg/ml、0.5 mg/ml、0.2 mg/ml、0.1 mg/ml的天然辣椒碱对照品溶液。

取二氢辣椒碱对照品5.001 mg，精密称定，同法制成对照品溶液。

4、供试品溶液制备

取小米辣（20200610）1.0497 g、（20200620）1.0336 g、（20200512）1.0858 g，精密称定，分别置50 mL具塞锥形瓶中，精密加甲醇 10mL，密塞，精密称重，超声(功率:250 W，频率:99 kHz)30 min，放冷至室温，再精密称重，加甲醇补足减失的重量，过滤后置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，过 0.45 μm 的微孔滤膜，置容量瓶于 -20 ℃冰箱中，储存，备用。

5、标准曲线的制备^[4]

5.1 天然辣椒碱

取1.004 mg/mL的天然辣椒碱对照品溶液，分别精密吸取 3项下的对照品溶液 0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mL，分别置于1 mL 容量瓶中，用甲醇溶液稀释并定容至刻度。分别吸取不同浓度的对照溶液各50 μL，按照 2 项下的色谱条件进样测定，详见表1。

表1 天然辣椒碱线性关系考察

5.2 二氢辣椒碱

取1.004 mg/mL的二氢辣椒碱对照品溶液，分别精密吸取 3项下的对照品 溶 液 0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mL， 分别置于 1 mL 容量瓶中，用甲醇溶液稀释并定溶至刻度后得到不同浓度的辣椒碱对照品溶液。分别吸取不同浓度的对照溶液各50 μL，按照 2 项下的色谱条件进样测定，详见表2。

表2 二氢辣椒碱线性关系考察

6、样品测定

取3批次的小米辣样品，按上述4项下制备各供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下依次测定，记录色谱峰面积，根据标准曲线计算小米辣中天然辣椒碱、二氢辣椒碱的含量。各对照品及3批小米辣溶液的HPLC色谱图见图1。

7、讨论

《晶珠本草》将小米辣收录于下部药物晶钏广论第二编诸药性能各论——第五章树类药物树枝类药物中：小米辣功效如火，提升胃温，治水肿、痔疮，虫病、麻风^[5]。小米辣适合温暖之地生长，林芝、拉萨较暖，故所产小米辣中有效化学成分含量较高，质量较好，乃东海拔较高，气温较低，所产小米辣中有效化学成分含量前两者低，所以，其质量较差。

参考文献：

[1]西藏自治区藏药标准[S]，1992.

[2]阙小峰,黄超群,方志成,司文会.天然辣椒碱提取方法及在食品中应用的研究进展[J].中国调味品,2021,46(09):188-192.

[3]吴帅. 辣椒碱类似物的合成及辣度-结构关系初步研究[D].华侨大学,2020.

[4]高晓燕. 几种天然产物的双水相体系萃取研究[D].中国矿业大学,2019.

[5]王海英,孙楠,孙跃宁.HPLC法对小米辣中辣椒素含量测定的研究[J].中国民族医药杂志,2013,19(07):42-43.

图1 小米辣和混和对照品的HPLC色谱图（1.天然辣椒碱；2.二氢辣椒碱）

基金项目：2019年藏医药区域协同创新中心子项目（编号：2019XTCX001）

作者简介：吴宗耀（1969-），女，汉，河北石家庄人，博士生导师，主任药师，从事藏中药制剂及药理研究