免疫检测方法和技术，你了解多少

免疫检测方法和技术，你了解多少

易亭利

石棉县人民医院   四川雅安 625400

免疫检测技术就是利用免疫之间存在的特异性原理，从而展开检测操作和数据分析的一项技术。随着医疗技术不断的发展，现代医疗技术的不断改革，检测技术和检测方法也变得多种多样，诞生了许多种新的检测技术。

一.免疫检测原理

利用抗原与抗体之间存在的特异性，利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，常见的免疫技术有放射性免疫、酶联免疫、化学发光、电化学发光、纳米磁微粒化学发光。这种技术已经被医学界广泛的运用，在医学界中，使用这项技术能够对各个类别的抗原、抗体进行检测。

1.放射免疫技术原理

使放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。用反应式表示为：*Ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原Ag有相同的免疫活性，两者以竞争性的方式与抗体Ab结合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab复合物,通过复合之后，等待一段反应时间，使其达到动态平衡。

2.酶联免疫技术原理

酶联免疫技术简称ELISA法，该技术原理就是是抗体与酶复合物相结合，给予复合物染色，随后将其检测。利用抗原或者是抗体结合到一种固定的载体表面，是受检物保持本身的免疫活性。使抗原或者是抗体和某一种酶相连接，使其成为酶标抗原或抗体，该酶标抗原或抗体能够充分的保留其本身的免疫活性，同时又保留了酶的活性。在进行测定时，需要把标记后的检测标本与酶标抗原或抗体采取不同的步骤，使其与固相载体表面的抗原或者是抗体产生反应。

使用洗涤的方法，将固相载体上面已经形成的抗原抗体复合物进行分离，使其与其他物质分开，最后将固相载体上面的酶量与标本中的受检物质的量进行结合，使其成为一定的比例。加入酶反应的底物后，底物会被酶催化成为有色的产物，产物的量与标本中受检测物质的量有着直接的关联，因此，可以根据物质颜色反应的深浅来判断其定性或者是定量分析。由于酶的催化频率比较高，因此可以极大的放大酶的反应效果，从而使测定方法达到较高的敏感度，酶联免疫技术可以用在测定抗原，同时也能够将其应用于抗体的测定。

3.化学发光免疫技术原理

利用化学反应释放的自由性，能够激发起中间体，常用于碱性磷酸酶-金刚烷胺、辣根过氧化酶-鲁米诺衍生物、辣根过氧化酶-鲁米诺衍生物，使其从激发状态回归基态。在中间体从激发状态回归到基态时，这个过程会释放出等能级的光子，因此可以对光子进行测定，使其达到定量分析的目的。化学发光具有荧光的特异性，且不需要激发光，有效的避免了荧光分析中的激发光杂散管的影响，从而大幅度的提高了该检测方式的灵敏度，同时规避了进行放射分析时造成的环境污染以及对人体的健康危害，是一种安全、高效的定量分析方法。化学发光免疫分析（CLIA）是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半抗原）都可以用CLIA测定。化学发光免疫分析（CLIA）最早起步于80年代初，该检测技术在90年代迎来了快速发展。

4.电化学发光技术原理

电化学发光（ECL）是电场参与化学发光所产生的结果，是指通过对受检物施加一定的电压，使其进行电化学反应：体系中电极表面的三丙胺TPA释放电子，进而释放质子成为自由基TPA＊，同时，二价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+ 释放电子成为三价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+。具有强氧化性的三价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA＊发生氧化还原反应，结果使三价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 还原成激发态的二价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+，激发态 [Ru(bpy)3]2+衰变并以释放出波长为 620nm 光子的方式释放能量，而成为基态的 [Ru(bpy)3]2+。在该类化学发光的过程后，反应体系中仍存在二价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 和三丙胺TPA，能够使电极的表面的电化学反应过程能够继续的进行，如此一来，整个反应过程可以不断的循环，并且测定的信号能够不断的放大，从而使检测的灵敏度得到大幅度提高，正因如此，使得电化学发光技术原理有着较高灵敏度的特点。

5.磁微粒化学发光免疫技术原理

磁微粒化学发光免疫技术是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法，磁微粒化学发光免疫技术能够充分发挥磁性分离技术的快速以自动化性，使化学发光技术的的高灵敏度性，以及对免疫分析的特异性，使得磁微粒化学发光免疫技术在生物分析的领域中发挥出不可替代的作用。现阶段，磁微粒化学发光免疫技术得到了广泛的应用，在管式化学发光免疫检测项目以及电化学发光免疫检测项目发挥着至关重要的作用。

6.磁珠用于化学发光领域的方法

间接法：包被抗原，然后用酶标记的抗抗体检测样本中抗体，适合于检测对象是自身抗体的情况。该方法相对较方便，只要变换包被抗原就可以检测不同的项目。其缺点则是标本中的特异性抗体会竞争性的结合抗原，使结果出现假阴性。

捕获法：血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定，因此测定IgM抗体多用捕获法。

固相抗原竞争法：指受检抗体和酶标抗体竞争性的与磁珠表面抗原结合。结合于固相载体的酶标抗体与受检抗体的量呈反比。若受检样本中无抗体，酶标抗体能够顺利与抗原结合，出现强信号。若受检样本中有抗体，则竞争性的占去了酶标抗体与抗原的结合，酶标抗体的结合力减弱，信号强度减弱。

二、免疫检测技术的应用

1.诊断疾病

利用免疫血清检测的方法，能够对人或者是动物的相关疾病进行准确的诊断，这种检测途径是免疫技术中给予人类最为突出的一项实用的应用。尤其是用酶标抗体检测技术，这种技术已经成为医院诊断传染性疾病的主要诊断手段，该检测疾病的方法操作简单、检测结果快速，能够在疾病的诊断中大幅度的节约医务人员以及患者的时间。

2.发病机理的相关研究

传染病发病迅速治疗难度较大，但传染病是从机体的特定部位进行感染，并且在特定组织细胞内进行繁殖，从而引发患者的发病。 使用传统的检测方法很难寻找出传染病的机理，使用荧光抗体感染进行检测，能够在细胞的水平上确定传染病发病等病原微生物的细胞，不仅如此，还能够研究自身免疫疾病的发病机理，例如免疫复合物沉积的部位和分析，为后续的专项治疗提供有力的参考依据。