Characterization of a Novel Anti-DR5 Monoclonal Antibody WD1 with the Potential to Induce Tumor Cell Apoptosis

(整期优先)网络出版时间:2008-01-11
/ 1
TNF相关的导致apoptosisligand(小道)是能够导致apoptosis的一个TNF家庭成员。(医生5)死亡受体5是小道的关键受体并且在导致小道的apoptosis起一个重要作用。对DR5准备monoclonal抗体(mAbs),编码可溶的DR5(sDR5)的cDNA是第一与特定的教材由反向的transcriptase聚合酶链反应(RT-PCR)放大了,然后插入了到原核生物的表示向量pET-30a。recombinantplasmid在Escherichiacoli紧张BL21(DE3)被表示,并且sDR5被镍亲密关系层析净化。作为抗原,sDR5被用来使老鼠免疫。对sDR5的Hybridomassecreting抗体被识别。一积极克隆被选择生产抗体,WD1。ELISA和immunofluorescence证明WD1能在Jurkat和Molt-4房间上绑recombinantsDR5和membraneboundDR5(mDR5)。ATPLite试金证明Jurkat和Molt-4房间对以一种剂量依赖者方式的抗体敏感。AnnexinV/PI试金和Giemsa正在染色显示出的两个那WD1能高效地导致Jurkat房间apoptosis。293T房间和间接immunofluorescence试金的短暂transfection表明了那mAb(WD1)不能有DR4的跨react。我们的调查结果显示新奇抗体,WD1能充当直接收缩筋,表示特性地绑DR5,并且开始有效apoptotic发信号和肿瘤回归。因此,WD1将是潜在的癌症治疗学的一个领先的候选人。