医学分子实验室污染原因分析及应对措施

医学分子实验室污染原因分析及应对措施

郝晓燕

包头市第八医院检验科 014000

摘要：探讨医学分子生物实验室污染的原因分析和应对医学分子生物实验室污染的防控和消除措施。

方法：医学分子生物实验室污染发生后，针对实验室进行环境监测，查找污染源，针对污染源进行清除，并对实验室操作人员定期培训和考核。

结论：针对医学分子生物实验室污染进行原因分析，并采取相应措施清除污染。平时注重预防医学分子实验室污染。

关键词：医学分子生物实验室；PCR;污染；原因分析；应对措施

Cause analysis and Countermeasures of pollution in medical molecular laboratory

Abstract: To explore the causes of pollution in medical molecular biology laboratory and the prevention, control and elimination measures of pollution in medical molecular biology laboratory.

Key words:Medical Molecular Biology Laboratory; PCR; Pollution; Cause analysis; Countermeasures

医学分子生物技术近些年来发展迅速，为检验医学领域发展较迅速的一门学科，特别是以聚合酶链反应（PCR)为主要检测方法发展和应用较为成熟。聚合酶联反应（PCR）是美国化学家Kary Mullis于1983年发明的[1]。它用于对靶核苷酸进行体外扩增，数倍的增加，有着非常高的灵敏度和较高的特异性，从20世纪90年代中后期在国内医学实验室开始被应用开，已经在临床医学检验方面发挥着越来越大的作用。但是由于其敏感性极高，微量的污染将造成实验失败，尤其实验过程中涉及阳性质粒或行RT-PCR操作时更易污染[2].截止目前在医院检验科中开设分子实验室的数量越来越多，甚至基层实验室也都开始进行医学分子实验室的建设，数量越来越多的分子实验室，同时面临的实验室污染现象也有所增加，一旦实验室污染出现，可能会造成假阳性结果，导致结果不可信，正常的工作程序就会被迫打断。针对PCR实验室污染原因分析和应对措施就显得尤为重要。当然PCR实验室防污染最好的办法就是预防。

1. PCR实验室污染原因分析

   1. PCR实验室污染最常见原因是PCR扩增产物污染.1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术。由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR 相比，融合了PCR高灵敏性，DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量等优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化，以获得特定区段扩增产物定量的结果[3].荧光定量PCR法通过几十个循环就可以将目标核酸片段进行指数级扩增，一旦有阳性标本在扩增时爆管、或者扩增结束后由于操作人员失误，误打开扩增管（带有阳性标本的反应管）将会导致气溶胶所致的实验室污染。部分实验人员扩增结束后，急于进行下一波扩增，未等反应管降温，直接取出反映管，由于刚刚扩增结束，温度较高，在拿去反应管时容易导致管盖奔开导致实验室气溶胶污染。

   2. 实验室操作中不规范行为。标本接收后首先需要核对数量，此时应在生物安全柜内进行数量核对，个别实验室(硬件不合格）或者实验人员为了简单的追求速度，未在生物安全柜内核对标本，这样就容易造成带有阳性病毒的标本污染实验室。PCR实验中，要使用震荡仪、离心机等操作，操作时如反应管未盖紧，则可能造成气溶胶扩散，从而导致实验室污染。

   3. PCR实验室物品流向和空气流向混乱。PCR 实验室分为试剂准备区，样品制备区，扩增区，产物分析区（部分基层实验室扩增区和产物分析区合为一区），其污染程度依次增大。各实验区标识不明确，各区物品混用，如加样枪、吸头、放置反应管的底座等，特别是记号笔，同时各实验区擦拭抹布、墩布都要做好标记，不得混用。各实验区实验人员有聚集现象，进出各实验区未更换手套、鞋套等。实验人员未按实验室内空气流向走动，实验室人员通行混乱，极易导致污染扩大。

   4. 尘埃分子等小颗粒物质会对荧光反射有一定的影响。最好应避免在尘埃数较高的实验室内进行实验。

2. 针对新冠病毒核酸检测实验室污染采取以下应对措施

2.1加强操作人员医学分子生物学理论知识学习，和实际工作中操作的规范培训。从人员根本意识上下功夫，让操作人员意识到位，加强学习、培训实验过程中严格按照操作流程进行。

2.2实验室各分区要相互独立，实验室各区物品要单独使用，不得混用，各区制备的试剂或者反应模板要通过传递窗进行传递。每次在样本制备区使用完加样枪（最好是带滤芯的枪头）后要用75%酒精棉球进行擦拭，先擦枪身，最后擦拭加载吸头处，然后将加样量调制加样枪允许最大量，归回原位。实验过程中禁止人员乱窜，大声喧哗，同时要做好个人防护。

2.3实验室负责人要合理安排人员和值班制度，同时合理购置试剂。要防止污染处理不规范、检验人员自我防护措施不严、日常消毒灭菌不能坚持、人员通行混乱、工作记录不全、实验方法未按SOP文件程序操作、质量控制未按要求执行等等[4]。

2.4每次实验结束后要用巴氏擦拭台面并用紫外线灯进行照射实验垃圾及时进行高压灭菌，此时注意扩增后八连管无需高压灭菌，需用高浓度巴氏浸泡后处理。

2.5定期对医学分子实验室进行环境监测，将实验室污染问题尽早发现，及时处理。

2.6一旦发现医学分子实验室污染要及早排查和发现污染源，进行彻底消杀，紫外线照射、通风、也可使用现在厂家配制的核酸清除剂。

2.7做好室内质量控制和室间质量控制把控好质量。

通过以上对医学分子实验室污染原因分析和应对措施，希望对实际工作中有所指导，防止医学分子实验室污染，为更好的保证实验结果的准确性提供依据。

参考文献：

[1]李金明.实时荧光PCR技术[M].北京:人民军医出版社，2007:1

[2]蒋会勇.PCR试验加样过程中无DNA原则控制污染的探讨[J].诊断病理学杂志，2005,12（1）：45-48

[3]陈旭，齐凤坤，康立功，等.实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用（J）.东北农业大学学报,2010,41（8）：148-149.

[4]张伟民，王伯昌，夏晓华.82所临床基因扩增实验室复审结果和现状分析.浙江检验医学，2006,4(30):19-20