羊小反刍兽疫免疫控制实践

羊小反刍兽疫免疫控制实践

姚邦 谭勋

浙江大学动物科学学院 浙江杭州 310058

摘要：通过羊群强制免疫、抗体监测和流通监管等手段，切断病原在流通环节传入，同时确保羊群始终处于免疫保护状态，可有效控制该病的传入和流行。结果显示，通过常年免疫和大规模监测，羊群PPR抗体合格率可保持在90%以上，群体合格率可保持90%以上，且未出现PPR病原流行。

关键词：羊；小反刍兽疫；免疫

小反刍兽疫（peste des petits ruminants, PPR），也称羊瘟，是由小反刍动物麻疹病毒（small ruminant morbillivirus, SRMV) 引起的一种严重危害山羊、绵羊等小反刍兽的跨境传染性疾病,在非洲，中东和亚洲许多国家/地区爆发流行^[1,2,3]。据估计，PPR每年在全球造成的经济损伤高达21亿美元^[4]。PPR于2007年传入我国，2013年起在新疆、甘肃、宁夏、内蒙古相继暴发，并逐步向内陆省市区扩散^[5]。

SRMV是副黏病毒科麻疹病毒的一员，是一种多形囊膜病毒，带有长度可变的负链RNA基因组，长度为15927-16058个核苷酸。基因组按3'-NP/C/VMF-HN-L-5'的顺序编码六个结构蛋白和两个非结构蛋白。基于N基因（255 bp）或F基因（322bp）的核苷酸序列，可将SRMV分为4个基因系，但只有一个血清型^[6]。I系和II系病毒主要分布于西非国家，III系病毒仅限于中东和东非国家流行，IV系病毒则主要流行于亚洲和非洲^[7].

PPR以口腔溃疡、脓性鼻液及出血性胃肠炎和肺炎为特征。山羊发病率和死亡率高，均可高达100%；绵羊可呈现亚临床感染，从而引起远距离或跨境传播^[8]。鉴于PPR的严重危害，我国农业农村部将其列为一类烈性传染病,必须进行强制免疫。为防控PPR,台州市于2016开始在全市范围内开展PPR免疫接种，现将免疫方法及结果报告如下，以供同行们参考借鉴。

1. 材料和方法

1.1 羊群PPR流行病学调查

通过调查问卷、实地查看等方法调查本市内羊群分布、养殖数量、规模化程度和PPR流行等情况。

1.2 材料

1.2.1 疫苗 小反刍兽疫活疫苗（Clone9株）购自天康生物股份有限公司。 1.2.2 试剂 SMRV ELISA抗体检测试剂盒、病毒荧光RT-PCR检测试剂盒、病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（50T）均购自青岛立见诊断技术研发中心。

1.2.3 仪器 酶标仪（美国伯乐BIO-RAD M680），荧光定量PCR仪（Light Cycler 480 Ⅱ），生化培养箱（SPX-158），酶标自动洗板机（DEM-III）。

1.3 免疫接种

1.3.1 接种方法和剂量 采用颈部皮下注射方法接种。按瓶签注明头份，用生理盐水稀释至1头份/ml，免疫接种剂量为1ml/头。

1.3.2 接种群体和程序 对辖区内所有羊群实施强制免疫。2016年4月开始，对所有羊群集中免疫一次。2017年开始，新生羔羊、新补栏或超过免疫期（2-3年）的羊只免疫一次。散养羊实行春秋两季集中免疫，规模羊场按程序免疫进行。

1.4 采样规则

1.4.1 采样时间、范围和数量 每年6月对辖区内规模羊场和散养户实施采样，采集点不少于20个。不足20个采集点时，对全部场点进行采样。每个场点采集35份血样和35组眼鼻拭子，数量低于35只羊的场点实行全群采样。

1.4.2 血样采集 采用前腔静脉采血法，使用9# 5ml兽用一次性采血盛血器采集血液5ml。

1.4.3 眼鼻拭子采集 分别采集眼结膜和鼻粘膜拭子各一个，保存于1.5ml盛有0.01mol/L pH7.4磷酸缓冲盐的无菌离心管中。

1.4.4 样品处理和保存 样品于冷藏状态下送实验室。血液样品经离心后，收集血清保存于-20℃医用冰箱备用，拭子样品保存于-70℃医用冰箱。

1.5 抗体监测

采用ELISA法检测血清样品中的SMRV抗体，操作步骤严格按试剂盒说明书进行。所用反应板为96孔标准PPRV抗原包被板。阴性、阳性对照和稀释液均做2个重复。阴、阳性对照品加样50ul，稀释液加样50ul，其余孔加25ul稀释液和25ul血清样品。检测完成后用450mm波长测定OD值。

1.6 抗原检测

将拭子样品恢复至室温，用病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒提取核酸，具体操作按试剂盒说明书进行）。采用荧光定量PCR试剂盒检测SMRV核酸，PCR扩增条件均按说明书进行。

2. 结果

2.1 台州市养殖情况

从2016-2020年全市养殖情况来看（表1），全市羊养殖规模从数量到规模化均以500头以下养殖场户为主，出栏占比总体呈下降趋势，但500头以上规模场数量变化不大。到2020年底全市年出栏3000头以上的养殖场2家。总体养殖量呈下架趋势，主要原因为散养户养殖数量不断减少。

表1 台州养殖情况统计表（单位：万只）

2.2免疫预防效果

2.2.1 免疫情况 全市2016年-2020年小反刍兽疫免疫情况见表2。2016年为强制免疫首个年份，受到疫苗采购预算及供应影响，总体免疫数量相对其他年份较少，但2017年免疫数量多于其他年份，将2016年应免未免羊只全部免疫。总体来说，全市羊只处于免疫保护状态。

表2 台州免疫情况统计表

2.2.2 监测效果 羊小反刍兽疫抗体、病毒检测数量和结果见表3。从监测效果来看，5年内未检出病原阳性。2016年免疫效果相对较低与全群初次免疫未全面覆盖有关，自2017年起全群免疫基本全覆盖，免疫效果均在90%以上。

3. 讨论与分析

目前PPR还没有有效治疗措施，需要通过免疫、监测和流通监管等手段来控制该病的传播与发生^[9]。本市地处浙江省沿海中部，东濒东海，其余边界被省内其他地市包围，饮食以海鲜、猪肉和蔬菜为主，羊肉需求量较少，未设立羊只及其产品专业交易市场，省外调入产品以冷鲜肉为主，本地羊主要为县内自行消纳，且外省羊的调入检查由省内其他地市的检查站完成，这些条件为本市内PPR免疫防控的成功提供了保障。

连续5年的抗体和病原监测结果表明台州市PPR免疫控制取得了较好的成效经连续两年的疫苗免疫后，羊群SRMV抗体水平合格率达到90%以上，高于其他地区抗体合格率合格率^[10]，可能与本地散养为主，实施春秋两季集中免疫，且散养羊群多次免疫有关。从监测的626个场点来看，2017年后，群体合格的场点数在90%以上，说明连续免疫对羊群的保护率有明显的提升。对9805份样品进行病原检测，也未发现PPRV在本地区流行，说明群体免疫、经常性监测和严格调运管理对该病的控制有良好的效果。

参考文献：

[1] Banyard AC, Parida S, Batten C, et al. Global distribution of peste des petits ruminants virus and prospects for improved diagnosis and control. J Gen Virol, 2010, 91(12): 2885–2897.

[2]Shabbir MZ, Ul-Rahman A, Zahid MN et al. Genetic characterization of small ruminant morbillivirus from recently emerging wave of outbreaks in Pakistan. Transbound Emerg Dis,2018, 65(6): 2032-2038.

[3]Elhaig MM, Selim A, Mandour AS et al.Prevalence and molecular characterization of peste des petits ruminants virus from Ismailia and Suez, Northeastern Egypt, 2014–2016. Small Ruminant Res,2018,169:94–98.

[4] Jones BA, Rich KM, Mariner JC, et al. The economic impact of eradicating peste des petits ruminants: a benefit-cost analysis.  PLoS One , 2016, 11(2): e0149982.

[5]陈春艳，王冬鸣.试论小反刍兽疫疫情的防控策略[J].中国动物保健.2018.20（06）:31-32.

[6]Dhar P, Sreenvasa BP, Barrett T, et al. Recent epidemiology of peste des petits ruminants virus（PPRV）. Vet Microbiol, 2002, 88（2）：153-159.

[7]Munir M, Parthiban A, Parthiban AR, et al. Molecular evolution of peste des petits ruminants virus. Emerg Infect Dis, 2014, 20(12), 2023.

[8] Schulz C, Fast C, Schlottau C, et al. Neglected Hosts of Small Ruminant Morbillivirus. Emerg Infect Dis. 2018, 24(12):2334-2337.

[9]刘 丹，周广青，吴锦艳，等.小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其阻断化学发光抗体检测方法的建立[J].中国兽医科学.2021.51（04）:421-428.

[10]李 军，黄佐兴，李 伟,等.新疆生产建设兵团第十师羊小反刍兽疫抗体监测与评价[J].草食家畜.2021.207(02):31-36.

作者简介：姚邦 男 1983.11出生，高级兽医师，长期从事动物疫病防控工作

通讯作者：谭勋，副教授，从事动物疾病预防控制工作。邮箱：tanxun@zju.edu.cn