P53、GPX1在骨巨细胞瘤中表达的意义

P53、 GPX1在骨巨细胞瘤中表达的意义

高磊 1 李晓梅 2 秦书明 3 万志丹 4 叶红 通讯

山东省泰安市中心医院 病理科 271000

山东省泰安市中心医院 脊柱外科 271000

摘要 目的 通过检测P53和GPX1在骨巨细胞瘤（GCTB）组织中的表达，探讨它们的表达与临床病理特征的关系，及两者的相关性。方法 收集52例存档GCTB蜡块标本，用免疫组织化学S-P法检测P53和GPX1在GCTB组织中的表达。结果 （1）P53阳性表达率为38%，GPX1阳性表达率为52%；（2）P53及GPX1在GCTB中的表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤发生部位均无关，而与肿瘤病理分级及复发有关；（3）P53与GCTB的表达存在正相关性（P<0.05）。

结论 P53和GPX1在骨巨细胞瘤的进展过程中可能具有协同作用，联合检测P53和GPX1在骨巨细胞瘤组织中的表达，有望成为预测肿瘤的生物学行为和预后的有效分子标志物。

关键词 P53，GPX1，骨巨细胞瘤，免疫组织化学

骨巨细胞瘤(GCTB)约占原发性骨肿瘤的5% ~ 6%，常发生于长骨干骺端，[1,2]，通常具有局部侵袭性，传统的组织形态学及影像学并不能很好的预测GCTB的生物学行为及预后，因此如何准确预测GCTB的生物学行为，成为临床关注的热点问题。本研究探讨P53、GPX1在GCTB组织中的表达，分析其与患者临床病理特征及预后的相关性，以期为GCTB的诊断与治疗提供临床依据。

1. 材料与方法

   1. 临床资料

收集泰安市中心医院2011年1月-2019年12月收治的具有完整临床病理资料的GCTB病例50例，其中性别：男性21例，女性29例；年龄19-65岁，中位年龄35.5岁；发生部位：胫骨18例，股骨14例，尺骨10例，其他部位8例；肿瘤大小：≥5cm 19例，肿瘤<5cm 31例；病理分级：Ⅰ级24例，Ⅱ级16例，Ⅲ级10例；是否复发：复发病例12例，非复发病例38例。

1. 2. 实验方法

免疫组化染色采用S-P法，采用全自动免疫组化染色仪（(Roche, Basel,Switzerland)）进行染色，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。一抗P53（即用型）购自北京中杉金桥公司，GPX1购自Abcam公司，稀释度1:50。阳性对照按说明书设置，PBS代替一抗作阴性对照。

1. 3. 结果判读

P53阳性定位于细胞核，以细胞核出现黄色或棕黄色颗粒为P53表达阳性细胞，参照Carlos等[3]的方法判读：阳性染色细胞数>20%判读为阳性；GPX1阳性定位于细胞浆和细胞核，以细胞核和／或细胞浆出现黄色或棕黄色颗粒判为GPX1阳性细胞，参照Amalia等[4]的方法进行判读：>25%细胞阳性判读为阳性。

1. 4. 统计学处理

采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，组间比较采用X²检验，相关性分析采用 Spearman 相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义 。

2. 结果

   1. P53、GPX1在GCTB组织中的表达

50例GCTBZ中P53阳性主要位于多核细胞的细胞核，少数单核细胞也可阳性，阳性表达率为38%（19/50），GPX1在单核细胞细胞浆中呈现棕黄色颗粒，少量多核细胞也可阳性，阳性表达率为52%（26/50）。见图1、图2，表1。

图1 A：P53阳性主要位于多核细胞的细胞核，少数单核细胞也可阳性；B：GPX1在单核细胞细胞浆中呈现棕黄色颗粒，少量多核细胞也可阳性

表1 P53、GPX1在GCTB组织中的表达

1. 2. P53、GPX1表达与GCTB临床病理参数的关系

P53及GPX1在GCTB中的表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤发生部位均无关，差异无统计学意义（P>0.05），而与肿瘤病理分级及复发有关，在病理分级Ⅲ级的病例中的阳性表达率明显高于病理分级Ⅰ级和Ⅱ级的病例，复发病例中的阳性表达率明显高于非复发病例，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 P53、GPX1表达与GCTB临床病理参数的关系

1. 3. P53与GPX1在GCTB中表达的相关性

经Spearman 相关分析显示，P53与GCTB的表达存在正相关性（P<0.05）。见表3。

表3 P53与GPX1在GCTB中表达的相关性

3. 讨论

2020年第5版WHO骨肿瘤病理定义骨巨细胞瘤为一种具有局部侵袭性的低度恶性的肿瘤，少数可转移，极少数可转化为恶性。3%-7%的病理组织形态学表现为良性的GCTB可发生肺转移，甚至最终导致患者死亡，说明传统组织形态学并不能很好的预测GCTB的生物学行为及预后[5]。

P53是最著名的抑癌基因，P53 过表达与许多癌症及骨和软组织肉瘤有关，并且与癌症和肉瘤的不良预后有关[6]。Lujic等对对于 GCTB 复发的发生率进行单变量 logistic回归分析显示单核细胞核 P53 表达是具有高度统计意义的参数： 多元logistic回归提示 P53 在单核细胞中的表达是最重要的预测因素[7]。Papanastassiou等在多变量分析/亚组分析中，发现P53突变与GCTB局部复发具有很强的相关性，从而认为骨巨细胞瘤中的 P53 突变可用于预测肿瘤行为[8]。我们的免疫组化结果显示P53在GCTB组织中的阳性表达率为38%，P53的表达与肿瘤病理分级及复发有关，在病理分级Ⅲ级的病例中的阳性表达率明显高于病理分级Ⅰ级和Ⅱ级的病例，复发病例中的阳性表达率明显高于非复发病例，差异具有统计学意义（P<0.05），提示P53在GCTB的进展过程中发挥作用，可能有望成为预测GCTB生物学行为的标记物，研究结果与文献报道一致。

GPX-1 是一种抗氧化酶，参与氧化还原信号的传导，与多种癌症的发病机制有关 Cheng等[9]研究证实GPX1在肾癌中高表达，并与患者生存期短、肿瘤远处转移、淋巴结转移及高临床分期有关。我们的研究显示在GCTB组织中GPX1的阳性表达率为52%，且在病理分级Ⅲ级的病例中的阳性表达率明显高于病理分级Ⅰ级和Ⅱ级的病例，复发病例中的阳性表达率明显高于非复发病例，差异具有统计学意义（P<0.05）。 研究已证实GPX-1可以通过GPX-1启动子内的位点结合P53，从而被野生型P53反转录激活；也可以被不依赖于GPX-1启动子结合的P53突变体激活[10]。我们的研究显示在GCTB中，P53的表达与GPX1的表达呈正相关，推测GPX-1 可能通过 P53在GCTB中的积累而被激活。

综上所述，P53和GPX1在骨巨细胞瘤的表达与肿瘤的病理分期及复发有关，两者的表达具有相关性，其在骨巨细胞瘤的进展过程中可能具有协同作用，联合检测P53和GPX1在骨巨细胞瘤组织中的表达，有望成为预测肿瘤的生物学行为和预后的有效分子标志物。

参考文献

[1] Lo´pez-Pousa A, Martı´n Broto J, Garrido T, et al. Giant cell tumour of bone: new treatments in development[J]. Clin Transl Oncol. 2015;17(6):419-430.

[2] Guo W, Ji T, Tang X, Yang Y, et al. Outcome of conservative surgery for giant cell

tumor of the sacrum[J]. Spine. 2009;34(10):1025-1031.

[3] Carlos CC, Esther T, MariIa D, et al. Molecular abnormalities of mdm2 and p53 genes in adult soft tissue sarcomas[J]. Cancer Res.1994;54(3):794-799.

[4] Conti A, Rodriguez GC, Chiechi A, et al. Identification of potential biomarkers for giant cell tumor of bone using comparative proteomics analysis[J]. Am J Pathol. 2011; 178(1):88-97.

[5] Alberghini M, Kliskey K, Krenacs T, et al. Morphological and immunophenotypic features of primary and metastatic giant cell tumour of bone[J]. Virchows Arch. 2010; 456(1): 97-103.

[6] Kaur RP, Vasudeva K, Kumar R, et al. Role of p53 Gene in Breast Cancer: Focus on Mutation Spectrum and Therapeutic Strategies[J]. Curr Pharm Des. 2018; 24(30): 3566-3575.

[7] Lujic N, Sopta J, Kovacevic R, et al. Recurrence of giant cell tumour of bone: role of p53, cyclin D1, beta-catenin and Ki67[J]. Int Orthop. 2016 ;40(11):2393-2399.

[8] Papanastassiou I, Ioannou M, Papagelopoulos PJ, et al. P53 expression as a prognostic marker in giant cell tumor of bone: a pilot study[J]. Orthopedics. 2010; 12; 33(5).

[9] Cheng YB, Xu TB, Li S, et al. GPX1, a biomarker for the diagnosis and prognosis of kidney cancer, promotes the progression of kidney cancer[J]. Aging (Albany NY). 2019; 16;11(24):12165-12176.

[10] Gouazè V, Mirault ME, Carpentier S, et al. Glutathione peroxidase-1 overexpression prevents ceramide production and partially inhibits apoptosis in doxorubicin-treated human breast carcinoma cells[J]. Mol Pharmacol. 2001; 60(3):488–496.