高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量分析

高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量分析

陆超毅

云浮市食品药品检验所 广东省云浮市 527300

【摘 要】目的：分析高效液相色谱法对盐酸溴已新片含量进行测定的结果。方法：色谱柱：Kroma-sil C18（250mmx4.6mm，5μm）；流动相：醋酸溶液（取冰醋酸50ml加水930ml，用三乙胺将pH值调节至3.4，甲醇30:70）；流速：1.0ml·min-1；柱温度在4-℃；进样量：20μL；检测波长为254nm。结果：盐酸溴已新在10~80μg/ml范围可与峰面积形成良好的线性关系。回归方程A=2164C-48.72，r=0.9998。平均回收率为99.47%（n=8）。结论：高效液相色谱法具有快速、准确、简便、专属性强等优势。

【关键词】高效液相色谱法；盐酸溴已新；流动相

盐酸溴已新属于黏液调节剂，多数运用于支气管黏膜腺体中，令其黏液产生细胞分泌，并继而分泌出黏滞较低的小分子黏蛋白，帮助支气管分泌流变学特性恢复正常，减低黏液分泌量，加快痰液稀释速度，便于排出^[1-2]。2005版中国药典中记载，分别应用非水溶液滴定法与紫外分光光度法对盐酸溴已新原料与片剂含量进行测定^[3]。而近年随测定方式的进步与发展，高效液相色谱法被广泛应用，为印证该测定方式的实用性，本次旨在分析高效液相色谱法在测定盐酸溴已新片的含量的有效性，现将结果汇总如下。

1 仪器与试药

Agilent HP 1100高效液相色谱仪（自动进样器，紫外检测器，四元泵）。

盐酸溴已新对照品（100427-200301，中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；三乙胺、冰醋酸为国产分析纯；盐酸溴已新、盐酸溴已新片均为上海华氏制药有限公司天平制药厂生产。

2 方法学考察

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kroma-sil C18（250mmx4.6mm，5μm）；流动相：醋酸溶液（取冰醋酸50ml加水930ml，用三乙胺将pH值调节至3.4-甲醇30:70）；流速：1.0ml·min-1；柱温度在4-℃；进样量：20μL；检测波长为254nm。理论板数按照盐酸溴已新色谱冯计算应不低于2000。

2.2 溶液制备

取样品20片，精密进行称定，研细，称取所用剂量，置入100ml的量瓶中，加入流动相适量，摇晃直到溶解，之后加入流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即可获得试品溶液。精密称取盐酸溴已新对照品适量，加入流动相溶解并定量制成每1ml中约含盐酸溴已新40μg的溶液，作为对照品溶液。依据处方量不加盐酸溴已新，按照供试品溶液的制备方法进行操作，制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

空白对照试验：应用高效液相色谱法测定供试品溶液、对照品溶液与阴性样品溶液，经检验得出，样品中存在辅料不会对盐酸溴已新形成干扰。

线性关系考察：精密称取盐酸溴已新对照品的适用剂量，加入流动相进行溶解并稀释成每1ml中含100μg的溶液，精密取量为1.0,2.0,4.0,6.0,8.0ml，并将其分别置于10ml的量瓶中，加入流动相稀释至刻度，适度摇匀，制成色谱图。以质量浓度列为横坐标、峰面积列为纵坐标，实施线性回归，得回归方程A=2164C-48.72，r=0.9998。结果显示，盐酸溴已新质量浓度区间在10~80μg/ml范围可与峰面积形成良好的线性关系。

精密度试验：取对照品溶液，重复进样5次，依据顺次进行测定，结果得出：RSD=0.48%（n=8）。

稳定性试验：取对照品溶液，于0,2,4,12,24h时间分别进样进行测定。结果得出：RSD=0.76%，表明溶液在24h内可达到稳定状态。

重复性试验：取同一批样品，按照顺序重复测定，次数为5次，结果得出：RSD=0.58%（n=8）。表明方法重现性十分良好。

回收率试验：采用加样回收法，精密量取已知含量（19.35μg/ml）的样品8份，加入盐酸已新对照品，用上述方法与外标法进行测定与计算，详细结果见表1.

表1：盐酸已新加样回收试验结果（n=8）

3 样品测定

3.1 测定原料含量

取盐酸溴已新原料40mg，置于50ml的量瓶中，加入适量流动相进行溶解，稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10ml，置于100ml的量瓶中，加入适量流动相稀释至刻度，摇匀，吸取20μL注入液相色谱仪，对色谱图进行记录。另取盐酸溴已新对照品适量，应用流动相制成每1ml含80μg的溶液，同样方法进行测定，按照外标法对峰面积进行计算，同时用非水溶液滴定法对其含量进行测定，结果见表2.

3.2 测定片剂含量

取盐酸溴已新片20片，精密度进行称定，研细，精密度称取适量，按照原料含量测定下方法测定，同时使用紫外分光光度法对其含量进行测定，结果见表2.

表2：含量测定结果（%）

3.3 定测样品含量

高效液相色谱法UA法测出结果进行比较，结果见表3.

表3：样品含量测定结果

4 讨论

高效液相色谱法有北城高压液相色谱、高速液相色谱、近代柱色谱等。高效液相色谱属于色谱法中的重要分支，将液体作为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂等流动相泵入装有固定相的色谱柱中，在柱内各类成分被分离后，进入检测仪器实施检测，以便实现对试验的分析。该方式在医学、化学、农学、法检等学科中均有广泛应用。除此外，高效液相色谱中的色谱柱可在实验中反复使用，且还具有样品可不被破坏、易回收等优势。但也存在一定缺点，在进样到检测器之间，除去柱子以外的任何死空间，例如连接管、侧池等，若流动相流型发生变化，被分离物质的认可扩散、滞留都会价款色谱峰，同时降低柱效率。

UA法对盐酸溴已新的含量进行测定，存在专属性不强的缺点，而HPLC法专属性较强，结果准确，稳定性强，可弥补UA法劣势，可对盐酸溴已新片的质量进行控制^[4]。同时采用HPLC法可较好分离杂质与样品主成分，并由观察斑点对结果进行判断，以及将其转变为具体的峰面积进行定量，提高结果的准确可靠性。

参考文献：

1. 胡烁彬,匡平平.盐酸溴己新片联合噻托溴铵治疗慢阻肺稳定期患者的临床效果及对其血清MPO、IL-4水平的影响[J].临床医学工程,2021,28(8):1083-1084.

2. 李文东,王成刚,吴科春,刘海涛,王俊秋.国产盐酸溴己新片与原研制剂质量比对研究[J].中国药事,2016,30(1):76-83.

[3]蔡锦雄,江坤,庞发根,刘敏,李玉兰,王铁杰.HPLC法同时测定复方氨酚美沙糖浆中5种主成分的含量[J].海峡药学,2022,34(1):67-70.

[4]邱科先,刘晓芬.HPLC法测定含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊有关物质[J].中国处方药,2022,20(2):35-40.