新型冠状病毒实验室核酸检测方法及实践

新型冠状病毒实验室核酸检测方法及实践

汪鹏

红安县疾病预防控制中心 湖北 黄冈 438400

【摘要】目的：探讨观察新型冠状病毒实验室核酸检测方法及实践效果。方法：2021年1月到2022年12月，选取医院发热门诊收治的4587例发热患者为研究对象，患者均进行新冠肺炎筛查，提供相应咽拭子，并采用实时荧光定量PCR技术进行检测，获取检测结果并分析。结果：4587例发热患者中，阳性率及阴性率分别是0.46％、99.54％。结论：实时荧光定量PCR技术可在新型冠状病毒实验室核酸检测中发挥显著作用，及时筛查出阳性患者，指导患者早期进行有效治疗，预防疾病进一步发展。

关键词：新型冠状病毒；实验室核酸检测；实时荧光定量PCR技术；发热；阳性；阴性

自新型冠状病毒首次问世至现在，新型冠状病毒依然未得到有效控制，依然处于大肆传播状态。我国统计学数据^[1]显示，累计至2022年3月31日，共有458539人确诊新型冠状病毒肺炎，其中治愈175119人，死亡13197人。Worldometer实时统计数据^[2]显示，累计至北京时间2022年1月14日6时30分，共有320295172人确诊新型冠状病毒肺炎，其中死亡5537500人。核酸是筛查出新型冠状病毒肺炎患者的有效方法，灵敏度高，假阴性率低，相较于抗体检测等方法，其检测灵敏度以及特异度明显更好。各国在核酸检测时，均通过口咽拭子、鼻咽拭子采集样本，之后进行实验室检测，筛查患病患者。实时荧光定量PCR技术是实验室检测主要应用的方法，本文主要分析该检测技术在新型冠状病毒检测中的应用价值，报道内容如下。

1.资料与方法

1.1临床资料

以门诊发热患者为对象，选取4587例进行此次研究，患者于2021年1月-2022年12月入院。其中男性有2531例，女性有2056例；最小年龄19岁，最大年龄80岁，平均年龄（44.72±13.18）岁。纳入标准：（1）患者均因发热就诊发热门诊；（2）患者均配合医生提供咽拭子。排除标准：（1）患者有核酸阳性检出史；（2）患者存在精神障碍或认知障碍。

1.2方法

1.2.1仪器设备

由湖南圣湘生物科技有限公司提供的核酸提取试剂盒、新型冠状病毒核酸检测试剂盒；检测仪器是罗氏 cobas z480 荧光定量 PCR 仪、安捷伦 MX3000P 荧光定量 PCR 仪。

1.2.2检测流程

患者入院且确定发热后进行采样，由本院发热门诊完成生物安全培训且考核合格、穿戴三级防护衣物的医生进行采样工作，均采集患者的口咽拭子。若患者多次检测结果均为阳性或是高度疑似患者，还需安排临床医师采集患者的鼻咽拭子、肛拭子、痰液拭子、肺泡灌洗液等标本进行检测。样本采集完毕后，将其置入耐冷冻、携带旋盖有垫圈的病毒保存管中，拧紧保存管，在保存管中粘贴相应的条形码。在样本管喷洒浓度是75％的酒精，有效消毒后将其置入密封袋中，每袋只能装一份样本。收集样本后将其竖放在样本运送盒中，将盒子盖紧，置入运输箱中运输，在运输箱标识新冠肺炎检测。经生物安全培训且考核合格专人进行运输工作，将样本送入实验室中。接收人员必须应用75％酒精进行运输箱喷洒，从盒中取出样本，并将其置入生物安全柜，核对样本数量，确定样本是否存在泄漏现象。通过磁珠法进行核酸RNA提取，试剂盒中有磁珠洗涤液、磁珠结合液、裂解液等物品。完成核酸DNA提取后，配合PCR反应液，并在荧光定量PCR仪上采集荧光信号，结合荧光信号变化进行RNA检测，最后按照PCR 检测体系进行结果评估。结果分析过程中需进行阴性、阳性质控品结果观察，阴性质控品显示 FAM通道、ROX 通道中无Ct值存在，或Ct值大于40；阳性质控品显示FAM通道、ROX 通道且内标通道Ct值不超过35。若质控品同时满足上述要求，则代表该批次实验有效，否则则代表该批次实验无效，必须进行重新检测。

1.3统计学方法

统计学软件SPSS22.0。

2.结果

4587例发热患者中，其中确诊阳性的患者有21例，确诊阴性的患者有4566例，阳性率是0.46％，阴性率是99.54％。

3.讨论

新型冠状病毒感染后导致的肺部炎症被称作新冠肺炎，也是现今尚未有效控制的一种呼吸道传染病。新型冠状病毒属于股安装包内高度冠状病毒 β 属新成员，是单链 RNA 病毒，具有包膜，颗粒为椭圆形或是圆形，多为多形性体格点，其基因特征和SARS-CoV、MERS-CoV 存在明显差异^[3]。新冠肺炎主要损害人体呼吸系统、免疫系统与生育系统，其严重程度远胜于普通流感病毒，具有较大传染性、传播性以及危害性。想要早期进行有效治疗，首先要提供充足病原学证据，确诊新冠肺炎，然后展开相关治疗。实验室核酸检测是该病首选检测手段，但检测过程中所用检测技术直接影响最终检测结果。实时荧光定量PCR技术是现今比较推崇的新冠肺炎检测技术，在多种病原体检测中应用，具有较高敏感性，较好特异性。但近段时间有媒体报道，很多地区必须进行多次核酸检测，才能确诊阳性病例，对实时荧光定量PCR技术检测结果提出质疑。但从核酸检测整体流程可发现，实时荧光定量PCR技术固然可在实验室检测中发挥显著作用，但实际检测结果的影响环节与影响因素比较多，不同采样部位、样本中的病毒含量、采样管中的保存液成分及体积等，均会对核酸提取效率造成影响。若实验室检测人员技能水平低下，也会对检测结果造成直接影响，最终导致检测结果错误。但从技术角度看，实时荧光定量PCR技术可在核酸检测中发挥显著作用，筛查出阳性患者。

综上可知，在新型冠状病毒实验室检测中应用实时荧光定量PCR技术，价值显著。

参考文献:

[1] 陈培松,何宇婷,黄裕立,等. 不同方式灭活口咽拭子标本对2019新型冠状病毒实时荧光定量PCR检测结果的影响[J]. 中华检验医学杂志,2020,43(4):364-367.

[2] 周帅锋,李世康,陈雨,等. 微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨[J]. 实用预防医学,2020,27(11):1316-1320.

[3] 吕莉琨,李力,刘小畅,等. 天津市COVID-19患者治疗后不同类型标本中新型冠状病毒核酸检测结果分析[J]. 中华微生物学和免疫学杂志,2020,40(6):405-409.