大鼠灌胃给予龙胆泻肝汤后血浆中苦当药酯苷，苦龙胆酯苷的测定

 大鼠灌胃给予龙胆泻肝汤后血浆中苦当药酯苷，苦龙胆酯苷的测定

马鹰,王志刚

黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040

摘要：

龙胆泻肝汤是清泻肝胆实火，清利肝经湿热常用中药方剂，据《医方集解》记载，由龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、车前子、当归、生地黄、柴胡、甘草这十味药组成[1]。其中裂环环烯醚萜苦味成份的苦当药酯苷和苦龙胆酯苷具有十分广泛的药理活性。采用桃叶珊瑚苷作为内标对大鼠灌胃龙胆泻肝汤后体内苦当药酯苷、苦龙胆酯苷的血药浓度进行了测定，并确定了苦龙胆酯苷与苦当药酯苷的达峰时间、最大血药浓度及AUC面积。本实验结果可为龙胆泻肝汤方剂中有效成分测定及定性、定量测定方法提供重要的参考，也为龙胆属其它成分含量测定及其中医药临床应用提供理论和数据支撑。

一、介绍

龙胆泻肝汤，主治清泻肝胆实火，清肝经湿热以及因其引起的众多疾病如头痛、耳朵肿痛、口腔发苦、急性结膜炎或眼白发红、男性尿路感染或前列腺炎、女性带下等；现可用于高血压[2]、肝胆湿热型脂肪肝[3]、带状疱疹[4]、胆囊炎[5]等。近些年研究证明龙胆泻肝汤复方方剂中有效成分可能为环烯醚萜类化合物，环烯醚萜化合物具有多种生物活性，包括血管舒张、保肝、抑制肝炎、抗肝损伤，抗肝增殖，抗炎和抗过敏等作用[6]。研究显示，苦当药酯苷具有抗炎[7]，抗糖尿病活性[8]，抗衰老和神经保护作用[9]，可作为局部抗肿瘤和抗感染的药物[10]。苦龙胆酯苷具有抗菌、抗肝炎、抗胆碱能和化学预防作用，而且已证明其具有抗脂质过氧化作用[10]。本研究对龙胆泻肝汤的主要入血成分苦当药酯苷及苦龙胆酯苷的药代动力学进行探讨，以期为龙胆泻肝汤的体内药效物质研究及相应的质量标准建立提供理论依据。

二、实验动物

雄性Wistar大鼠，体重200g±10g。饲养温度24±2℃，湿度65-75%，光照12小时，避光12小时，自由摄食饮食饮水，适应1个星期。给药前应禁食12小时。

三、苦当药酯苷和苦龙胆酯苷血药浓度的测定

配置对照品溶液：精密称取一定量的苦当药酯苷，苦龙胆酯苷和桃叶珊瑚苷自身稀释成100mg/mL，10mg/mL和1mg/mL的工作液。4℃环境保存。

大鼠灌胃给予龙胆泻肝汤水溶液1g/kg，分别在0.5，1，2，4，6，8，10，12，24，36，48小时于眼静脉丛取血，每个时间点采血0.5mL注入1mg/mL肝素钠溶液浸润过的离心管中。全血3000r/min离心15min，用随行标准曲线计算血药浓度。

四、结果与讨论

内标法测药物血药浓度时，选择合适的内标很重要。苦当药酯苷，苦龙胆酯苷均为环烯醚萜类化合物，我们选择同为环烯醚萜类的桃叶珊瑚苷作为内标，建立了大鼠灌胃龙胆泻肝汤后其血中苦当药酯苷，苦龙胆酯苷的浓度检测方法，并利用建立的方法对血中苦当药酯苷，苦龙胆酯苷的血药浓度进行测定，其药时曲线见图1。其中，苦当药酯苷的达峰时间为4h，最大血药浓度为38.5±10.4ng/ml，其AUC为88.9±22.6ng/ml·h。苦龙胆酯苷的达峰时间为4h，最大血药浓度为78.6±18.5ng/ml，其AUC为223.4±56.1ng/ml·h。该结果可为龙胆泻肝汤方剂中有效成分测定及定性、定量测定方法提供重要的参考，也为龙胆属其它成分含量测定及其中医药临床应用提供理论和数据支撑。

图1苦当药酯苷，苦龙胆酯苷的血药浓度-时间曲线

表1.大鼠血浆中苦龙胆酯苷、苦当药酯苷测定方法日内、日间精密度及准确度

表2. 苦龙胆酯苷、苦当药酯苷在大鼠血浆中的稳定性

参考文献

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[3] 刘瑞祥. 水飞蓟宾胶囊联合龙胆泻肝汤治疗肝胆湿热型脂肪肝疗效[J]. 实用中西医结合临床, 2019, 19(10): 14-16.

[4] 刘云芳,陈华. 龙胆泻肝汤加减配合外搽云南白药粉治疗带状疱疹37例临床观察[J]. 按摩与康复医学, 2020, 11(2): 61-62, 65.

[5] 杨玉双. 龙胆泻肝汤加减治疗慢性胆囊炎（肝胆湿热型）的临床研究[D]. 长春中医药大学, 2019.

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[7] Dai K, Yi X J, Huang X J, et al. Hepatoprotective activity of iridoids, seco-iridoids and analog glycosides from Gentianaceae on HepG2 cells via CYP3A4 induction and mitochondrial pathway[J]. Food Funct, 2018, 9(5): 2673-2683.

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