萝卜硫素在抑制缺血再灌注心肌细胞损伤的保护效果研究

萝卜硫素在抑制缺血再灌注心肌细胞损伤的保护效果研究

金露萍

荆门市第一人民医院 心内科，湖北 荆门448000

【摘要】目的：研究萝卜硫素对再灌注心肌细胞损伤的保护效果。方法：选择150只大鼠心肌细胞按随机原则分为A、B、C3组， A组为常氧条件下的心肌细胞，  B组在A组基础之上实施缺氧3h复氧3h处理，C组为B组基础之上采用5u mol/L SFN预处理的心肌细胞。统计不同措施处理后的3组心肌细胞SOD、LDH、CK-MB、MDA含量变化情况，统计3组细胞的凋亡指数。结果：B组与A组相比细胞LDH、CK-MB、MDA指标水平显著升高，SOD含量显著下降，心肌凋亡指数显著升高[（20.5±1.3）%VS.（2.3±0.8）%]，组间数据比较有统计学差异，P<0.05。C组与B组比较，其细胞SOD 水平显著提高，LDH 、CK-MB、MDA水平显著下降，细胞凋亡指数显著降低[（14.9±2.1）%VS.（20.5±1.3）%]，各指标数据组间比较有统计学差异，P<0.05。结论：萝卜硫素预处理能够对缺血再灌注心肌细胞发挥逆转效果，在降低心肌凋亡指数的过程中对心肌细胞起到保护作用。

【关键词】萝卜硫素；心肌细胞；缺血再灌注；保护

萝卜硫素（SFN）是一种异硫氢酸盐，在十字花科蔬菜中广泛存在，例如我们常见的卷心菜、花菜、芥蓝、北方圆红萝卜等症内植入中都富含大量的萝卜硫素[1]。有研究证实萝卜硫素是一种良好的抗氧化剂，现阶段有大量研究证实萝卜硫素以其良好的抗氧化作用在抑制心肌细胞凋亡方面有良好的应用效果，进而可以对缺血再灌注损伤心肌细胞起到一定的保护作用。本项研究选择大鼠心肌细胞作为观察对象，分析萝卜硫素对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护效果，详情如下：

1资料与方法

1.1材料来源

萝卜硫素(SFN)购自美国Sigma公司，Sprague-Dawley大鼠150只，年龄0-3 d，体重7-8 g，购自北京维通河实验动物技术有限公司，置于15-28℃，湿度45-70%的环境中。保持相对稳定的湿度和温度，为大鼠提供了充足的食物和水。用1%戊巴比妥钠(Sigma， USA)麻醉大鼠，四肢固定于手术台上，皮肤用75%乙醇消毒。取大鼠心脏，放置于磷酸盐缓冲盐水中。除去多余的心房和主动脉后，将心脏切成碎片，用EDTA (GIBCO， USA)在4℃条件下放置0.25%胰蛋白酶过夜。12小时后，心脏组织在DMEM培养，10%的边后卫，在37°C恒温水浴5分钟。然后，心脏组织被放置在1.0毫克/毫升胶原酶Ⅱ和5毫克/毫升白蛋白胶原蛋白消化液在37°C短时消化直到心脏组织完全死亡。细胞团在含有10%胎牛血清的DMEM中重新悬浮。将细胞悬液转移至直径为100 mm的培养皿中，37℃，5% CO2孵育70 min，通过差异粘附和使用5-溴脱氧尿苷(0.1 mmol/L)纯化心肌细胞。将心肌细胞培养于含10% FBS、5% CO2、37℃的DMEM中，原培养基替换为每48h含10% FBS的DMEM。

1.2方法

将所收集的心肌细胞随机分为A、B、C3组，A组为正常培养的心肌细胞未进行缺氧复氧处理，B组为正常培养的心肌细胞经过经过缺氧3h复氧3h处理，C组在B组基础之上于缺氧前1个小时实施采用5.0u mol/L的SFN进行预处理。而B组则在缺氧前1h采用同等数量的生理盐水进行预处理。

1.3指标观察

运用全自动生化分析仪检测3组心肌细胞的lDHCK-MBSOD活性以及MDA的含量；采用Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡，凋亡率=(阳性细胞染色/内皮细胞总数)×100%[2]。

1.4数据统计分析

在数据统计的过程中应用SPASS25.0软件，分别对计量资料和计数资料采用(x±S)、[n(%)]进行表示，并结合计量与计数资料运用t和X2检验。以P=0.05作为组间差异分析标准。

2结果

2.1生化指标统计结果

B组与A组相比细胞LDH、CK-MB、MDA指标水平以及心肌凋亡指数显著升高，SOD含量显著下降，组间数据比较有统计学差异，P<0.05。C组与B组比较，其细胞SOD 、LDH 、CK-MB水平显著提高，MDA水平显著下降，细胞凋亡指数显著降低，各指标数据组间比较有统计学差异，P<0.05。详细数据见下表1：

表1  3组心肌细胞各项生化指标以及细胞凋亡指数数据统计表(x±S)

注：与

A组比较数据具有统计学差异，*P<0.05，与B组比较，数据具有统计学差异，#P<0.05。

3讨论

缺血性心脏病是一种致残和致死率较高的疾病，而对该类疾病在进行治疗的过程中以再灌注治疗为重要方式，然而在进行再灌注的过程中也可能引起患者出现持续性的组织器官损伤，进而导致患者出现心肌伤亡心功能障碍，可能患者因心肌衰竭等多种现象出现死亡，这种现象在临床中被称为缺血再灌注损伤[3]。缺血性心脏病的主要病理过程就是缺血再灌注损伤，在这项研究中，我们发现从SFN可以保护缺血再灌注损伤的大鼠心肌细胞，由增加细胞活性，提升SOD、降低CK和LDH水平，MDA生成达到改善细胞凋亡的目的。

参考文献

[1]李云鹏，杨玉丹.萝卜硫素预处理通过TLR4/MyD88/NF-κB通路对缺氧/复氧大鼠心肌细胞的保护作用[J].郑州大学学报(医学版)，2021，56(02):188-191.

[2]王帅，邢彩耐，邬鹏宇，等.萝卜硫素对心肌缺血再灌注损伤大鼠IRE-1/XBP-1通路及心肌凋亡的影响[J].中国循证心血管医学杂志，2021，13(11):1331-1335.

[3]李玉慈，王玲，罗丹，等.萝卜硫素调控JAK2/STAT3信号通路抑制缺血再灌注心肌细胞损伤的保护机制[J].中国现代应用药学，2018，35(04):552-555.

基金项目：荆门市一般科技计划项目（2020YFYB086）