重庆市涪陵食品药品检验所,重庆 408000
摘要:目的 建立测定麻杏甘石合剂中盐酸麻黄碱含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)。方法 采用AgiLent C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈:0.1%磷酸(8.5:91.5)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为207nm,柱温30℃。结果 盐酸麻黄碱进样量在0.3~3.2μg范围内与峰面积线性关系良好,回归方程y=2490185.09x+58908.73,r=0.9993(n=6),平均加样回收率99.87%,RSD=0.35%(n=6)。结论 RP-HPLC法简便、准确,重现性好,稳定可靠,可用于麻杏甘石合剂的质量控制。
关键词: 反相高效液相色谱法 麻杏甘石合剂 盐酸麻黄碱
Determination of Ephedrine hydrochLoride in Maxingganshi Mixture by HPLC
Chenjian
(FuLing Institute for Food and Drug ControL of Chongqing, FuLing,China 408000)
Abstract:Objective To estabLish a RP-HPLC method for determination of Ephedrine hydrochLoride in Maxingganshi Mixture . methods A Symmetry C18(250mm×4.6mm,5μm) coLumn was used. The acetonitriLe-0.1% phosphoric acid (8.5:91.5) was as the mobiLe phase. The fLow rate was 1.0mL/min. The determination waveLength was at 207 nm and the coLumn temperature was 30℃. ResuLts The Linear range was 0.3~2.5μg for Ephedrine hydrochLoride (0.9993) and the average recoveryrate was 99.87%,RSD=0.35%(n=6).The Linear equation was y=2490185.09x+58908.73. ConcLusion The method is simpLe, accurate, reproducibLe, reLiabLe.It can be used for the quantitative controL of Maxingganshi Mixture .
麻杏甘石合剂由麻黄,杏仁石膏,甘草4味中药组成,用于治疗外感身热,咳逆气急,鼻煽,口渴[1]。为了更好地控制该制剂的质量,笔者通过文献参考[2-3],对该制剂中的主要药物麻黄所含有效成分盐酸麻黄碱作为质量控制指标,采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)测定其含量,并进行方法学考察,为改进和提高麻杏甘石合剂的质量控制标准提供了依据。
1 仪器与试药
安捷伦1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);梅特勒-托利多XP204型和XP205型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。高效液相色谱检测用试剂(色谱纯),其它试剂(分析纯)。绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院提供,供含量测定用,批号为110753-202112);麻杏甘石合剂(批号20210603,20211005,20211006,江西诚志永丰药业有限责任公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:AgiLent C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈:0.1%磷酸(8.5:91.5);流速:1.0mL/min;检测波长:207nm[2];柱温30℃;进样量:10μL。此条件下盐酸麻黄碱与其他成分达到基线分离,分离度>1.5,阴性对照无干扰(图1)
2.2 溶液制备
取样品10ml,精密称定,加甲醇50mL,称定重量,超声处理45分钟,放冷,用甲醇补足重量,过滤,取续滤液5mL,蒸干,加氨试液20mL溶解,用乙醚振摇提取5次(30mL,30mL,20mL,20mL,20mL),蒸干,残渣用盐酸乙醇液(1→20)定容至25mL容量瓶中,作为供试品溶液;精密称取盐酸麻黄碱对照品适量,置棕色瓶中,加0.1moL/L盐酸溶液制成每1mL含40μg的溶液作为对照品溶液[3]。
2.3提取方法选择
经试验比较了超声处理20,30,40,45,50min对盐酸麻黄碱提取的影响,测得样品结果显示45分钟后盐酸麻黄碱不再增加,故选择超声处理45分钟;经试验又比较了乙醚萃取1,2,3,4,5,6次对盐酸麻黄碱提取的影响,测得样品结果显示5次后盐酸麻黄碱不再增加,故选择萃取5次。
2.4方法学考察
线性关系考察:取对照品溶液(40μg/mL),分别进样1,5,10,15,20μL,测定峰面积,以峰面积为纵坐标(X)、进样量为横坐标(Y),作标准线性回归,得回归方程 y=2490185.09x+58908.73,r=0.9993(n=5)。结果表明盐酸麻黄碱进样量在0.3~3.2μg范围内与峰面积线性关系良好。
阴性对照试验:取不含麻黄的阴性对照品溶液,按上述方法记录色谱图,结果在盐酸麻黄碱相对应的位置上未见色谱峰
精密度试验:分别精密吸取对照品溶液10μL,重复进样6次,测得盐酸麻黄碱峰面积的RSD=0.39%,表明本方法精密度良好。
稳定性试验:对同一供试品溶液测定6次,每次间隔2小时进样1次,结果盐酸麻黄碱峰面积的RSD=0.89%,表明供试品溶液在12小时内稳定。
重现性试验:
取样品(批号为20210603)适量,按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,分别依法测定。结果平均峰面积的 RSD=0.80%,表明本方法重现性良好。
加样回收试验:取6份同一批次的已测定含量的样品(批号为20210603 )适量,加入盐酸麻黄碱对照品适量,按供试品溶液制备方法制备供试液,依法测定,结果见表1。
表1 盐酸麻黄碱加样回收试验结果(n=6)
样品含量(μg) | 加入量(μg) | 测得量(μg) | 回收率(%) | X(%) | RSD(%) |
1.1124 | 0.9225 | 2.0321 | 99.70 | 99.87 | 0.35 |
1.0322 | 0.9220 | 1.9592 | 100.54 | ||
1.1430 | 1.3848 | 2.5250 | 99.80 | ||
1.1648 | 1.3846 | 2.5458 | 99.74 | ||
1.0468 | 1.8448 | 2.8834 | 99.56 | ||
1.1102 | 1.8458 | 2.9538 | 99.88 |
2.5 样品含量测定
取3批样品,按供试品溶液制备项下的方法制备样品溶液,依法测定。结果批号为20210603, 20211005,20211006的3批样品中盐酸麻黄碱含量分别为0.3321 ,0.3699 ,0.3631mg/ml(n=3)。
3 讨论
3.1 本试验品碱化后用乙醚回流提取,提取液蒸干,用酸化甲醇液溶解进样,盐酸麻黄碱吸收峰与其他色谱峰又不能有效分离,也未采纳;只有用本法才能简便有效地提取完全盐酸麻黄碱,并与其他成分实现有效分离。
3.2本法对麻黄中的其他生物碱也实现了有效分离,故可用于麻杏甘石合剂中其他生物碱的测定。
3.3 用本方法测定麻杏甘石合剂中盐酸麻黄碱含量简便、准确、快速,专属性强,因此本法可作为该制剂质量控制的一种手段。
参考文献:
[1]中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂)第二册[M]·北京:中华人民共和国卫生部药典委员会编,1991:241
[2]中华人民共和国药典(一部)[M]·北京:化学工业出版式社,2020:333
A
B
C
A 对照品溶液
B 供试品溶液
C阴性对照品溶液
图1 高效液相色谱图