患者结果多参数核查法在丙肝病毒核酸质控中的应用

患者结果多参数核查法在丙肝病毒核酸质控中的应用

郭洪晨

河北中医肝病医院，河北石家庄，050800

［摘 要］目的：寻求一种可以检出丙肝RNA 检测假阴性的质控方法 。方法：对215例抗-HCV阳性患者同一时间检测的HCV-RNA和ALT结果进行分析，计算出HCV-RNA阴性患者ALT值的百分位数P95作为患者结果多参数核查法的控制限。结果：患者结果多参数核查法对121例抗-HCV阳性、HCV-RNA阴性患者的结果进行分析，检出室内质控未检出但可能存在误差的结果7例，其中2例是由于采血不当所致；2例是由于核酸提取失败所致；1例是透析患者抗-HCV假阳性； 2例ALT>41.6U/L的患者经过核对，是合并肝癌所致。结论： 患者结果多参数核查法作为室内质控的有益补充，用于HCV-RNA假阴性的检出是可行的。

关键词：患者结果多参数核查法；丙肝病毒核酸；质控

以Sofosbuvir为代表的直接抗病毒药物的研发成功，标志着慢性HCV 感染者的抗病毒治疗已经进入直接抗病毒药物（direct antiviral  agents ,DAA）的泛基因型时代[1]，各种原因导致的HCV-RNA假阴性却给HCV 感染者的治疗带来困扰[2]，笔者在多年的工作中发现通过使用患者结果多参数核查法可以检出部分HCV-RNA假阴性，报告如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

    对2019年1-6月在我院接受检查的抗-HCV阳性HCV 感染者同一时间检测的HCV-RNA和ALT结果进行分析，排除甲、乙、丁及戊型肝炎病毒患者，排除酒精、药物、自身免疫性、代谢性等病因所致肝功能损伤患者的数据，得到有效数据215例，其中男96例，女119例，19～75岁，平均39岁，诊断符合丙型肝炎防治指南(2019年版)标准。

1.2  仪器和试剂

1.2.1  HCV-RNA检测：仪器选用杭州安誉科技有限公司AGS4800实时荧光定量PCR仪,试剂使用广州达安基因股份有限公司生产的HCV-RNA定量检测试剂；Smart32自动核酸提取仪及配套试剂。

1.2.2 ALT检测：仪器贝克曼AU680全自动生化分析仪及配套试剂。

1.2.3 抗-HCV检测：仪器迈瑞CL-2000i全自动化学发光免疫分析仪 及配套试剂。

1.3  观察指标

收集患者空腹静脉血两份，每份3ml置于促凝管中，经4000r/min 离心10分钟，取上层血清分别用于HCV-RNA载量和ALT的检测（检测限，＜1000IU/ml）。所有操作和结果判定严格按照试剂说明书进行。

根据患者HCV-RNA载量高低分为5组，分别是HCV-RNA<102 IU/ml组（A组）、102 -104 IU/ml组（B组）、104-105IU/ml组（C组）、105-106IU/ml组（D组）、>106 IU/ml组（E组）。比较5组患者HCV-RNA载量和ALT均值、ALT异常率的关系。

取HCV-RNA<103 IU/ml组（A组）ALT检测值的百分位数P95作为患者结果多参数核查法的控制限。

1.4  质控方法

1.4.1  室内质控使用Levey-Jennings质控图，均值±2S为警告限，均值±3S为失控限。

1.4.2 患者结果多参数核查法流程如下：

① 如果室内质控结果在控，则进行②；如果失控，查找原因，改正后室内质控结果在控，进行②。

② 患者ALT水平结果判断HCV-RNA<100是否可信， 具体如下：如果患者HCV-RNA<100，ALT<41.6U/L,该患者HCV-RNA结果可信，向临床发报告；ALT≥41.6U/L, 该患者HCV-RNA结果暂定不可信，则进行③。

 ③ 和临床联系询问患者病情和用药情况,如果该患者HCV-RNA结果和临床表现相符，则向临床发报告；如果明显不符，重新采血复查，复查必要时复查抗-HCV和ALT后，确认无误后向临床发报告。

1.5  统计学分析

实验数据采用SPSS 20.0进行统计学分析，计数资料用百分比(%)表示，数据比较采用χ2检验；计量资料采用均值±标准差（x±s）表示，数据比较采用t检验，相关性分析采用Logostic回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2   结果

2.1  HCV RNA载量和ALT均值、异常率关系

在215例抗-HCV阳性血清中，143例（66.5%）HCV-RNA为阴性，72例（33.5%）HCV-RNA为阳性，HCV-RNA<103 IU/ml组（A组）ALT检测值的百分位数P95为41.6 U/L。

Logostic回归分析显示HCV RNA载量和ALT水平变化无明显相关性（r=0.348，P>0.05）与文献报道一致[3]；各组ALT均值分别为24.64、37.4、65.36、82.4、100.1，Logostic

回归分析显示HCV RNA载量和各组ALT均值呈正相关（r=0.963，P<0.05）；各组ALT异常率分别为9.79%、33.35、89.5%、94.7%、87.1%, Logostic回归分析显示HCV RNA载量和各组ALT异常率呈正相关（r=0.881，P<0.05）与文献报道一致[4]。见表-1。

2.2  质控效果

通过患者结果多参数核查法对3个月121例抗-HCV阳性、HCV-RNA阴性患者的结果进分析,检出室内质控未检出但可能存在误差的结果7例，其中2例是由于从肝素封管的留置针中采血所致；2例是由于核酸提取失败所致；1例是透析患者抗-HCV假阳性； 2例经过复核HCV-RNA阴性，ALT>41.6U/L，是合并肝癌所致。

表-1                  HCV RNA载量和ALT均值、异常率关系

3  讨论

利用质控品进行质量控制的方法是最广泛最常用的质量控制形式，可以监测方法学、仪器、试剂、外部环境及操作过程等各种综合因素作用下检测结果的稳定性或重复性，如果使用定值质控品,还可以反映检测结果的准确性。然而，这种质控方法存在一些缺陷和不足：1、某些质控品不能完全反映患者标本的质量特征，或多或少的存在基质效应；2、质控品有一定的使用期限，某些质控品性质不稳定.、容易变质；3、只能监测分析中质量，而对分析前即患者的用药情况，标本的采集、标记、运输、保存与处理等环节起不到监控作用。 所以应该考虑其他一些质控方法作为补充。

HCV-RNA是单链，不稳定，不耐碱，不耐高温。自然环境中，RNA酶又非常多、活性强，如果保存运输和保存不当，很容易把HCV-RNA降解掉。  常规室内质控对这种分析前因素导致的误差起不到监控作用。

使用患者一个标本多个项目的检验结果或多次标本的同一项目的检验结果进行比较分析，从而判断当次检验结果的准确性，这种质控方法就是患者结果多参数核查法，可以弥补室内质控无法检出分析前因素对检验结果影响的不足，首先，RNA只有单链，不稳定。
其次，RNA的2-OH还在，不耐碱，容易进攻自身的肽键。
然后，RNA酶非常多，活性强，在自然界中。相对的，DNA酶激活的条件就严格很多。
最后，RNA不耐高温对HCV-RNA假阴性有一定的检出作用。

另外，随着检验人员临床知识的丰富、计算机和实验室管理系统的配备及完善， 发挥患者结果多参数核查法在HCV-RNA检验质控中的作用，进一步提高HCV-RNA检验结果的有效性和准确性是可行的。

4   参考文献

［1］魏来，段钟平，王贵强，等．丙型肝炎防治指南（2019年版）[J] ．中华传染病杂志，2020，38（1）：9-28．  

［2］严海燕，欧阳颖，刘晓强，等．HCV-cAg、HCV—RNA及HCV-Ab联合检测降低丙型肝炎的误诊率[J]．中国卫生检验杂志，2012(22)：2412—2414．

［3］罗天永，李媛媛，吴  君．丙肝患者血清HCV RNA和ALT的相关性[J]．贵州医科大学学报，2017，42（12）：1427-1430．

［4］薛  丽，黄  芳，张彦平，等．丙肝患者血清HCV—RNA含量与肝功能及血常规指标的相关性[J]．现代检验医学杂，2017，32（5）：110-114．