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摘要:目的 探究黄芪白术配伍前后黄芪化学成分。方法 运用高效液相指纹图谱分析,以加样回收率试验考察HPLC的严谨性。结果 加样回收率试验结果中平均回收率为99.6%,表明HPLC严谨性高。并且,产自内蒙古的黄芪白术配伍中,其黄芪甲苷含量最高。结论 在黄芪白术配伍前后,黄芪主要化学成分是黄芪甲苷,内蒙古产地的药材含量最高。
关键词:黄芪;白术;配伍
在中医辨证论治中,复方配伍是一种具有中医特色的用药模式,通常为相对固定的两种或者是三种配伍。在药物配伍中,有着一定的规律,开展对其的深入探究,可了解其内涵,对临床医生与药师可发挥引导作用。黄芪属于豆科植物,有利尿排毒、补气固表等作用,有效成分为皂苷、甲苷、黄酮类化合物。白术是菊科植物,可发挥健脾益气、止汗安胎等作用。其药用部位是根茎,具有挥发油、倍半萜内酯化合物等。黄芪归脾经、肺经,有补气升阳,益卫固表之功,白术归脾经、胃经,有补气健脾之功[1]。在临床用药中,常将黄芪与白术配伍。本研究对黄芪白术配伍对黄芪甲苷的影响探索。
1.仪器与试药
1.1仪器与试剂
运用高效液相色谱仪。试剂应用甲醇、乙腈。超纯水以及黄芪甲苷对照品。
1.2分析样品
黄芪药用部位是豆科植物蒙古黄芪或者是膜荚黄芪的根。白术药用部位是菊科苍术属植物的根茎。
2.结方法与结果
2.1色谱条件
取10μL样品进样量或者是对照品溶液,运用色谱柱,在乙腈与磷酸的流动相中,流速是1mL/min,柱温为30℃,结合高效液相指纹图谱洗脱程序试验。
2.2对照品溶液制备
取黄芪甲苷对照品2.5mg,置于量瓶中,甲醛溶解,制成0.5mg/mL对照品溶液。
2.3供试品溶液制备
黄芪白术按照5∶3配伍,运用回流法煎煮,先浸泡,之后煮沸,文火45min,取100mL药液,在60℃下减压压缩,定容到50mL,折合柴胡黄芩药物水煎液浓度0.2g/mL。取5mL柴胡黄芩浓缩液以甲醇定容10mL,混合均匀,取2mL离心取上清液在0.45μm超微膜滤过后就可制备黄芪白术配伍供试品溶液。也制备单纯黄芪供试品溶液。
2.4专属性试验
运用已经制备的供试品溶液,利用薄层层析方式对黄芪、白术开展专属性试验,其各自的专属性良好。
2.5线性范围试验
运用对照品溶液,按照相应的量编号并连续进样,开展试验。
2.6中间精密度试验
吸取10μL同一供试品溶液,连续进样5次,测量精密度。
2.7供试品溶液稳定性试验
运用10μL相同的供试品溶液,在配置之后,放置0、2、4、8、16、24、48小时之后进样检测。在48小时之中,供试品溶液是基本稳定的。
2.8重复性试验
使用10μL供试品溶液,在相同色谱条件、相同液相分析仪上检测,重复性良好。
2.9回收率试验
取6份供试品溶液,每份大约2.5g黄芪,制备供试品溶液,并加入对照品溶液,计算加样回收率。加样回收率其结果中,平均回收率是99.6%,RSD为2%,表明加样回收率试验良好,HPLC严谨性高。见表1。
表1 加样回收率试验结果
编号 | 取样量 | 原有量 | 加入量 | 测得量 | 回收率 | 平均回收率 | RSD |
A | 2.515 | 1.036 | 1.42 | 2.360 | 98.10 | 99.60 | 2.0 |
B | 2.523 | 1.042 | 1.42 | 2.377 | 99.01 | ||
C | 2.516 | 1.039 | 1.42 | 2.409 | 99.48 | ||
D | 2.509 | 1.036 | 1.42 | 2.401 | 99.13 | ||
E | 2.518 | 1.039 | 1.42 | 2.432 | 100.10 | ||
F | 2.526 | 1.043 | 1.42 | 2.431 | 101.82 |
2.10样品测定结果
结合图1-图4可知,在对照品溶液、黄芪供试品溶液、黄芪白术供试品溶液以及缺黄芪阴性对照液之中,缺黄芪阴性对照液并无干扰,黄芪甲苷与其与成分基线分离良好。如表2所示,在3个不同产地中,都显示黄芪白术配伍之后,黄芪的化学成分,黄芪甲苷含量出现一定的增加。其中,药材产地为内蒙古的黄芪甲苷含量为最高。
图1 黄芪阴性对照溶液指纹图谱
图2 黄芪甲苷对照品溶液指纹图谱
图3 黄芪供试品溶液指纹图谱
图4 黄芪白术供试品溶液指纹图谱
表2 黄芪含量测定结果
序号 | 样品 | 黄芪甲苷 | 药材产地 |
1 | 黄芪 | 0.470 | 内蒙古 |
2 | 黄芪-白术 | 0.513 | 内蒙古 |
3 | 黄芪 | 0.378 | 山西 |
4 | 黄芪-白术 | 0.479 | 山西 |
5 | 黄芪 | 0.418 | 黑龙江 |
6 | 黄芪-白术 | 0.497 | 黑龙江 |
3.讨论
在开展对黄芪甲苷含油量进行测定的方式有薄层扫描法、高效液相色谱-紫外检测法以及高效液相色谱-蒸发光散检测法。因为黄芪甲苷成分是紫外末端吸收,利用高效液相色谱-紫外检测法检测时流动相溶剂干扰严重,基线不够稳定。但,运用高效液相色谱-蒸发光散检测法检测并无紫外吸收或末端吸收成分,不会受到流动相溶剂作用,基线平稳,准确度与灵敏性高,操作简单,在本研究中运用此方式分析。
总之,黄芪白术配伍前后,黄芪甲苷与其与成分的基线分离良好,在内蒙古产地的黄芪白术配伍中,黄芪甲苷含量是最高的。
参考文献:
[1]翟孟凡,贾小强,王泽鹏,张娇.“黄芪-白术”药对治疗功能性便秘的网络药理学机制[J].世界中医药,2021,1610:1514-1519.薛老师 15226912038成都市武侯区人民南路4段27号商鼎国际1号楼B座25楼(1本)