超高效液相色谱-串联质谱法快速测定稻虾中多类兽药残留

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定稻虾中多类兽药残留

张辰辰1，张琳1，冯凯1，周一冉1，孟娟2，孔小华1

(1济宁市食品药品检验检测研究院山东济宁272071；2济宁市渔业发展和资源养护中心 山东济宁  272071）

摘要：建立稻虾中11种兽药（氯霉素类、喹诺酮类、四环素类）同时测定的超高效液相色谱-串联质谱法。样品以0.2%甲酸乙腈溶液提取，经OasisPRiME HLB柱净化后用Waters HSS T3柱分离，在ESI+/-多反应监测模式下采集，外标法定量。11种兽药在各自范围内线性关系良好，相关系数r>0.996，方法定量限低于5μg/kg，在5、10、20μg/kg加标水平下回收率为72.5～114.5%，RSD为1.9～7.0%。该方法简便、灵敏，适用于稻虾中多类兽药的快速测定和筛查。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱法；兽药；稻虾

引言稻虾综合种养是为适应新时期农业农村发展要求、稳定水稻生产、促进渔业增效，在原稻田种植的基础上发展的综合种养技术。在济宁市鱼台周边县区得到大力推广。在稻虾种养过程中由于疾病防控和饲料带入的兽药，对产品质量造成潜在风险，已受到广泛关注[1]。当前兽残检测标准中常用的固相萃取等技术存在前处理过程繁琐、试验周期时间长[2]等问题，检测效率低；而近年来兴起的多残留通过式净化前处理技术在兽药残留分析中获得了良好的应用。本文针对龙虾中食品安全风险较高的氯霉素类、喹诺酮类、四环素类残留，采用同步通过式净化技术，建立可靠的稻虾中高风险药物同时快速筛查的方法，为稻虾产品药物残留风险监测、质量安全监管及隐患排查提供技术支撑。

1 实验部分

1.1仪器

Exion LC-triple quad 3500液质联用仪（美国SCIEX）；高速冷冻离心机（湖南湘仪）；全自动平行浓缩仪（美国Labtech）；超纯水仪（美国Millipore）；XSE104天平（梅特勒-托利多）。

1.2试剂

标准物质：土霉素/金霉素/四环素/强力霉素、喹诺酮类、氯霉素/甲砜霉素/氟苯尼考（FirstStandard100μg/mL）；试剂：乙腈（色谱纯，Fisher）；甲酸（分析纯，阿拉丁）；Waters Oasis PRiME HLB 柱（3mL/60mg）。试验样品来源于我市50个养殖户。

1.3基质标准工作液制备

采用“1.5”项下方法处理阴性样品获取基质空白溶液，再采用上述标准溶液配制成系列混合标准工作液（2μg/L～250μg/L（喹诺酮及四环素类）、0.5μg/L～50μg/L（氯霉素类））。

1.4 色谱和质谱条件

Waters HSS T3柱（1.8μm，100mm×2.1mm）；流动相：0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱：0~1min90% A、1~6min90%~5% A、6-8min 5%A~90%A；流速：0.3mL/min，进样量：5μL.扫描模式：MRM，ESI+/-，电喷雾电压：5500V(+)/4500 V(-)；离子源温度：550 ℃。去簇电压（DP）和碰撞气能量（CE）见表1。

1.5实验方法

将样品去头、壳，取可食部分打碎成肉泥。称取5g样品于50mL离心管中，加10.0mL 含0.2%甲酸的乙腈-水（80:20）溶液，涡旋10min，8000r/min离心8min。取上清液过净化柱，收集滤液5.0mL，N2下吹干，加1.0mL初始流动相复溶，过0.22μm滤膜，待测。

2结果与分析

2.1前处理方法优化

研究表明乙腈对喹诺酮及四环素类药物共提取效果良好，且甲酸能够提升其对药物的提取能力[4]，分析发现乙腈中添加适量水可有效改善基质的蛋白沉淀效应，最终确定了80%乙腈-水提取效果较佳。在提取液中加入0.1%、0.2%、0.5%甲酸，结果表明0.2%甲酸对多数组分具有最优回收率。

2.2质谱条件优化

对质谱分析中对各物质的DP和CE进行优化，结合分析灵敏度和特征离子专属性确定最优参数（见表1）。

表1  监测离子对优化参数

2.3方法学验证

水产品中兽药检测易受到基质效应的干扰和影响[5]，因此本法采用阴性基质配制工作曲线。各组分在各自范围内线性关系良好，r≥0.996。以10倍信噪比确定各物质定量限（0.29～4.5 μg/kg），均低于同类国家标准方法。在5、10、20μg/kg水平下回收率为72.5～114.5%，RSD为1.9～7.0%，表明方法精密度和准确度良好（见表2）。

表211种兽药线性范围、线性方程、相关系数、定量限、回收率及精密度

2.5样品测定

本研究抽取了我市养殖户的50个龙虾样本验证本法的可靠性。其中1个样本检出恩诺沙星，含量为5.11μg/kg；采用国标方法进行对比测定[2]，结果为5.08μg/kg，一致性较高。

3结论

本法采用0.2%甲酸乙腈提取、OasisPRiME HLB通过式净化技术去除干扰物，能够有效提升对稻虾中多种兽药的提取能力、保证分析准确性并大幅提高分析效率。方法验证结果表明本法具有良好的线性关系、较低的检出限和定量限，及满意的精密度和准确度。表明本方法具有快速、简单、灵敏度高、准确性和重复性好、基质适用性强等特点，适用于稻虾中多类兽药的快速测定和筛查。

参考文献

[1]沈可伊，邹晓霜，王军. 液相色谱-串联质谱测定虾肉中4种兽药残留及其热稳定性分析[J/OL]．食品与发酵工业.

[2]GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法[S]. 

[3]陈兴连，林涛，刘兴勇，等. 超高效液相色谱-串联质谱法快速测定鱼和虾中多类禁、限用兽药残留[J].色谱，2020，38(5) :538-546.

[4]陶昕晨，黄和. 水产品中氯霉素类药物残留检测技术的研究进展[J]. 生物技术，2012，39( 7) : 94-98.

[5]王立琦，贺利民，曾振灵，等. 液相色谱-串联质谱检测兽药残留中的基质效应研究进展[J]. 质谱学报，2011，31( 6) : 321-332.