大肠菌群测试片在化妆品微生物检测中的应用研究

大肠菌群测试片在化妆品微生物检测中的应用研究

曾耀婵

广东省保化检测中心有限公司  广东广州  510000

摘要：目的：对大肠菌群测试片在化妆品微生物检测中的应用价值进行分析。方法：2021年3月至2022年3月，以密集抽样调查的方法，从市场在售的化妆品中，随机抽取15份，利用《化妆品卫生规范》、大肠菌群测试片，对化妆品中的微生物进行检测。结果：《化妆品卫生规范》中的微生物检测结果显示，在使用前，本研究选取的样品合格率均为100%，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的合格率均为100%。而开封3个月后，样品合格率是86.67%。《化妆品卫生规范》检测方法和大肠菌群测试片的检测结果差异不显著，两者具有高度一致性。结论：化妆品开封后，随时间延长，微生物数量会逐渐增多。用大肠菌群测试片来展开化妆品微生物检测，具有便捷、简单、快速、准确的优势，值得推广。

关键词：大肠菌群测试片；化妆品；微生物检测

在国民经济发展迅速的背景下，人民群众的生活水平逐渐提升，与此同时，人民对于物质文化的需求不断提高，这促使化妆品市场发展前景广阔[1]。近年来，我国化妆品行业迅速发展，各种新款化妆品层出不穷，同时化妆品安全问题也备受关注。因化妆品中所含营养成分丰富，种类较多，因此是微生物生长的有利环境[2]。致病微生物的存在，不仅会导致化妆品变质、腐败，还可能在不同程度上威胁到人体的健康，因此，加强化妆品微生物检验十分重要。过去，化妆品微生物的检验，是按照《化妆品卫生规范》中的平板计数法来完成，不过这一方法比较耗时耗力，检测费用较高。探索一种更为便捷、高效的微生物检测方法，是化妆品市场发展下出现的新需求。

一、大肠菌群测试片概述

大肠菌群测试片属于快速检测试纸法，目前在食品检测中已经得到广泛应用。这一测试片为美国3M公司发明，是实施菌落计数的干膜，共有上下两层薄膜，上层的聚丙烯薄膜中，含有冷水可溶性凝胶、指示剂及粘合剂，下层的聚乙烯薄膜中，含大肠菌群生长中需要的培养基。其不仅能对大肠埃希菌进行检测，同时还能对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌进行检测。大肠菌群测试片检测周期短，操作方便，在微生物检测中应用时，能缩短检测所用时间，简化操作过程，经济效益显著。

二、大肠菌群测试片在化妆品微生物检测中的应用方法

1.材料与方法

1.1测试样本

2021年3月至2022年3月，以密集抽样调查的方法，从市场在售的化妆品中，随机抽取15份，其中洗面奶3份、精华霜5份、爽肤水3份、乳液3份，眉笔1份。选取的化妆品均为未开封状态，均在保质期内。

1.2培养基与试剂

所用培养基为卵磷脂、吐温80-营养琼脂；营养琼脂；营养肉汤。所有培养基均购自北京路桥技术有限公司。所用大肠菌群测试片为美国3M公司制造。

2.检测方法

2.1《化妆品卫生规范》中的检测方法

每个待检测样品，从2个包装单位以上样品中采集10mL或10g样品，做好登记，编写检验序号，尽快送检。将加入到已经严格灭菌的生理盐水中（90mL），制作为1:10的待检液，之后根据《化妆品卫生规范》中的微生物检测方法，展开微生物检测工作，注意从打开包装，到完成全部检验，需严格执行无菌操作流程，避免微生物扩散或再污染。

2.2大肠菌群测试片的应用

将所覆盖胶片揭起，取样品1mL，滴加在纸片的中央，盖回胶片，在上层膜中央放置压板，轻轻下压，促使样品在培养基上覆盖均匀。行1min静置，待培养基内凝胶骨化。将测试片送入培养箱，注意测试片中，透明的一面向上放置，培养温度为32.5℃，时间为48h。

3.测试结果

根据《化妆品卫生规范》中的微生物检测结果显示，在使用前，本研究选取的样品合格率均为100%，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的合格率均为100%。在应用3个月之后，样品合格率是86.67%（13/15），其中各项微生物检测合格率为：大肠埃希菌86.67%，金黄色葡萄球菌93.33%，枯草芽孢杆菌93.33%。开封3个月后，《化妆品卫生规范》检测方法和大肠菌群测试片的检测结果差异不显著，具体见表1。从这一结果可以看出，这两种检查方法具有较高的一致性。

表1：化妆品卫生规范》检测方法和大肠菌群测试片的检测结果比较

三、大肠菌群测试片的应用优势

化妆品是化学合成物，可以通过多种作用机制，对人体发挥保护、美化的效果，如不同化妆品有抗衰老、美白、补水、润肤等不同功效，因此广受人民群众的欢迎。不过因这一类产品为化学合成，也可能存在一些有害物质，可以对人体皮肤造成刺激，轻则可引起皮肤水肿、斑疹、瘙痒，重可引发严重过敏反应，给人的皮肤造成极大损害

[3]。一些化妆品生产过程把控不严，在微生物控制方面并不合格，而有害微生物的污染，会导致化妆品应用之后，损害人民的皮肤健康，因此，必须加强化妆品的微生物检测。

过往化妆品微生物检测所用方法为平板培养法，虽然准确性较高，但工作量较大，需要长时间的培养与检测才能得出结果[4]。近年来，研究人员不断探索更为迅捷的检测方式。大肠菌群测试片是自带培养基、染色剂及显色剂的测试片，在测试片上，阳性菌落会呈现为粉红色或红色，和测试片的底色反差很大，极易判别。且这一类测试片上形成的菌落，大小均匀，当样品适当稀释后，菌落与菌落彼此不会发生重叠，因此计数十分方便，计数结果准确性较高。而且，大肠菌群测试片无需应用大量玻璃器皿，操作十分方便，出结果速度快，因此近年来在食品、化妆品行业微生物检测中，得到了广泛应用。

本次研究中，笔者随机抽取的15份样品，经过传统检测方法和大肠菌群测试片两种方法的检测，发现这两种方法的检测结果具有高度一致性。由此可见，大肠菌群测试片的检测结果，和传统的平板培养法结果类似，因此可以取代传统方法，在化妆品微生物检测中加以运用。另外，本研究发现，化妆品开封之后3个月，微生物数量增多，这提示我们，在化妆品开封之后，应尽快用完，而若开封后长时间不用，需要及时处理。

结束语

化妆品安全是人民群众的基本诉求之一，要满足化妆品安全，必须重视微生物的检测工作。在快节奏的现代生活中，化妆品行业发展迅速，化妆品微生物检测工作，正朝着简单、快速、可靠的方向发展。在这一背景下，传统的平板计数法因为耗时耗力，必然会被更为简便、迅捷的检测方式所取代。大肠菌群测试片因具有快速、简便、操作方便的优势，在微生物检测中得到了广泛应用，相信必然会成为微生物检测的有效方法，为化妆品产业的发展提供支持。

参考文献：

[1]李婷,沈颖,蔡俊松,刘艺茹,陈怡文,刘骥,姚粟.ATP生物荧光增幅法在化妆品微生物检测中的适用性研究[J].日用化学工业,2021,51(06):513-521+527.

[2]隆婷,李晶,王梓烟,林婕,王亚婷.化妆品微生物污染检测技术及应对策略[J].中国化妆品,2021(04):122-127.

[3]翟磊,葛媛媛,崔生辉,等.ATP生物荧光增幅法在化妆品微生物检测中的验证研究[J].日用化学工业,2020,50(11):771-775+782.

[4]范月娜.化妆品中耐热大肠菌群检验能力的验证结果与分析[J].质量安全与检验检测,2021,31(05):20-22.