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摘要:目的:对大肠菌群测试片在化妆品微生物检测中的应用价值进行分析。方法:2021年3月至2022年3月,以密集抽样调查的方法,从市场在售的化妆品中,随机抽取15份,利用《化妆品卫生规范》、大肠菌群测试片,对化妆品中的微生物进行检测。结果:《化妆品卫生规范》中的微生物检测结果显示,在使用前,本研究选取的样品合格率均为100%,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的合格率均为100%。而开封3个月后,样品合格率是86.67%。《化妆品卫生规范》检测方法和大肠菌群测试片的检测结果差异不显著,两者具有高度一致性。结论:化妆品开封后,随时间延长,微生物数量会逐渐增多。用大肠菌群测试片来展开化妆品微生物检测,具有便捷、简单、快速、准确的优势,值得推广。
关键词:大肠菌群测试片;化妆品;微生物检测
在国民经济发展迅速的背景下,人民群众的生活水平逐渐提升,与此同时,人民对于物质文化的需求不断提高,这促使化妆品市场发展前景广阔[1]。近年来,我国化妆品行业迅速发展,各种新款化妆品层出不穷,同时化妆品安全问题也备受关注。因化妆品中所含营养成分丰富,种类较多,因此是微生物生长的有利环境[2]。致病微生物的存在,不仅会导致化妆品变质、腐败,还可能在不同程度上威胁到人体的健康,因此,加强化妆品微生物检验十分重要。过去,化妆品微生物的检验,是按照《化妆品卫生规范》中的平板计数法来完成,不过这一方法比较耗时耗力,检测费用较高。探索一种更为便捷、高效的微生物检测方法,是化妆品市场发展下出现的新需求。
一、大肠菌群测试片概述
大肠菌群测试片属于快速检测试纸法,目前在食品检测中已经得到广泛应用。这一测试片为美国3M公司发明,是实施菌落计数的干膜,共有上下两层薄膜,上层的聚丙烯薄膜中,含有冷水可溶性凝胶、指示剂及粘合剂,下层的聚乙烯薄膜中,含大肠菌群生长中需要的培养基。其不仅能对大肠埃希菌进行检测,同时还能对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌进行检测。大肠菌群测试片检测周期短,操作方便,在微生物检测中应用时,能缩短检测所用时间,简化操作过程,经济效益显著。
二、大肠菌群测试片在化妆品微生物检测中的应用方法
1.材料与方法
1.1测试样本
2021年3月至2022年3月,以密集抽样调查的方法,从市场在售的化妆品中,随机抽取15份,其中洗面奶3份、精华霜5份、爽肤水3份、乳液3份,眉笔1份。选取的化妆品均为未开封状态,均在保质期内。
1.2培养基与试剂
所用培养基为卵磷脂、吐温80-营养琼脂;营养琼脂;营养肉汤。所有培养基均购自北京路桥技术有限公司。所用大肠菌群测试片为美国3M公司制造。
2.检测方法
2.1《化妆品卫生规范》中的检测方法
每个待检测样品,从2个包装单位以上样品中采集10mL或10g样品,做好登记,编写检验序号,尽快送检。将加入到已经严格灭菌的生理盐水中(90mL),制作为1:10的待检液,之后根据《化妆品卫生规范》中的微生物检测方法,展开微生物检测工作,注意从打开包装,到完成全部检验,需严格执行无菌操作流程,避免微生物扩散或再污染。
2.2大肠菌群测试片的应用
将所覆盖胶片揭起,取样品1mL,滴加在纸片的中央,盖回胶片,在上层膜中央放置压板,轻轻下压,促使样品在培养基上覆盖均匀。行1min静置,待培养基内凝胶骨化。将测试片送入培养箱,注意测试片中,透明的一面向上放置,培养温度为32.5℃,时间为48h。
3.测试结果
根据《化妆品卫生规范》中的微生物检测结果显示,在使用前,本研究选取的样品合格率均为100%,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的合格率均为100%。在应用3个月之后,样品合格率是86.67%(13/15),其中各项微生物检测合格率为:大肠埃希菌86.67%,金黄色葡萄球菌93.33%,枯草芽孢杆菌93.33%。开封3个月后,《化妆品卫生规范》检测方法和大肠菌群测试片的检测结果差异不显著,具体见表1。从这一结果可以看出,这两种检查方法具有较高的一致性。
表1:化妆品卫生规范》检测方法和大肠菌群测试片的检测结果比较
微生物 | 样本量 | 均值 | 标准差 | 95%置信区间 | 相关系数 | P |
大肠埃希菌 | 15 | 5.124 | 0.156 | 2.189~5.637 | 0.787 | 0.185 |
金黄色葡萄球菌 | 15 | 3.815 | 0.574 | 3.007~6.181 | 0.794 | |
枯草芽孢杆菌 | 15 | 2.936 | 0.239 | 2.954~5.167 | 0.853 |
三、大肠菌群测试片的应用优势
化妆品是化学合成物,可以通过多种作用机制,对人体发挥保护、美化的效果,如不同化妆品有抗衰老、美白、补水、润肤等不同功效,因此广受人民群众的欢迎。不过因这一类产品为化学合成,也可能存在一些有害物质,可以对人体皮肤造成刺激,轻则可引起皮肤水肿、斑疹、瘙痒,重可引发严重过敏反应,给人的皮肤造成极大损害
[3]。一些化妆品生产过程把控不严,在微生物控制方面并不合格,而有害微生物的污染,会导致化妆品应用之后,损害人民的皮肤健康,因此,必须加强化妆品的微生物检测。
过往化妆品微生物检测所用方法为平板培养法,虽然准确性较高,但工作量较大,需要长时间的培养与检测才能得出结果[4]。近年来,研究人员不断探索更为迅捷的检测方式。大肠菌群测试片是自带培养基、染色剂及显色剂的测试片,在测试片上,阳性菌落会呈现为粉红色或红色,和测试片的底色反差很大,极易判别。且这一类测试片上形成的菌落,大小均匀,当样品适当稀释后,菌落与菌落彼此不会发生重叠,因此计数十分方便,计数结果准确性较高。而且,大肠菌群测试片无需应用大量玻璃器皿,操作十分方便,出结果速度快,因此近年来在食品、化妆品行业微生物检测中,得到了广泛应用。
本次研究中,笔者随机抽取的15份样品,经过传统检测方法和大肠菌群测试片两种方法的检测,发现这两种方法的检测结果具有高度一致性。由此可见,大肠菌群测试片的检测结果,和传统的平板培养法结果类似,因此可以取代传统方法,在化妆品微生物检测中加以运用。另外,本研究发现,化妆品开封之后3个月,微生物数量增多,这提示我们,在化妆品开封之后,应尽快用完,而若开封后长时间不用,需要及时处理。
结束语
化妆品安全是人民群众的基本诉求之一,要满足化妆品安全,必须重视微生物的检测工作。在快节奏的现代生活中,化妆品行业发展迅速,化妆品微生物检测工作,正朝着简单、快速、可靠的方向发展。在这一背景下,传统的平板计数法因为耗时耗力,必然会被更为简便、迅捷的检测方式所取代。大肠菌群测试片因具有快速、简便、操作方便的优势,在微生物检测中得到了广泛应用,相信必然会成为微生物检测的有效方法,为化妆品产业的发展提供支持。
参考文献:
[1]李婷,沈颖,蔡俊松,刘艺茹,陈怡文,刘骥,姚粟.ATP生物荧光增幅法在化妆品微生物检测中的适用性研究[J].日用化学工业,2021,51(06):513-521+527.
[2]隆婷,李晶,王梓烟,林婕,王亚婷.化妆品微生物污染检测技术及应对策略[J].中国化妆品,2021(04):122-127.
[3]翟磊,葛媛媛,崔生辉,等.ATP生物荧光增幅法在化妆品微生物检测中的验证研究[J].日用化学工业,2020,50(11):771-775+782.
[4]范月娜.化妆品中耐热大肠菌群检验能力的验证结果与分析[J].质量安全与检验检测,2021,31(05):20-22.